朱國貞，王利華，齊悅，趙彥

(山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院，太原 山西 030001)

論 著

IgA腎病尿巨噬細胞及自然殺傷細胞檢測的臨床意義〔1〕

朱國貞，王利華，齊悅，趙彥

(山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院，太原 山西 030001)

目的：研究尿巨噬細胞、自然殺傷細胞含量與IgA腎病(IgAN)患者腎功能損傷程度的關系。方法：用流式細胞儀(FCM)聯(lián)合檢測36 例IgAN患者尿巨噬細胞及自然殺傷細胞含量，并依據(jù)腎小球濾過率將患者分為腎功能損傷組和腎功能正常組。結果：腎功能損傷組尿巨噬細胞含量明顯高于腎功能正常組(P<0.05)。腎功能損傷組尿自然殺傷細胞含量明顯低于腎功能正常組(P<0.05)。結論：聯(lián)合檢測尿巨噬細胞及自然殺傷細胞含量可作為協(xié)助判斷IgAN腎功能損傷的指標之一。

巨噬細胞；自然殺傷細胞；流式細胞術；IgA腎病

過去多數(shù)學者一直認為IgA腎病(IgAN)是一種預后良好的疾病，隨著對該病的不斷研究，發(fā)現(xiàn)IgA腎病是一種進展性疾病，只有5%～30%的IgA腎病患者能完全緩解，而大多數(shù)患者呈慢性進行性發(fā)展。近幾年一些預測IgA腎病進展的新標志物不斷被報告，如CD34、CD54、血管細胞黏附分子-1、血管緊張素Ⅱ受體、血小板源性生長因子、白介素-1、白介素-6、白介素-10、腫瘤壞死因子(TNF-α)、單核細胞趨化因子(MCP-1)等[1-3]。但關于聯(lián)合檢測尿巨噬細胞及自然殺傷細胞細胞方面的研究少有報道。本文利用流式細胞儀(FCM)聯(lián)合檢測我院2016年12月—2017年6月IgA腎病患者尿液中巨噬細胞及自然殺傷細胞的含量，初步探討IgA腎病患者尿巨噬細胞以及自然殺傷細胞與腎功能損傷的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2016年12月—2017年6月所有經腎活組織檢查證實的IgA腎病(免疫熒光表現(xiàn)為以IgA為主的免疫球蛋白在腎小球系膜區(qū)沉積)患者36 例。其中，男16 例，女20 例，年齡(30±6) 歲。

1.2 腎功能分組

36 例患者于腎穿前留取血液標本，檢測血清肌酐水平，依據(jù)Cockcroft-Gault計算出患者腎小球濾過率(GFR)，并按照GFR水平將患者分為腎功能正常組(GFR>90 mL/min)和腎功能損傷組(GFR<90 mL/min)，其中腎功能正常組20 例，腎功能損傷組16 例。

1.3 尿細胞檢測

1.3.1 試劑和儀器

CD68-FITC及CD56-PE(法國Immunotech公司)，Beckman Coulter FC500流式細胞儀(美國Beckman Coulter公司)。

1.3.2 尿巨噬細胞檢測方法

在患者進行腎活組織檢查前留取新鮮晨尿標本100 mL，1 500 r/min離心5 min，沉渣用pH7.0磷酸鹽生理鹽水(PBS)前后洗滌并離心3次，棄去上清液后獲得懸浮細胞，并調整細胞數(shù)為1×106，分別加入CD68-FITC及同型對照后避光孵育，然后流式細胞儀檢測，用前向(FSC)-側向(SSC)設門，CXP32軟件分析檢測試管中的CD68+細胞含量，以百分比表示。

1.3.3 尿自然殺傷細胞檢測方法

尿標本留取及離心、洗滌方法同上，分別加入CD56-PE及同型對照后避光孵育，然后用流式細胞儀檢測，利用前向散射光(FSC)觀察細胞大小，側向散射光(SSC)觀察細胞顆粒度，CXP32軟件分析檢測試管中的CD56+細胞含量，以百分比表示。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結 果

2.1 兩組尿液中巨噬細胞含量比較

腎功能損傷組尿液中巨噬細胞含量[(23.6±3.2)%]明顯高于腎功能正常組[(11.8±2.4)%]，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 兩組尿液中自然殺傷細胞含量比較

腎功能損傷組尿液中自然殺傷細胞的含量[(15.5±2.8)%]明顯低于腎功能正常組[(21.7±3.1)%]，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討 論

IgA腎病是我國最常見的原發(fā)性腎小球疾病，約占原發(fā)性腎小球疾病的三分之一。免疫熒光顯示：以IgA為主呈顆粒樣或團塊樣在腎小球系膜區(qū)分布，故可以認為它是一種自身免疫性腎病。那么，究竟IgA腎病病情輕重及預后與參與免疫反應的細胞之間有無相關性？聯(lián)合檢測尿中巨噬細胞及自然殺傷細胞含量能否協(xié)助早期判斷該病的預后？帶著這樣的疑問，我們利用流式細胞儀聯(lián)合檢測IgA腎病患者尿液中巨噬細胞及自然殺傷細胞的含量，并根據(jù)臨床腎功能指標(血肌酐、GFR值)將被研究的IgA腎病患者分為腎功能正常及損傷組。最終我們觀察到IgA腎病患者腎功能損傷組尿液中巨噬細胞含量明顯高于腎功能正常組(P<0.05)。推測IgA腎病患者尿液巨噬細胞含量可協(xié)助反映腎臟功能損傷程度。腎小管萎縮和間質纖維化被認為是IgA腎病進展至終末期腎病的重要因素和主要病理學特征[4]。研究發(fā)現(xiàn)：隨著IgA腎病患者腎間質巨噬細胞浸潤的加重，腎間質纖維化程度亦明顯加重，進而導致腎小球濾過率下降[5]。有研究證實，巨噬細胞本身可以通過釋放大量的基質降解酶抑制劑、轉化生長因子-β(TGF-β)以及激活肌成纖維細胞等多種途徑促進腎小球硬化及腎間質纖維化，進一步影響腎小球及腎小管間質細胞的功能，從而進展為終末期腎衰竭[6-7]。結合本實驗結果，推測巨噬細胞可能通過促腎臟纖維化導致腎小球濾過功能下降，加劇腎臟損傷。

自然殺傷細胞在機體免疫監(jiān)視過程中發(fā)揮重要作用，CD56是自然殺傷細胞的標志物。本研究檢測到腎功能損傷組尿自然殺傷細胞含量明顯低于腎功能正常組(P<0.05)。我們推測IgA腎病患者自然殺傷細胞的水平下降，其抑制B淋巴細胞增殖、分化的作用減弱，導致多克隆B細胞活化，引起免疫球蛋白的分泌增加，由此異常的免疫復合物沉積在腎小球引起病變[8]，并影響腎小球濾過功能，但具體機制有待進一步研究證實。

本研究不僅探討了尿巨噬細胞及自然殺傷細胞含量檢測在IgA腎病中的臨床價值，而且對巨噬細胞、自然殺傷細胞與IgA腎病之間的病理生理關系提出新的研究方向。

[1]NAIR R，WALKER P D.Is IgA nephropathy the commonest primary glomerulopathy among young adults in the USA[J].Kidney Int，2006，69(8)：1455-1458.

[2]DONADIO J V，GRANDE J P.IgA nephropathy[J].N Engl J Med，2002，347(10)：738-748.

[3]陳香美，謝院生.IgA腎病的發(fā)病與治療[J].中國中西醫(yī)結合腎病雜志，2006，7(12)：683-686.

[4]FARRIS A B，COLVIN R B.Renal interstitial fibrosis：mechanisms and evaluation[J].Curr Opin Nephrol Hypertens，2012，21(3)：289-300.

[5]高慧敏，王弦，李靜，等.IgA腎病組織中巨噬細胞浸潤與腎間質纖維化、EMT的關系及臨床意義[J].中國組織化學與細胞化學雜志，2015，24(6)：548-554.

[6]GUO S，WIELECHA T A，HUDKINS K L，et al.Macrophages are essential contributors to kidney injury in murine cryoglobulinemic membranoproliferative glomemlonephritis[J].Kidney Int，2011，80(9)：946-958.

[7]HAN Y，MA F Y，TESCH G H，et al.Role of macrophages in the fibrotic phase of rat crescentic glomerulonephritis[J].Am J Physiol Renal Physiol，2013，308(4)：1043-1053.

[8]丁艷，尹薇，何學蓮，等.兒童過敏性紫癜急性期免疫功能探討[J].中國免疫學雜志，2013，29(5)：518-525.

2017-06-06

(本文編輯：王作利)

TheClinicalsignificanceintestingurinarymacrophagesandnaturalkillercellsinpatientswithIgAnephropathybyflowcytometry

ZHU Guozhen，WANG Lihua，QI Yue，ZHAO Yan

(The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China)

Objective：To find the correlation among urinary macrophages and natural killer cells and and degree of renal injury in patients with IgA nephropathy(IgAN).Methods：The content of urinary macrophages and macrophages natural killer cells from 36 patients with IgAN was measured by flowcytometry.All the patients were grouped according to the degree of renal injury.Results：Urinary macrophage contents in IgAN with renal injury were significantly higher than those in normal renal function group (P<0.05).Meanwhile，urinary natural killer cells contents in IgAN with renal injury were significantly lower than those in normal renal function group (P<0.05).Conclusion：Testing urinary macrophages and natural killer cells by flowcytometry may provide useful information for evaluating the degree of renal injury in IgAN.

macrophages；natural killer cells；flowcytometry；IgA Nephropathy

R692

A

1671-8631(2017)12-0883-03

〔1〕本課題為山西省國際科技合作項目(項目編號：2015081036)

朱國貞(1974— )，女，河北省遷西縣人，博士學位，副主任醫(yī)師，主要從事腎內科工作。