劉 爽，陳 娟，金 蘭，朱 薇，周 詣

(重慶市中醫(yī)院體檢中心 400421)

論著·臨床研究

外周血Th22在膿毒癥患者中的水平變化及臨床意義

劉 爽，陳 娟，金 蘭，朱 薇，周 詣△

(重慶市中醫(yī)院體檢中心 400421)

目的探討外周血Th22在膿毒癥患者中的水平變化及其臨床意義。方法選取2014年4月至2017年4月在該院就診的膿毒癥患者180例為研究對(duì)象，根據(jù)病情嚴(yán)重程度將其分為普通膿毒癥組81例、嚴(yán)重膿毒癥組68例和膿毒癥休克組31例，另選取60例健康體檢者為對(duì)照。檢測(cè)各組外周血Th22、白細(xì)胞介素(IL)-22、IL-6及降鈣素原(PCT)水平，記錄急性生理與慢性健康狀況(APACHE Ⅱ)評(píng)分情況，采用受試者工作特征(ROC)曲線評(píng)估外周血Th22對(duì)膿毒癥早期診斷的價(jià)值。結(jié)果膿毒癥患者外周血Th22和IL-22水平明顯高于對(duì)照組(Plt;0.05)。普通膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組及膿毒癥休克組患者外周血Th22、IL-22、APACHE Ⅱ評(píng)分及PCT水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。相關(guān)性分析顯示，外周血Th22與PCT、APACHE Ⅱ評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.80、0.66，Plt;0.01)。外周血Th22=1.9%時(shí)，其敏感性和特異性分別為83.1%和85.2%，明顯優(yōu)于PCT。結(jié)論外周血Th22及其相關(guān)細(xì)胞因子對(duì)膿毒癥患者早期診斷及病情嚴(yán)重程度的評(píng)估具有重要的臨床價(jià)值。

膿毒癥；診斷；白細(xì)胞介素-22；Th22細(xì)胞

膿毒癥是嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、燒傷等引發(fā)的全身炎癥反應(yīng)，患者表現(xiàn)為不同程度的微循環(huán)障礙，其可導(dǎo)致器官組織灌注不足，嚴(yán)重者可引起感染性休克和多器官功能衰竭，甚至危及生命[1]。近年來(lái)，有相關(guān)研究報(bào)道膿毒癥患者的發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)逐年升高趨勢(shì)，其普遍病死率高達(dá)15%～30%，尤其是同時(shí)合并器官損傷的患者，其病死率可進(jìn)一步升高[2]。因此，針對(duì)膿毒癥及其病情危重程度的早期診斷與治療，對(duì)于提高患者臨床治療效果及預(yù)后至關(guān)重要。目前，臨床缺乏有效的早期診斷及評(píng)估病情變化的檢測(cè)指標(biāo)，而臨床病原學(xué)檢查耗時(shí)長(zhǎng)，常需3～5 d，易延誤病情。相關(guān)研究證實(shí)，膿毒癥的發(fā)病過(guò)程可能與自身免疫功能的紊亂密切相關(guān)，不同的CD4+T淋巴細(xì)胞參與了膿毒癥的發(fā)病過(guò)程[3]。Th22是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的輔助型T淋巴細(xì)胞亞群，其特征性分泌白細(xì)胞介素(IL)-22，在多種炎癥性疾病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤的發(fā)病中扮演著重要的角色[4]。IL-22通過(guò)與其受體特異性結(jié)合，激活下游通路如JAK-STAT信號(hào)通路，發(fā)揮促炎作用[5]。然而，有關(guān)膿毒癥患者體內(nèi)Th22及IL-22的變化情況，目前尚無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)膿毒癥患者外周血Th22及相關(guān)細(xì)胞因子的變化，評(píng)估其在膿毒癥早期診斷及病情變化中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年4至2017年4月本院收治的膿毒癥患者180例作為研究對(duì)象，其中男108例，女72例，年齡24～76歲，中位年齡51.4歲，所有患者均符合膿毒癥與感染性休克國(guó)際共識(shí)指南[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并自身免疫系統(tǒng)疾??；存在嚴(yán)重慢性疾??；近期(3個(gè)月內(nèi))使用免疫抑制劑。根據(jù)入選患者病情嚴(yán)重程度分為普通膿毒癥組(81例)、嚴(yán)重膿毒癥組(68例)和膿毒癥休克組(31例)。膿毒癥引起多個(gè)(2個(gè)以上)器官功能障礙，組織灌注不足，納入嚴(yán)重膿毒癥組；膿毒癥引起組織低灌注，出現(xiàn)休克，給予足量液體復(fù)蘇仍無(wú)法糾正出現(xiàn)的休克表現(xiàn)，納入膿毒癥休克組；其余為普通膿毒癥組。另選取門(mén)診60例健康體檢者作為對(duì)照。膿毒癥組和對(duì)照組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意。

1.2主要儀器與試劑 RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)液、佛波酯、淋巴細(xì)胞分離液、離子霉素、莫能菌素、細(xì)胞固定液及細(xì)胞破膜劑均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；鼠抗人CD4單抗及鼠抗人IL-22單抗購(gòu)自美國(guó)eBioscience公司；IL-22、降鈣素原(PCT)及IL-6 ELISA試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)公司；流式細(xì)胞分析儀購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.3方法

1.3.1收集患者一般臨床資料，對(duì)常規(guī)及原發(fā)病針對(duì)性治療，病情嚴(yán)重的患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上給予連續(xù)性血液凈化治療。入院24 h內(nèi)對(duì)所有膿毒癥患者進(jìn)行急性生理與慢性健康狀況(APACHE Ⅱ)評(píng)分，評(píng)估病情危重程度。

1.3.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Th22水平 分別抽取對(duì)照組、膿毒癥組患者清晨空腹靜脈血4 mL，經(jīng)肝素抗凝后加入淋巴細(xì)胞分離液，提取外周單核細(xì)胞，接種于含等體積RPMI 1640培養(yǎng)基的培養(yǎng)板，加入50 μL佛波酯(1 μg/mL)、16 μL離子霉素(50 μg/mL)及16 μL莫能菌素(0.1 mg/mL)，吹打混勻，常溫孵育4～6 h。離心收集細(xì)胞，加入抗人CD4單抗5 μL，室溫避光孵育30 min，加入100 μL細(xì)胞固定液，離心，棄上清，加入破膜液和5 μL IL-22單抗，最后加入染色固定液300 μL，處理完畢后于流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3外周血IL-22、IL-6、PCT及CRP水平 取健康體檢者清晨空腹靜脈血2 mL及膿毒癥患者清晨空腹靜脈血8 mL，肝素抗凝，全血離心后收集血清，采用ELISA檢測(cè)兩組外周血IL-22水平。膿毒癥患者血清用于檢測(cè)IL-6、PCT及CRP水平，其中CRP水平采用快速免疫比濁法進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1兩組外周血Th22及IL-22水平比較 與對(duì)照組相比，膿毒癥組患者外周血Th22及IL-22水平明顯升高(Plt;0.05)。見(jiàn)表1、圖1。

表1 兩組外周血Th22及IL-22水平比較

a：Plt;0.05，與對(duì)照組比較

圖1 兩組外周血Th22比較

2.2不同病情嚴(yán)重程度患者外周血Th22及相關(guān)臨床指標(biāo)的比較 普通膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組及膿毒癥休克組患者外周血Th22、IL-22、APACHE Ⅱ評(píng)分及PCT水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。與普通膿毒癥組比較，嚴(yán)重膿毒癥組和膿毒癥休克組患者外周血IL-6和CRP明顯升高(Plt;0.05)，但在嚴(yán)重膿毒癥組和膿毒癥休克組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同病情嚴(yán)重程度患者外周血Th22及相關(guān)臨床指標(biāo)比較

a：Plt;0.05，與普通膿毒癥組比較；b：Plt;0.05，與嚴(yán)重膿毒癥組比較

2.3相關(guān)性分析 膿毒癥患者外周血Th22分別與PCT、APACHE Ⅱ評(píng)分呈正相關(guān)性(r=0.80、0.66，Plt;0.01)。見(jiàn)圖2。

圖2 膿毒癥患者外周血Th22與PCT、APACHE Ⅱ 評(píng)分的相關(guān)性分析

2.4外周血Th22對(duì)膿毒癥的早期診斷價(jià)值 通過(guò)以外周血Th22來(lái)評(píng)估膿毒癥早期診斷價(jià)值，繪制ROC曲線，AUC為0.846(95%CI：0.753～0.901)，最佳工作點(diǎn)(OOP)為1.9%，外周血Th22=1.9%，此時(shí)早期診斷膿毒癥的精確率較高(敏感性83.1%、特異性85.2%)。外周血PCT水平對(duì)早期診斷膿毒癥的AUC為0.801(95%CI：0.712～0.859)，明顯低于外周血Th22對(duì)膿毒癥早期診斷的準(zhǔn)確性。見(jiàn)圖3。

圖3 外周血Th22對(duì)膿毒癥早期診斷的ROC曲線

3 討 論

近年來(lái)，膿毒癥的發(fā)病率正呈現(xiàn)逐年升高趨勢(shì)，雖然相關(guān)研究已對(duì)膿毒癥的發(fā)病機(jī)制及相關(guān)治療取得了一定進(jìn)展，但其病死率仍居高不下，特別是對(duì)合并多器官功能障礙或休克的患者，其病死率可進(jìn)一步升高。如何有效的早期診斷及評(píng)估膿毒癥病情變化，對(duì)于個(gè)體化干預(yù)和降低其病死率具有重要的意義。相關(guān)研究顯示，患者機(jī)體免疫功能紊亂是膿毒癥發(fā)生、發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。Th22細(xì)胞是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)輔助型T細(xì)胞亞群，該細(xì)胞參與了多種自身免疫性疾病、炎癥性疾病及惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[7]，其可能也在膿毒癥早期診斷及病情變化的評(píng)估過(guò)程中具有重要的臨床價(jià)值。

Th22在促炎因子如IL-6、TNF-α的刺激作用下，可由CD4+T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)，可以特異性的分泌IL-22，促進(jìn)炎性細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞向感染部位募集[8]。IL-22作為T(mén)h22分泌的促炎細(xì)胞因子，可進(jìn)一步誘導(dǎo)大量促炎細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)，從而起到協(xié)同作用，放大機(jī)體炎癥反應(yīng)[9]。相關(guān)研究顯示，Th22參與介導(dǎo)了自身免疫性疾病、惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[10]。Th22是否參與了膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，其體內(nèi)Th22及IL-22表達(dá)水平如何，目前尚無(wú)資料證實(shí)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者外周血Th22、IL-22水平較對(duì)照組明顯升高，表明膿毒癥患者存在較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，其可能參與并促進(jìn)了膿毒癥的發(fā)生過(guò)程。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示，隨著患者病情嚴(yán)重程度的增加，其外周血Th22、IL-22、PCT水平及APACHE Ⅱ評(píng)分明顯升高。通過(guò)相關(guān)性分析，結(jié)果顯示膿毒癥患者外周血Th22與PCT水平、APACHE Ⅱ評(píng)分呈正相關(guān)。ROC曲線顯示，以外周血Th22診斷截點(diǎn)為1.9%時(shí)，其早期診斷膿毒癥的敏感性為83.1%，特異性為85.2%，明顯高于PCT。有研究顯示，PCT對(duì)于膿毒癥早期診斷及病情嚴(yán)重程度的評(píng)估敏感性和特異性均明顯高于CRP、IL-6等[11]，在膿毒癥患者外周血中，PCT水平與患者病情嚴(yán)重程度相關(guān)，但嚴(yán)重膿毒癥與膿毒癥休克患者間，CRP和IL-6水平無(wú)明顯差異。提示外周血PCT水平對(duì)于膿毒癥嚴(yán)重程度的評(píng)估有效性優(yōu)于CRP和IL-6。由此間接說(shuō)明外周血Th22對(duì)早期診斷及嚴(yán)重程度評(píng)估的有效性優(yōu)于PCT、CRP及IL-6。已有研究表明，通過(guò)有效地抑制腫瘤患者體內(nèi)Th22的激活，可以明顯抑制中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞的活化和聚集，從而降低腫瘤細(xì)胞的增殖、分化[12]。因此檢測(cè)外周血Th22具有重要的臨床價(jià)值，其不僅可作為評(píng)估膿毒癥患者早期診斷和病情嚴(yán)重程度的可靠指標(biāo)，還可能成為其治療的有效靶標(biāo)。

綜上所述，外周血Th22與膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但有關(guān)Th22在膿毒癥中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。本研究存在一定的局限性，樣本量偏少，未對(duì)外周血Th22在膿毒癥患者預(yù)后中的評(píng)估作進(jìn)一步的研究。

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ChangesandsignificanceofperipheralbloodTh22levelinpatientswithsepsis

LiuShuang,ChenJuan,JinLan,ZhuWei,ZhouYi△

(PhysicalExaminationCenter,ChongqingMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chonqging400021,China)

ObjectiveTo investigate the change of peripheral blood Th22 cells level in the patients with sepsis and its clinical significance.MethodsA total of 180 patients with sepsis in this hospital from April 2014 to April 2017 were selected as the research subjects and divided into the common sepsis group (81 cases),severe sepsis group (68 cases) and septic shock group (31 cases) according to the sepsis severity.The levels of IL-22,IL-6 and PCT in peripheral blood Th22 cells were measured in each group.The Acute Physiology and Chronic Health Evaluation Ⅱ (APACHE Ⅱ) scores were recorded.The efficiency of peripheral blood Th22 cells in the early diagnosis of sepsis was evaluated by adopting the receiver operating characteristic(ROC) curve.ResultsThe levels of peripheral blood Th22 cells and IL-22 in the patients with sepsis were significantly than those in the control group (Plt;0.05).The levels of Th22 cells,IL-22 and PCT and APACHE Ⅱ scores had statistical differences among the common sepsis group,severe sepsis group and septic shock group (Plt;0.05).The correlation analysis showed that peripheral blood Th22 cells level was positively correlated with PCT level and APACHE Ⅱ scores respectively (r=0.80,0.66,Plt;0.01).With peripheral blood Th22 cells level=1.9% as the boundary for early diagnosis of sepsis,its sensitivity and specificity were 83.1% and 85.2% respectively,which was significantly better than the PCT index.ConclusionPeripheral blood Th22 cells and related cytokines have the important clinical application value for the early diagnosis of sepsis and assessment of disease severity.

sepsis;diagnosis;interleukin-22;Th22 cells

劉爽(1984-)，醫(yī)師，本科，主要從事重癥醫(yī)學(xué)研究?！?/p>

，E-mail:xyzy03@163.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.33.017

R446

A

1671-8348(2017)33-4656-03

2017-05-14

2017-07-18)