李立為 王智超 劉明蓉 朱夢莉
(武漢市第一醫(yī)院急診科,湖北 武漢 430022)
參附注射液防治大鼠心搏驟停心肺復(fù)蘇后心功能不全的機(jī)制
李立為 王智超 劉明蓉 朱夢莉
(武漢市第一醫(yī)院急診科,湖北 武漢 430022)
目的探討參附注射液在防治大鼠心搏驟停心肺復(fù)蘇(CA-CRP)后心功能不全中的機(jī)制。方法體外建立大鼠CA-CPR模型,靜脈給予參附注射液;心率、平均動脈壓(MAP)、中心靜脈壓(CVP)用于觀察心功能變化;病理切片用于觀察大鼠心臟形態(tài)學(xué)變化;酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、黃嘌呤氧化酶(XOD)等心肌脂質(zhì)過氧化相關(guān)指標(biāo)變化。結(jié)果大鼠心功能及組織學(xué)變化顯示,參附注射液可改善大鼠CPR后心功能情況。同時(shí)外周血檢測發(fā)現(xiàn)參附注射液可明顯降低MDA、XOD的表達(dá),上調(diào)SOD的表達(dá)。結(jié)論參附注射液治療CA-CPR的機(jī)制與清除氧自由基有關(guān)。
參附注射液;心肺復(fù)蘇;心功能
臨床研究表明心搏驟(CA)停-心肺復(fù)蘇(CPR)后心功能不全導(dǎo)致循環(huán)衰竭的死亡率占總死亡的1/3以上。參附注射液是紅參、黑附片的提取物,具有強(qiáng)心、改善微循環(huán)、擴(kuò)血管等作用〔1〕。有研究報(bào)道休克患者注射參附注射液可以顯著增強(qiáng)心縮力,降低外周阻力,增加心輸出量,減少缺血再灌注損傷引起的心肌細(xì)胞凋亡〔2~5〕。參附注射液對CA-CPR后心功能不全的改善效果明顯,不良反應(yīng)少,但是具體的作用機(jī)制尚不完全清楚。本文旨在探討參附注射液對大鼠CPR后早期心肌能量代謝及心肌損傷修復(fù)的影響。
1.1實(shí)驗(yàn)材料 動物:60只健康SPF級雄性Wistar大鼠,6~8周齡,體質(zhì)量220~240 g,購于北京華阜康生物科技股份有限公司,合格證號為 scxk湖2009 0002。藥品與試劑:總超氧化物歧化酶(T-SOD)測試試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒,購于南京建成生物工程研究所;氯化鉀,購于中國大冢制藥有限公司(批號:5F96K2);參附注射液,購于華潤三九(雅安)藥業(yè)有限公司(批號:15110601001);鹽酸腎上腺素注射液,購于遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國)有限公司(批號:151216)。
1.2方法
1.2.1大鼠CA-CPR模型的制備 窒息合并冰氯化鉀停跳液致大鼠CA-CPR模型的制備及心搏驟停標(biāo)準(zhǔn)參考謝偉峰等〔6〕研究方法。
1.2.2分組與給藥 60只SPF級Wistar大鼠隨機(jī)分為3組,每組20只。假手術(shù)組:直接手術(shù)猝死。生理鹽水組:手術(shù)猝死后行CPR(劑量等同參附注射液同體積)。參附注射液組:手術(shù)猝死后行CRP,同時(shí)給予參附注射液尾靜脈滴注,劑量20 ml/kg,滴注速度20 ml/h。
1.2.3取材方法 術(shù)后8 h,尾靜脈抽取大鼠靜脈血500 μl,置于含乙二胺四乙酸(EDTA)的抗凝管中。
1.3指標(biāo)檢測 (1)心功能指標(biāo):動物多導(dǎo)聯(lián)生理記錄儀記錄心率、平均動脈壓(MAP)、中心靜脈壓(CVP);(2)形態(tài)學(xué)檢測:兩組動物均于復(fù)蘇后1 h再次麻醉后處死,迅速解剖游離心臟。普通病理取材:蘇木素-伊紅(HE)染色,4%多聚甲醛、常溫固定標(biāo)本;(3)脂質(zhì)過氧化相關(guān)指標(biāo)檢測:酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清中MDA、SOD、黃嘌呤氧化酶(XOD)。
1.4ELISA實(shí)驗(yàn) 用包被緩沖液將已知抗原(MDA、SOD、XOD)稀釋至10 μg/ml,4℃過夜。次日加血清0.1 ml于上述反應(yīng)孔中,37℃孵育1 h,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1 ml,37℃孵育30 min,加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物溶液0.1 ml,37℃ 10 min,加入2 mol/L硫酸0.05 ml,在ELISA檢測儀上,于450 nm處,測OD值以判斷。同時(shí)按以上方法測蛋白標(biāo)準(zhǔn)品OD值,并繪制蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線;前列環(huán)素(PG)L2、內(nèi)皮素(ET)-1、血管緊張素Ⅱ、血管性血友病因子(vWF)濃度以測量OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上換算。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行方差分析。
2.1參附注射液對大鼠心功能的影響 假手術(shù)組均無心率、中心靜脈壓,平均動脈壓(15±7)mmHg。相比于生理鹽水組〔心率(456±23)次/min,平均動脈壓(136±18)mmHg,中心靜脈壓3 cmH2O〕,注射參附注射液后,CPR后大鼠心率〔(339±12)min/次〕、平均動脈壓〔(167±8)mmHg〕、中心靜脈壓(6 cmH2O)顯著改善(Plt;0.05)。見表1。
2.2參附注射液對大鼠心肌脂質(zhì)過氧化相關(guān)指標(biāo)的影響 參附注射液可明顯降低MDA、XOD的表達(dá),但相反上調(diào)SOD的表達(dá)(Plt;0.05)。見表1。
2.3參附注射液對大鼠心臟形態(tài)學(xué)的影響 生理鹽水組大鼠心肺復(fù)蘇后,可見心肌大量破壞,心肌間質(zhì)中充填大量炎性細(xì)胞;而在注射參附注射液后,大鼠心肌組織逐漸恢復(fù)正常輪廓、炎細(xì)胞逐漸減少。見圖1。
表1 三組大鼠外周血心肌脂質(zhì)過氧化相關(guān)指標(biāo)表達(dá)的比較
圖1 參附注射液對大鼠心臟形態(tài)學(xué)的影響(×400)
缺血再灌注損傷是造成心臟驟停后心功能不全的主要因素,CPR后,心肌細(xì)胞可產(chǎn)生大量氧自由基。CPR進(jìn)而損傷心肌細(xì)胞〔6〕,這是CPR后患者死亡的主要原因〔1〕。XOD是一種黃素酶,主要催化核苷酸的分解代謝及超氧陰離子的生成〔7〕。缺氧條件下,心臟能量代謝急劇降低,黃嘌呤脫氫酶(XDH)在白細(xì)胞釋放的蛋白酶作用下大量不可逆地轉(zhuǎn)變成XOD〔5〕。MDA 是反映氧自由基產(chǎn)生及引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的標(biāo)志性指標(biāo)〔8〕,可促進(jìn)心肌細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)與核酸脂質(zhì)發(fā)生交聯(lián),進(jìn)而引起心肌細(xì)胞基因突變〔9〕。SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶,可通過歧化反應(yīng)清除體內(nèi)有害的氧自由基,從而保護(hù)細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,參附注射結(jié)果與辛毅等〔5〕研究結(jié)果一致。表明參附注射液在防治大鼠CA-CPR后心功能不全發(fā)揮積極作用,以期為臨床應(yīng)用參附注射液提高CPR成功率提供有效方法和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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〔2017-04-15修回〕
(編輯 袁左鳴)
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A
1005-9202(2017)22-5558-02;
10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.031
武漢市衛(wèi)計(jì)委資助課題(No.WX16E26)
王智超(1968-),男,主任醫(yī)師,主要從事急診研究。
李立為(1979-),男,碩士,主治醫(yī)師,主要從事急診研究。