陳士芳 許瑜佳 殷麗娟 陶淵璆 梅玨 王友慶

強直性脊柱炎患者血清及關(guān)節(jié)液中S100A8/9水平變化及意義

陳士芳 許瑜佳 殷麗娟 陶淵璆 梅玨 王友慶

目的 探討強直性脊柱炎（AS）患者血清及關(guān)節(jié)液中S100A8/9水平變化的臨床意義。方法 選擇門診和住院的AS患者55例，以常用AS疾病活動指數(shù)（BASDAI）中位數(shù)3.1為界分為活動期組19例和非活動期組36例，選擇同期健康體檢人員20例作為正常對照組。采用ELISA雙抗體夾心法測定S100A8/9水平，采用魏氏法測定ESR，采用Array-360特定蛋白分析儀測定C反應(yīng)蛋白（CRP）。比較各組血清S100A8/9、CRP和ESR水平，同時比較活動期組患者治療前后血清S100A8/9水平，并分析其與AS活動參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果 55例患者血清S100A8/9水平高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。15例AS患者關(guān)節(jié)液中S100A8/9水平高于其血清水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）?；顒悠诮M患者血清S100A8/9、CRP和ESR水平均高于非活動期組患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。19例活動期組患者治療3個月后平均BASDAI值和血清S100A8/9水平均較治療前下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。55例AS患者血清S100A8/9水平與BASDAI呈正相關(guān)（r=0.336，P＜0.05），而與ESR、CRP均無相關(guān)性（r=0.051和0.067，均P＞0.05）。結(jié)論 AS患者外周血清S100A8/9水平與疾病活動度密切相關(guān)，檢測AS患者血清S100A8/9水平對評價疾病活動度和療效判斷有一定價值。

強直性脊柱炎 S100A8/9 疾病活動度

強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是以脊柱和骶髂關(guān)節(jié)病變?yōu)樘卣鞯募膊。饕R床表現(xiàn)為腰部疼痛、發(fā)僵、活動受限、外周關(guān)節(jié)炎或關(guān)節(jié)外癥狀。由于病因不明，臨床上對疾病的早期診斷及活動度判斷尚無明確的標(biāo)準(zhǔn)，常用AS疾病活動指數(shù)（BASDAI）、C反應(yīng)蛋白（CRP）和ESR作為AS活動度標(biāo)準(zhǔn)，然而這些指標(biāo)都有一定的局限性，并不能完全反映疾病活動度。因此，尋找更多AS相關(guān)的指標(biāo)對早期診斷及評估病情具有重要的臨床意義。

S100A8和S100A9是S100鈣結(jié)合蛋白家族的一對蛋白，常以二聚體或多聚體形式存在于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的胞質(zhì)，發(fā)生炎癥時大量釋放至細(xì)胞外，成為炎癥反應(yīng)的重要趨化物。S100A8/9也稱為鈣防衛(wèi)蛋白，是S100A8和S100A9構(gòu)成的異質(zhì)二聚體。在各種不同疾病包括感染、炎癥和腫瘤患者的血清及體液中發(fā)現(xiàn)S100A8/9表達(dá)增加[1]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、抗中性粒細(xì)胞抗體相關(guān)的血管炎和成人斯蒂爾病患者血清中S100A8/9水平升高，并與疾病活動度相關(guān)，可以作為疾病活動度的生物學(xué)指標(biāo)[2-4]。文獻報道血清S100A8/9還可以作為中軸型和外周型脊柱關(guān)節(jié)病的臨床療效判斷指標(biāo)[5]。但目前少見S100A8/9與AS的相關(guān)報道，因此，本研究通過測定AS患者血清和關(guān)節(jié)液S100A8/9水平，了解S100A8/9在AS治療中的臨床意義。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2015年10月至2016年4月在本院門診和住院的AS患者55例，男43例，女12例；年齡15～42（22±13）歲；病程 0.5～12（3.6±2.5）年；有外周表現(xiàn)21例，其中外周關(guān)節(jié)炎15例，附著點炎7例，葡萄膜炎3例。所有病例診斷均符合1984年修訂的AS標(biāo)準(zhǔn)[6]，并排除類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、感染等合并疾病。55例患者平均BASDAI值為3.39±1.2，中位數(shù)值為3.1。以BASDAI中位數(shù)3.1為界分為活動期組19例和非活動期組36例。活動期組男 15 例，女 4 例；年齡 15～42（21±9）歲；病程0.5～7（3.1±2.2）年；伴有外周關(guān)節(jié)炎4例，僅為中軸受累15例。非活動期組男29例，女7例；年齡15～39（23± 14）歲；病程 0.9 ～12（4.2 ± 3.4）年。選擇同期本院健康體檢人員20例作為正常對照組，男15例，女5例；年齡16～36（20±9）歲。3組性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集 采用SSTⅡ真空采血管取待測者靜脈血 3.5ml，室溫靜置 1h，2 000r/min離心 10min，將血清分裝于0.5ml離心管內(nèi)，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?5例外周關(guān)節(jié)炎伴有膝關(guān)節(jié)積液的AS患者，在無菌條件下行膝關(guān)節(jié)穿刺，抽取關(guān)節(jié)液后，2 500r/min離心10 min，取上清液，分裝于0.5ml離心管內(nèi)，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 測定方法 S100A8/9試劑盒購自美國R&D Systems公司，按廠商提供的說明書操作。采用ELISA雙抗體夾心法測定S100A8/9水平，采用魏氏法測定ESR，采用Array-360特定蛋白分析儀測定CRP。

1.3 治療及隨訪 19例活動期患者均給予口服非甾體消炎藥，根據(jù)患者個體情況可選用不同類型非甾體消炎藥，所有活動期患者均服用柳氮磺吡啶腸溶片（上海信誼天平藥業(yè)，0.25g/片），使用方法：起始劑量 1.0g/d，每周增加0.5g，視病情逐漸增加至2.0/d，維持此劑量，治療3個月后，再次評估病情，進行BASDAI評分，同時檢測血清S100A8/9水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；組內(nèi)比較采用配對t檢驗。采用Pearson相關(guān)分析血清S100A8/9水平與AS活動參數(shù)的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清和關(guān)節(jié)液中S100A8/9水平 55例患者血清S100A8/9 水平為(11.91±8.44)μg/ml，高于正常對照組的（2.49±1.83）μg/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。15例AS患者關(guān)節(jié)液中 S100A8/9水平為（17.63±6.23）μg/ml，高于其血清水平（12.67±5.88）μg/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 各組血清S100A8/9水平、CRP和ESR比較 3組血清S100A8/9水平、CRP和ESR比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。活動期組患者血清S100A8/9水平、CRP和ESR均高于非活動期組患者和正常對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。而非活動期和正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1 各組血清S100A8/9水平、CRP和ESR比較

2.3 活動期組患者治療前后血清S100A8/9水平比較19例活動期組患者治療3個月后發(fā)現(xiàn)，平均BASDAI值從5.33±1.01下降到2.46±0.98，血清S100A8/9水平從（16.43±6.24）μg/ml下降到（6.88±3.93）μg/ml，治療前后比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。

2.4 血清S100A8/9水平與AS活動參數(shù)的相關(guān)性分析55例AS患者血清S100A8/9水平與BASDAI呈正相關(guān)（r=0.336，P＜0.05），而與 ESR、CRP 均無相關(guān)性（r=0.051和 0.067，均 P ＞0.05）。

3 討論

組織炎癥是AS主要的臨床特征之一，但是在臨床上很難有一種客觀和可靠的方法來量化和測量組織炎癥病變的程度，目前最常用的判斷炎癥的方法是MRI和CRP檢測。因MRI能反映滑膜炎、肌腱端炎及骨髓水腫的有無、范圍和程度，故常用MRI來判斷AS患者組織中的炎癥范圍。然而在某些AS患者中，MRI僅能代表局部組織炎癥病變，而不能反映外周疾病活動度。由于CRP水平在一定程度上與炎癥性疾病的活動度相關(guān)，并且有效治療后CRP值下降，因此它可以作為臨床上判斷疾病活動度和療效的觀察指標(biāo)，被列為AS疾病活動得分之一[7]。但相對MRI表現(xiàn)來說，CRP水平又很難反映局部組織炎癥的程度，并且僅有一小部分AS患者局部組織炎癥活動時CRP水平升高[8]。因此，到目前為止，還沒有一個生物標(biāo)志物既能反映AS患者局部組織炎癥病變，又能反映外周疾病活動。

S100A8/9是由骨髓細(xì)胞和中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的，當(dāng)這些細(xì)胞通過內(nèi)皮遷移至炎癥組織時即分泌S100A8/9。因此，局部組織如關(guān)節(jié)的滑液及炎癥性腸病分泌物中S100A8/9水平可以反映出骨髓細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤引起的組織炎癥反應(yīng)[9]。已有多項研究提示S100A8/9可反映多種其他類型關(guān)節(jié)炎的炎癥進展[2-4，10-11]。Geven等[12]報道以外周關(guān)節(jié)炎為主的AS患者血清中S100A8/9升高，本研究發(fā)現(xiàn)AS患者血清中S100A8/9水平也升高，而且其中15例伴外周關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中S100A8/9水平明顯高于其血清水平，這提示S100A8/9水平可能反映AS患者存在外周關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)，下一步可擴大樣本量比較伴外周關(guān)節(jié)炎與僅有中軸受累患者血清S100A8/9水平的差異。

本研究以BASDAI 3.1為界將AS患者分為活動期組和非活動期組，其中活動期組包括伴有外周關(guān)節(jié)炎的患者和僅為中軸受累的患者，筆者發(fā)現(xiàn)活動期組血清S100A8/9水平高于非活動期組，這提示血清S100A8/9水平不僅能反映伴有外周關(guān)節(jié)受累AS患者的疾病活動性，而且能反映僅中軸受累AS患者的疾病活動性。Baeten等[13]報道AS患者經(jīng)過抗IL-17A單克隆抗體治療后血清S100A8/9水平下降，筆者也發(fā)現(xiàn)19例活動期AS患者經(jīng)過治療，隨著病情活動度下降，血清中S100A8/9水平降低，因此，S100A8/9可以作為AS治療療效觀察指標(biāo)之一。同時，筆者對血清S100A8/9水平與BASDAI、CRP和ESR作相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)S100A8/9與BASDAI呈正相關(guān)，但與CRP、ESR均無相關(guān)性，這說明這些指標(biāo)反映了疾病的不同方面，因此這些指標(biāo)對AS疾病活動評價能起到互補作用。

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（本文由浙江省醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會推薦）

Clinical significance of S100A8/9 levels in serum and synovial fluid of patients with ankylosing spondylitis

CHEN Shifang,XU Yujia,YIN Lijuan,et al.
Department of Rheumatology,Huzhou Central Hospital,Huzhou 313000,China

Objective To investigate the clinical significance of S100A8/9 levels in serum and synovial fluid of patients with ankylosing spondylitis(AS). Methods Fifty five patients with AS were included in the study,including 19 cases of active AS and 36 cases of non-active AS according to Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index(BASDAI)median(3.1),and 20 healthy subjects served as the control group.The levels of S100A8/9 in serum and synovial fluid were measured by ELISA assay before and after the treatment.The level of S100A8/9,CRP and ESR were compared in the three groups.The correlation between S100A8/9 and BASDAI was analyzed. Results Serum S100A8/9 levels in 55 patients with AS were significantly higher than those in controls(P＜0.01).The S100A8/9 levels in synovial fluid from 15 AS patients were significantly higher than those in serum(P＜0.01).The serum levels of S100A8/9,CRP and ESR in active AS patients were significantly higher than those in non-active AS patients(all P＜0.01).After three months of treatment,the serum levels of S100A8/9 and BASDAI from 19 patients with active diseases were significantly decreased.Serum levels of S100A8/9 in 55 AS patients were positively correlated with BASDAI(r=0.336,P＜0.05),but not correlated with CRP and ESR levels((r=0.051 and 0.067,both P＞0.05). Conclusion Serum S100A8/9levels are associated with active disease in AS patients,indicating that serum S100A8/9 levels might be a potential marker for disease activity in AS.

Ankylosing spondylitis S100A8/9 Disease activity

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.21.2017-1612

湖州市科學(xué)技術(shù)局項目（2016GYB24）

313000 湖州市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科

陳士芳，E-mail：chen651215@126.com

2017-07-07）

陳麗）