文/蘇麗評

完美實現(xiàn)全自動凈化Lab Tech A-Station全自動平臺實現(xiàn)全自動凈化

文/蘇麗評

此法運用單一乙腈緩沖液進行浸提，再用無水硫酸鎂與醋酸鈉震蕩促使其分層；凈化過程運用簡單、快速、價格低廉的分散固相萃取技術(shù)，PSA（primary secondary amine）去除組分中脂肪酸，無水硫酸鎂去除水分，得到的凈化液可用 LC-MS或GC-MS進行農(nóng)藥多殘留分析。

QuEChERS法中使用分散固相萃?。╠SPE）對萃取液進行凈化，雖然該方法具有較高回收率且操作簡單快速，但是其自身同樣存在一定缺陷，那就是凈化程度并沒有傳統(tǒng)的SPE高，而且不易實現(xiàn)自動化。傳統(tǒng)的SPE存在操作設(shè)備復(fù)雜、步驟多、農(nóng)藥易損失等缺點，不是最理想的凈化手段。

為改良這些缺陷，需運用固相微型萃取（μSPE）技術(shù)，將幾十毫克的各種固相萃取填料壓縮入小體積柱中并運用該種小柱進行各種固相萃取實驗，實現(xiàn)將固相萃取所需的樣品及溶劑用量降低至幾百微升級別，而且由于它的洗脫液體積小，洗脫液可直接進行后續(xù)分析測試。如果再將其配合至LabTech A-Station全自動多功能樣品制備進樣平臺上，就可以實現(xiàn)所有萃取和進樣過程的完全自動化，成為真正的在線固相萃取。μSPE不僅兼顧傳統(tǒng)SPE的富集凈化能力，同樣實現(xiàn)溶劑使用量小，操作簡單快速等優(yōu)點。

μSPE小柱中有一款專為QuEChERS法萃取液進行凈化而設(shè)計，完全可以代替QuEChERS法中的dSPE凈化法，可表現(xiàn)出更佳的凈化效果。本文參考AOAC2007版的QuEChERS法對黃瓜樣品進行萃取并分別用dSPE和μSPE QuEChERS凈化小柱對萃取液進行凈化，凈化液通過GC-MS進行測試并比較二者的凈化效果。通過本文的初步測試，可看出μSPE QuEChERS凈化小柱的凈化效果較dSPE更佳且具有較高回收率。（見圖1）

圖1：dSPE和μSPE凈化效果對比圖。

表1：A-Station全自動凈化及進樣過程

試劑和設(shè)備

乙腈（色譜純），乙酸（分析純）；

1%乙酸乙腈：取1 mL乙酸置于含1/3乙腈的100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度；

有機氯農(nóng)藥標(biāo)樣1000 ppm，購于Sigma-Aldrich；

A-Station全自動多功能樣品制備進樣平臺，萊伯泰科公司；

μSPE QuEChERS凈化小柱，45-UMPCX-T，ITSP公司；

ProElut QuEChERS萃取套裝，DiKMA64520；

ProElut QuEChERS凈化試劑盒，DiKMA64513；

Agilent 7890B-5977B氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，安捷倫公司；

實驗過程

樣品萃取

取一根完整黃瓜，用刀將其切碎，放入攪拌機中進行初步破碎。然后準(zhǔn)確稱取15.0 g樣品，置于50 mL具塞離心管中，加入15 mL的1%乙酸乙腈，用全自動均質(zhì)儀在12000 r/min下，均質(zhì)萃取1 min，取出后倒入1.5 g NaAC和6.0 g MgSO4（DiKMAProElutQuEChERS萃取套裝），蓋好蓋子，劇烈振搖1min，最后在3000 r/min下離心5 min，得到待處理上清液。

dSPE凈化

取1mL樣品萃取過程中的上清液于2 mL的dSPE凈化管中（DiKMAProElutQuEChERS凈化試劑盒，150 mg MgSO4+50 mg PSA+50 mg C18+50 mg Carb），劇烈振搖1min后，在3000 r/min下離心5 min，取上清液進行GC-MS檢測。

圖2：μSPE加標(biāo)凈化液和標(biāo)樣色譜圖對比。

μSPE凈化

取1 mL，樣品萃取中的上清液于2 mL的進樣小瓶中，將小瓶放于A-Station多功能樣品制備進樣平臺的樣品架中，按照表1所示步驟進行全自動化的凈化過程，凈化后直接由A-Station的進樣針取凈化液進到GC-MS中進行檢測分析。整個的凈化和進樣過程總耗時約7.5 min。

實驗結(jié)果

凈化效果對比

將dSPE凈化和μSPE凈化得到的凈化液分別進行GC-MS的SCAN（全掃描）分析，得到結(jié)果如圖1所示。其中藍色線代表dSPE得到的凈化液，紅色線代表μSPE凈化得到的凈化液。圖中很明顯能看出dSPE凈化液的干擾色譜峰要比μSPE凈化液的色譜峰多，而且干擾響應(yīng)比較大，基線也較高。由此可以看出，μSPE的凈化效果比dSPE更好。

μSPE凈化的加標(biāo)回收情況

取10 μg/mL的有機氯農(nóng)藥標(biāo)樣 10 μL用樣品萃取步驟上清液定容至1.0 mL容量瓶中，再取500 μL進行μSPE凈化，加標(biāo)濃度為100 μg/mL。得到的加標(biāo)凈化液的SIM譜圖（黑色）和相應(yīng)濃度的標(biāo)樣SIM譜圖（紅色）進行對比，見圖2所示。圖中可看出，加標(biāo)的有機氯農(nóng)藥都得到了較好的回收率。

結(jié)論

利用Lab Tech A-Station全自動樣品前處理平臺，可以方便地將μSPE技術(shù)應(yīng)用于實際樣品的QuEChERS凈化中。經(jīng)測試，凈化效果優(yōu)于常規(guī)dSPE方式并且有良好的回收。Lab Tech A-Station全自動樣品前處理平臺在此項測試中發(fā)揮了顯著的自動化精準(zhǔn)樣品前處理優(yōu)勢，可以便捷地實現(xiàn)樣品前處理后向GC-MS或LC-MS進樣。

【參考標(biāo)準(zhǔn)】

[1]AOAC Official Method 2007.01，Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with Magnesium Sulfate Gas Chromatography/Mass Spectrometry and Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry，F(xiàn)irst Action 2007

2003年，QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged and Safe）方法在美國誕生，該分析方法快速、簡便、價格低廉，可實現(xiàn)高質(zhì)量農(nóng)藥多殘留分析。研究結(jié)果表明：超過200種農(nóng)藥殘留可運用QuEChERS方法進行分析。QuEChERS法較傳統(tǒng)方法具有回收率高、精確度與準(zhǔn)確度高、處理時間短、溶劑使用量少、操作簡便、使用裝置簡單等優(yōu)勢。

本文作者來自北京萊伯泰科儀器股份有限公司。