施沁璇 王俊 盛鵬程 羅毅志 吳琦芳 黃小紅 葉雪平
摘要:2015年對(duì)浙北地區(qū)溫室中華鱉、外塘中華鱉、加州鱸、烏鱧、翹嘴紅鲌5個(gè)淡水養(yǎng)殖品種在1個(gè)養(yǎng)殖周期內(nèi)的養(yǎng)殖水及周邊外河水中碳、氮含量進(jìn)行調(diào)查測(cè)定,分析不同養(yǎng)殖品種及周邊外河水體中的碳氮比(簡(jiǎn)稱CN)水平。結(jié)果顯示,各養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖水體中總有機(jī)碳(簡(jiǎn)稱TOC)含量隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,總氮(簡(jiǎn)稱TN)含量隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)先增加后減少,在8月達(dá)到最大值;而水體中CN則隨養(yǎng)殖時(shí)間先減小后增加,且在8月達(dá)到最小值;比較養(yǎng)殖水體和周邊外河水中的CN,結(jié)果顯示,溫室中華鱉養(yǎng)殖池水中CN最低為065;翹嘴紅鲌養(yǎng)殖池水中最高為559,各養(yǎng)殖品種間差異顯著(P<005),但作為養(yǎng)殖水源的周邊各外河水間無顯著性差異。此外,相關(guān)性分析顯示,高 CN 的養(yǎng)殖水體水質(zhì)顯著優(yōu)于(P<005)低CN的養(yǎng)殖水體水質(zhì),說明養(yǎng)殖后期適當(dāng)添加額外碳源,提高養(yǎng)殖水體CN,可能是改善養(yǎng)殖環(huán)境的有效途徑。
關(guān)鍵詞:淡水養(yǎng)殖;養(yǎng)殖品種;碳氮比;養(yǎng)殖環(huán)境;總有機(jī)碳(TOC)含量;總氮(TN)含量
中圖分類號(hào): X714文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A
文章編號(hào):1002-1302(2017)21-0186-04
收稿日期:2016-06-16
基金項(xiàng)目:浙江省公益技術(shù)研究農(nóng)業(yè)項(xiàng)目(編號(hào):2016C32075)。
作者簡(jiǎn)介:施沁璇(1989—),女,浙江嘉興人,助理工程師,主要從事漁業(yè)水域生態(tài)環(huán)境保護(hù)研究。E-mail:shizhuhuan@163com。
通信作者:葉雪平,推廣研究員,主要從事漁業(yè)水域生態(tài)環(huán)境保護(hù)研究。E-mail:yxp900@sinacom。
生物絮團(tuán)技術(shù)(biofloc technology,簡(jiǎn)稱BFT)是指通過向養(yǎng)殖水體中大量投餌補(bǔ)充有機(jī)碳物質(zhì),保持一定的碳氮比,從而定向調(diào)控養(yǎng)殖系統(tǒng)微生物群落并且利用微生物轉(zhuǎn)換水中的氨態(tài)氮成為菌體蛋白,顯著提高飼料利用的一種新型養(yǎng)殖技術(shù)1]。該技術(shù)通過調(diào)控養(yǎng)殖水體的碳氮比(簡(jiǎn)稱CN),可以改善養(yǎng)殖水質(zhì)、節(jié)約養(yǎng)殖成本,近年來廣泛應(yīng)用于羅非魚、草魚、鳙魚等淡水魚類的生產(chǎn)養(yǎng)殖過程中1-4]。已有的研究結(jié)果表明,烏鱧、加州鱸等淡水經(jīng)濟(jì)魚類養(yǎng)殖池塘中的主要污染物為有機(jī)污染物和氮,養(yǎng)殖水體中化學(xué)需氧量、氨氮、亞硝酸鹽氮等含量過高不僅影響水質(zhì),還容易導(dǎo)致病害的發(fā)生,但卻未見針對(duì)養(yǎng)殖水體中CN的相關(guān)研究報(bào)道5-6]。本研究通過分析浙北地區(qū)主要淡水養(yǎng)殖區(qū)外河及不同淡水養(yǎng)殖品種池塘水體中的CN水平,探討不同養(yǎng)殖品種間的差異及其在養(yǎng)殖周期內(nèi)的變化規(guī)律,闡述水產(chǎn)養(yǎng)殖對(duì)周邊水環(huán)境質(zhì)量的潛在影響,指出提高養(yǎng)殖池塘中CN的措施。
1材料與方法
11樣品采集與測(cè)定方法
根據(jù)SCT91023—2007《漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)范第3部分:淡水》,于2015年5—11月期間每月1次(其中,外塘中華鱉采樣時(shí)間為2015年6—11月,每月1次;溫室中華鱉采樣時(shí)間為2015年1—4月,每半月1次),對(duì)浙北地區(qū)(湖州市、嘉興市)較大規(guī)模、具有代表性的21家單一品種養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行7次定點(diǎn)采樣調(diào)查,涉及中華鱉(溫室+外塘)、加州鱸魚、烏鱧、翹嘴紅鲌等5個(gè)養(yǎng)殖品種,同步采集養(yǎng)殖池塘(溫室)及其周邊外河水樣,具體分布見表1。按照HJ 501—2009《水質(zhì)總有機(jī)碳的測(cè)定燃燒氧化-非分散紅外吸收法》、HJ 636—2012《水質(zhì)總氮的測(cè)定堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法》、HJ 535—2009《水質(zhì)氨氮的測(cè)定納氏試劑分光光度法》、HJT 84—2001《水質(zhì)無機(jī)陰離子的測(cè)定離子色譜法》分別測(cè)定水樣中總有機(jī)碳、總氮、氨氮、亞硝酸鹽氮的含量。
12數(shù)據(jù)分析
原始數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010初步整理后,采用SPSS 130進(jìn)行單因素方差分析,并用Duncans檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較分析。
2結(jié)果與分析
21不同養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖水體中總有機(jī)碳、總氮及CN在養(yǎng)殖周期內(nèi)的變化規(guī)律
觀察比較不同養(yǎng)殖品種在養(yǎng)殖周期內(nèi)水體中總有機(jī)碳(簡(jiǎn)稱TOC)、總氮(簡(jiǎn)稱TN)及CN的變化規(guī)律,結(jié)果如圖1至圖3所示。其中,溫室中華鱉為人工控溫養(yǎng)殖,不參與比較;外塘中華鱉的采樣周期為2015年6—11月,其余養(yǎng)殖品種采樣周期均為2015年5—11月。
由圖1、圖2可知,養(yǎng)殖周期內(nèi)不同養(yǎng)殖品種池水中TOC含量隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng),尤其是在養(yǎng)殖后期呈增加趨勢(shì);不同養(yǎng)殖品種池水中TN含量隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,且均在8月達(dá)到最大值,其中外塘中華鱉為356 mgL、加州鱸為 654 mgL、烏鱧為172 mgL、翹嘴紅鲌為575 mgL,之后隨著養(yǎng)殖時(shí)間的增加,水體TN含量有所下降。
由養(yǎng)殖周期內(nèi)不同養(yǎng)殖品種水體中TOC和TN的含量及其變化,計(jì)算得到外塘中華鱉、加州鱸、烏鱧、翹嘴紅鲌4種不同養(yǎng)殖品種在養(yǎng)殖周期內(nèi)水體CN的變化規(guī)律。圖3顯示,各養(yǎng)殖品種水體CN隨養(yǎng)殖時(shí)間呈“V”形,即開始水體CN隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)而下降,到8月達(dá)最小值,其中外塘中華鱉為 326 mgL、加州鱸為251 mgL、烏鱧為 129 mgL、翹嘴紅鲌為346 mgL,之后隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)而上升。
22養(yǎng)殖周期內(nèi)不同養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖水體中TOC、TN、氨氮、亞硝酸鹽氮的平均含量及CN
由表2可知,不同養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖水體中TOC和TN含量均為溫室中華鱉養(yǎng)殖池塘最高,分別達(dá)到4816、7429 mgL,顯著高于其他養(yǎng)殖品種(P<005),而外塘中華鱉養(yǎng)殖池塘最低,分別為1224、289 mgL。以TOC和TN含量為基準(zhǔn),計(jì)算得到5種不用養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖水體中的CN。結(jié)果顯示,溫室中華鱉池水中CN最低,為065,翹嘴紅鲌池水中CN最高,為559。各養(yǎng)殖品種間均差異顯著(P<005),提示不同養(yǎng)殖品種對(duì)養(yǎng)殖水體中的CN影響較大。各養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖水體中,氨氮、亞硝酸鹽氮含量均為溫室中華鱉池最高,分別為725、077 mgL,顯著高于除烏鱧池外其余養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖池塘(P<005);外塘中華鱉池塘氨態(tài)氮含量最低,為090 mgL,翹嘴紅鲌池塘亞硝酸鹽氮含量最低,為004 mgL。比較不同CN條件下,各養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮含量。由圖4可知,養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮含量隨著CN的增加呈下降趨勢(shì)。因此,不同養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖池塘中,高CN水體中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮含量少于低 CN 水體,水質(zhì)狀況為高CN水體優(yōu)于低CN水體。endprint
23養(yǎng)殖周邊外河水中TOC、TN含量及CN
測(cè)定結(jié)果(表3)顯示,溫室中華鱉、外塘中華鱉、加州鱸、烏鱧、翹嘴紅鲌5種不同養(yǎng)殖品種周邊外河水中TOC含量范圍在904~956 mgL之間,TN含量范圍在254~278 mgL之間,CN在351~358之間。外河水中TOC、TN平均含量分別為940、265 mgL,CN平均為355。方差分析顯示,不同養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖池塘周邊外河水體中TOC、TN含量及CN間均無顯著性差異,外河水體中CN較為恒定,周邊不同種類養(yǎng)殖品種對(duì)外河水體中CN影響較小。
3結(jié)論與討論
1989年,以色列學(xué)者Avbimelech等提出生物絮團(tuán)反應(yīng)機(jī)制理論,并將其應(yīng)用到實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中,其中合理的CN是形成生物絮團(tuán)的必要條件7-8]。養(yǎng)殖水體中的CN指能夠被異養(yǎng)微生物利用的有機(jī)碳源(總有機(jī)碳)與總氮的比值,反映養(yǎng)殖水環(huán)境是依靠何種機(jī)制清除氮累積,體現(xiàn)水體的自凈能力9]。在傳統(tǒng)的水產(chǎn)養(yǎng)殖中,水體中的碳主要來源于光合作用和飼料,氮主要來源于飼料。試驗(yàn)結(jié)果顯示,在養(yǎng)殖過程中,養(yǎng)殖水體中的TN含量隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)先增加后減小,在8月達(dá)到最大值,與對(duì)蝦精養(yǎng)池塘中的TN含量變化一致10]。大量氮隨著殘餌、糞便及代謝產(chǎn)物等殘留在養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)無法被利用,導(dǎo)致養(yǎng)殖水體中TN的累積,水體TN含量的升高使得養(yǎng)殖水體中的CN隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)而下降11]。此時(shí),水體中C含量不足,無法滿足異養(yǎng)微生物的需求,抑制了異養(yǎng)微生物的同化作用,導(dǎo)致養(yǎng)殖水體CN的降低。此后,隨著水體中C含量大于N含量,使得養(yǎng)殖后期水體的 CN 有所增加。因此在一個(gè)養(yǎng)殖周期內(nèi),養(yǎng)殖水體CN在8月達(dá)到最小值。
研究顯示,生物絮團(tuán)系統(tǒng)內(nèi)異養(yǎng)微生物的生長(zhǎng)速度是硝化細(xì)菌的10倍,代謝速率比硝化細(xì)菌高40倍,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)有毒氮的快速異養(yǎng)轉(zhuǎn)化,養(yǎng)殖水體中CN>10就可以有效改善水質(zhì)12-15]。當(dāng)養(yǎng)殖環(huán)境中CN<10時(shí),異養(yǎng)微生物主要利用有機(jī)氮源,氨化作用導(dǎo)致氨態(tài)氮含量增加;而當(dāng)CN>10時(shí),養(yǎng)殖環(huán)境中的有機(jī)氮和無機(jī)氮均可得到利用,氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮可以被消耗9]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,浙北地區(qū)溫室中華鱉、外塘中華鱉、加州鱸魚、烏鱧、翹嘴紅鲌5種養(yǎng)殖品種在正常生產(chǎn)條件下,水體CN均小于10,水體中氮累積量較高,抑制了異養(yǎng)微生物的生長(zhǎng),無法完全消除養(yǎng)殖水體中的氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮等有害物質(zhì)。然而,不同養(yǎng)殖品種間,水體 CN 的明顯差異也引起了養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮的差異(圖1)。氨態(tài)氮和亞硝酸鹽氮作為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的主要脅迫因子,一般認(rèn)為,當(dāng)養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮濃度超過 5 mgL、亞硝酸鹽氮濃度達(dá)到01 mgL時(shí),就會(huì)對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物產(chǎn)生危害16-17]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,低CN的溫室中華鱉和烏鱧2種養(yǎng)殖品種池水中氨態(tài)氮和亞硝酸鹽氮含量均超過或已接近上述臨界危害值,而高CN的翹嘴紅鲌和外塘中華鱉2種養(yǎng)殖品種池水中氨態(tài)氮和亞硝酸鹽氮含量則顯著低于(P<005)溫室中華鱉養(yǎng)殖水體。這可能與較高的環(huán)境CN可以刺激異養(yǎng)微生物的生長(zhǎng),通過競(jìng)爭(zhēng)獲得更多的氧氣和空間,抑制自養(yǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng),實(shí)現(xiàn)對(duì)無機(jī)氮的同化作用有關(guān)12,18-19]。因此,提高CN可以有效降低養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮等有毒氮的累積,凈化水體改善養(yǎng)殖環(huán)境,這與孫盛明等對(duì)團(tuán)頭魴的研究結(jié)果20]一致。
浙北地區(qū)地處長(zhǎng)江三角洲杭嘉湖平原腹心地帶,河網(wǎng)密布、河道縱橫,池塘養(yǎng)殖均以周邊外河水作為養(yǎng)殖水源。研究結(jié)果顯示,浙北地區(qū)不同養(yǎng)殖品種池塘周邊外河水體中TOC、TN含量及CN水平相近,各外河間無顯著性差異。因此,不同的養(yǎng)殖品種可能是各養(yǎng)殖池水間出現(xiàn)CN顯著差異的主要原因。在傳統(tǒng)的精養(yǎng)模式中,水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)餌料的利用率僅為20%~30%,大量殘餌、糞便及代謝產(chǎn)物殘留在養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)無法利用21-22]。CN合理的條件下通過絮凝化作用形成的生物絮團(tuán)不僅可以凈化水體,還可以作為理想的餌料被水產(chǎn)動(dòng)物攝食利用,提高飼料的利用率,減少對(duì)飼料的需求,提高經(jīng)濟(jì)效益23-24]。因此,生物絮團(tuán)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖的另一個(gè)重要意義體現(xiàn)在其具有多方面的餌料價(jià)值,不同養(yǎng)殖品種養(yǎng)殖池水中CN的顯著差異可能會(huì)引起飼料利用率的不同,從而對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境造成不同的影響。
研究顯示,低CN的溫室中華鱉、烏鱧2種養(yǎng)殖品種,養(yǎng)殖水體CN低于周邊外河,水體自凈能力差,可能對(duì)周邊環(huán)境造成潛在威脅。溫室中華鱉在養(yǎng)殖過程中往往被密集養(yǎng)殖且大量投喂飼料,富含高蛋白的飼料被攝食后用于生長(zhǎng)的相對(duì)較少,多數(shù)會(huì)被動(dòng)物代謝排放,餌料系數(shù)高,飼料利用率低,使得養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)N含量嚴(yán)重過量而C含量相對(duì)不足,CN比極低,易造成多種疾病和環(huán)境負(fù)擔(dān)25]。同樣的現(xiàn)狀也存在于烏鱧的養(yǎng)殖過程中,其投喂冰鮮餌料的養(yǎng)殖方式雖然近年來正在被逐步研究改進(jìn),但傳統(tǒng)高密度養(yǎng)殖模式依然是浙北地區(qū)烏鱧養(yǎng)殖的主要方式。因此,在養(yǎng)殖后期可以通過適當(dāng)添加額外的碳源,提高養(yǎng)殖水體CN,促進(jìn)生物絮團(tuán)的形成,從而改善其養(yǎng)殖環(huán)境26]。與低CN養(yǎng)殖品種不同,翹嘴紅鲌和外塘中華鱉2種養(yǎng)殖品種的養(yǎng)殖水體CN高于周邊外河水平,水體中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽的含量低,表明養(yǎng)殖水體具有較好的自凈能力。朱學(xué)寶研究發(fā)現(xiàn),鰱魚、羅非魚可以有效利用生物絮團(tuán)作為它們的直接餌料,營(yíng)養(yǎng)效果良好27]。因此筆者認(rèn)為,除了微生物的快速異養(yǎng)轉(zhuǎn)化外,這可能與翹嘴紅鲌、外塘中華鱉可以利用生物絮團(tuán)作為其餌料飼料有關(guān),但它們具體的利用率和營(yíng)養(yǎng)效果有待進(jìn)一步研究。
參考文獻(xiàn):
1]ZK(#]李朝兵生物絮團(tuán)作為鳙餌料的研究與應(yīng)用D] 上海:上海海洋大學(xué),2012
2]Crab R,Defoirdt T,Bossier P,et alBiofloc technology in aquaculture:beneficial effects and future challengesJ] Aquaculture,2012,356:351-356
3]Crab R,Kochva M,Verstraete W,et alBio-flocs technology JP3]application in over-wintering of tilapiaJ] Aquacultural Engineering,2009,40(3):105-112endprint
4]盧炳國(guó),王海英,謝駿,等 不同CN水平對(duì)草魚池生物絮團(tuán)的形成及其水質(zhì)的影響J] 水產(chǎn)學(xué)報(bào),2013,37(8):1220-1228
5]劉乾甫,賴子尼,楊婉玲,等 珠三角地區(qū)密養(yǎng)淡水魚塘水質(zhì)狀況分析與評(píng)價(jià)J] 南方水產(chǎn)科學(xué),2014,10(6):36-43
6]杭小英,周志明,李倩,等 不同養(yǎng)殖模式對(duì)南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)、病害發(fā)生與水質(zhì)的影響J] 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(5):191-193
7]Avnimelech YCarbonnitrogen ratio as a control element in aquaculture systemsJ] Aquaculture,1999,176(3):227-235
8]Hari B,Kurup B M,Varghese J T,et alThe effect of carbohydrate addition on water quality and the nitrogen budget in extensive shrimp culture systemsJ] Aquaculture,2006,252(2):248-263
9]趙培生物絮團(tuán)技術(shù)在海水養(yǎng)殖中的研究與應(yīng)用D] 上海:上海海洋大學(xué),2011
10]ZK(#]羅亮,李卓佳,張家松,等 對(duì)蝦精養(yǎng)池塘碳、氮和異養(yǎng)細(xì)菌含量的變化及其相關(guān)性研究J] JP3]南方水產(chǎn)科學(xué),2011,7(5):24-29
11]劉海春,劉志國(guó),董學(xué)洪羅氏沼蝦養(yǎng)殖池塘水質(zhì)變化規(guī)律研究J] 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(6):397-399
12]Hargreaves J APhotosynthetic suspended-grwoth systems in aquacultureJ] Aquacultural Engineering,2006,34(3):344-363
13]Ebeling J M,Timmons M B,Bisogni J JEngineering analysis of the stoichiometry of photoautotrophic,autotrophic,and heterotrophic removal of ammonia-nitrogen in aquaculture systemsJ] Aquaculture,2006,257(1):346-358
14]Schneider O,Sereti V,Eding E H,et alAnalysis of nutrient flows in integrated intensive aquaculture systemsJ] Aquacultural Engineering,2005,32(34):379-401
15]Goldman J C,Caron D A,Dennett M RRegulation of gross growth efficiency and ammonium regeneration in bacteria by substrate C ∶N ratioJ] Limnology and Oceanography,1987,32(6):1239-1252
16]Tovar A,Moreno C,Manuel-Vez M P,et alEnvironmental impacts of intensive aquaculture in marine watersJ] Water Research,2000,34(1):334-342
17]Miranda-Filho K C,Pinho G L L,Wasielesky W,et alLong-term ammonia toxicity to the pink-shrimp Farfantepenaeus paulensisJ] Comparative Biochemistry and Physiology Part C(Toxicology & Pharmacology),2009,150(3):377-382
18]Satoh H,Okabe S,Norimatsu N,et alSignificance of substrate CN ratio on structure and activity of nitrifying biofilms determined by in situ hybridization and the use of microelectrodesJ] Water Science and Technology,2000,41(45):317-321
19]Zhu S M,Chen S LEffects of organic carbon on nitrification rate in fixed film biofiltersJ] Aquacultural Engineering,2001,25(1):1-11
20]孫盛明,朱健,戈賢平,等 零換水條件下養(yǎng)殖水體中碳氮比對(duì)生物絮團(tuán)形成及團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)果的影響J] 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2015,27(3):948-955
21]Azim M E,Verdegem M C J,Singh M,et alThe effects of periphyton substrate and fish stocking density on water quality,phytoplankton,periphyton and fish growthJ] Aquac Res,2003,34(9):685-695
22]van Dam A A,Beveridge M C M,Azime M E,et alThe potential of fish production based on periphytonJ] Rev Fish Biol Fish,2002,12(1):1-31
23]李彥羅非魚養(yǎng)殖水體中添加碳源對(duì)水質(zhì)及生長(zhǎng)的影響D] 上海:上海海洋大學(xué),2012
24]van Hamersveld E H,van der Lans R G J M,et alThe role of lipids in the flocculation of Saccharomyces cerevisiaeJ] Biotechnology and Bioengineering,1997,56(2):190-200
25]許國(guó)煥,鄭連春,趙新安,等 不同蛋白含量的飼料對(duì)幼鱉生長(zhǎng)影響的初探J] 水利漁業(yè),2003,23(1):51-52
26]錢偉,陸開宏,鄭忠明,等 碳源及CN對(duì)復(fù)合菌群凈化循環(huán)養(yǎng)殖廢水的影響J] 水產(chǎn)學(xué)報(bào),2012,36(1):1880-1890
27]朱學(xué)寶細(xì)菌絮凝體對(duì)濾食性魚類餌料效果的研究J] 水產(chǎn)學(xué)報(bào),1989,13(4):339-345endprint