PCX柱凈化-氣相色譜質(zhì)譜法測定牲畜瘦肉中的鹽酸克倫特羅

鹽酸克倫特羅，又名瘦肉精，是一種對動(dòng)物具有促進(jìn)生長、減少脂肪含量的興奮劑類物質(zhì)，曾廣泛應(yīng)用于生豬的飼養(yǎng)。由于鹽酸克倫特羅容易在動(dòng)物組織內(nèi)殘留，當(dāng)人們食用含有一定量鹽酸克倫特羅的牲畜肉后，可能會(huì)引起中毒，所以我國已禁止將鹽酸克倫特羅作為生長促進(jìn)劑使用。但因其具經(jīng)濟(jì)效益，故非法使用鹽酸克倫特羅的現(xiàn)象依然存在，因此建立快速高效的鹽酸克倫特羅檢測方法具有重要的意義。

氣相色譜-質(zhì)譜檢測鹽酸克倫特羅的方法較多，如GB/T 5009.192-2003、NY/T 468-2006，我們在以往的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上對前處理步驟進(jìn)行了改變，在一定程度上減少了鹽酸克倫特羅的檢測時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)部分

材料與設(shè)備：三氯乙酸、氨水，分析純；甲醇、正己烷，色譜純；鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品；美托洛爾標(biāo)準(zhǔn)品；N，O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMSCI)；Agela Cleanert PCX固相萃取柱60mg/3mL；安捷倫氣相色譜-質(zhì)譜儀。

氣相色譜條件：色譜柱RTX-5ms，30m x 0.25m x 0.25μm；程序升溫條件：初始溫度70℃，保留1min；18℃/min升溫至200℃，保留0.0min；5℃/min升溫至245℃，保留0.0min；25℃/min升溫至280℃，保留5.0min?？傔\(yùn)行時(shí)間：23.622min；載氣：氦氣，純度≥99.99%；進(jìn)樣口溫度：220℃；進(jìn)樣量：3μL；進(jìn)樣方式：不分離進(jìn)樣。檢測器：EI檢測器。檢測器溫度：230℃。全掃描 模 式：35-400amu。SIM 模 式：72、86、187、223、243、262amu。

樣品處理 提取：稱取5～10g已粉碎的牲畜瘦肉于離心管中，加入15mL的5%三氯乙酸溶液，勻漿后超聲萃取20min，再以9000r/min離心3min，取清液于另一離心管。重復(fù)上述步驟一次，合并提取液。

正己烷凈化：向上述提取液中加入10mL正己烷，渦旋震蕩后靜置分層，吸去上層正己烷相，若油脂較多，可重復(fù)一次。

PCX凈化：依次加入3mL水、3mL甲醇活化PCX柱，棄去流出液；往PCX柱加入樣品提取液，棄去流出液；依次加入5mL甲醇、5mL水，棄去流出液；加入6mL的5%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。

衍生：在55℃加熱條件下氮吹洗脫液至干，加入內(nèi)標(biāo)美托洛爾，再氮吹至干。加入100μL甲苯和100μL(BSTFA)/(TMSCI)衍生試劑，渦旋2min后將樣品置于80℃烘箱中加熱衍生1h。待樣品冷卻后，加入800μL甲苯，渦旋2min后進(jìn)樣測定。

結(jié)果與討論

鹽酸克倫特羅衍生后的氣相色譜圖如圖1所示，結(jié)果顯示，峰型良好，衍生效果滿足實(shí)驗(yàn)要求。

圖1 鹽酸克倫特羅衍生后的氣相色譜圖

提取方法的選擇：對比酶提取法、國標(biāo)NY/T 468-2006乙酸乙酯提取法、三氯乙酸酸性水溶液提取法，結(jié)果顯示，酶提取法操作繁瑣、耗時(shí)較長，一般需要在37℃下酶解16小時(shí)，而且試劑成本較高。乙酸乙酯提取法操作也比較繁瑣，需要旋蒸干乙酸乙酯后再進(jìn)行凈化，影響實(shí)驗(yàn)的回收率。采用三氯乙酸酸性水溶液提取法，鹽酸克倫特羅離子化后溶解在水中，并且結(jié)合PCX凈化，利用離子鍵作用力，能夠有效保留鹽酸克倫特羅。

固相萃取柱的選擇：對比常用的固相萃取柱HLB和PCX柱，結(jié)果顯示，PCX柱回收率更高。主要原因可能是HLB主要采用范德華力保留待測物，而PCX有兩重作用力，π-π作用力和離子鍵作用力，能夠有效地保留鹽酸克倫特羅。結(jié)合氨水甲醇溶液洗脫，本實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚝芎玫貎艋}酸克倫特羅，達(dá)到檢測要求。

標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限、回收率與精密度：在10-500μg/L范圍內(nèi)，鹽酸克倫特羅濃度與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,其線性回歸方程為：Y=8665.5X，相關(guān)系數(shù)為0.9990，檢出限為1μg/L。取一份經(jīng)檢測不含有鹽酸克倫特羅的樣品作為空白樣品，測得平均加標(biāo)回收率均大于75%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%～5.8%。

實(shí)際樣品的應(yīng)用：本方法應(yīng)用于廣東省內(nèi)農(nóng)貿(mào)市場日常生活銷售的豬肉檢測，對其進(jìn)行食品安全監(jiān)測與預(yù)警，假陽性檢出低，效果良好。

□ 崔昊 羅杰鴻 廣州京誠檢測技術(shù)有限公司