孫 震，任 瑞，李增良，畢 波

(河北省林果?；ㄙ|(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)管理中心，河北石家莊 050081)

LC-MS-MS法測(cè)定葡萄中的脫落酸含量

孫 震，任 瑞，李增良，畢 波

(河北省林果?；ㄙ|(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)管理中心，河北石家莊 050081)

葡萄中含有較多的糖類、色素和果膠，干擾項(xiàng)較多，對(duì)微量脫落酸進(jìn)行定量分析較為困難。針對(duì)此問(wèn)題，建立了高效測(cè)定葡萄中脫落酸含量的LC-MS-MS方法，對(duì)提取劑、提取方式、富集凈化、色譜條件和質(zhì)譜條件多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行了研究。將葡萄樣品粉碎勻漿制成待測(cè)樣，以甲醇+甲酸(二者體積比為99.5∶0.5)作為提取劑，振蕩提取30 min，將提取液經(jīng)MAX Cartridge SPE柱富集凈化后進(jìn)行分析。當(dāng)上樣溶劑為20%～50%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))的甲醇時(shí)，凈化洗脫效率較好，能有效去除雜質(zhì)。色譜條件為ODS2色譜柱(2.1 mm×150 mm，5 μm)，乙腈為A相、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的甲酸作為B相流動(dòng)相，流量為0.2 mL/min，梯度洗脫。在負(fù)離子監(jiān)測(cè)模式下，選擇263.1～153.2作為定性定量離子對(duì)，采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間和SRM圖譜，對(duì)照2種方式對(duì)樣品進(jìn)行準(zhǔn)確定性，外標(biāo)法以峰面積計(jì)算進(jìn)行定量。結(jié)果表明，在19.05～381.00 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率為92.2%～110.4%，RSD值<8.1%，可為高效、快速、準(zhǔn)確測(cè)定葡萄中的脫落酸含量提供有價(jià)值的分析方法。

食品檢驗(yàn)學(xué)；LC-MS-MS法；測(cè)定；葡萄；脫落酸含量

脫落酸又叫S-誘抗素，具有促進(jìn)植物平衡吸收水肥和協(xié)調(diào)體內(nèi)代謝的能力，對(duì)葡萄的抗逆性和果實(shí)品質(zhì)均有一定的影響。在實(shí)際生產(chǎn)中施用適當(dāng)濃度的脫落酸可以提高葡萄的抗逆性和商品價(jià)值，減少農(nóng)藥和其他化學(xué)藥品的施用量[1]。葡萄中含有較多的糖類、色素和果膠，干擾項(xiàng)較多，對(duì)微量脫落酸進(jìn)行定量分析較為困難。目前，脫落酸的測(cè)定方法主要有液相色譜法[2-7]、氣質(zhì)聯(lián)用法[8-9]、酶聯(lián)免疫法[10-11]、液相色譜質(zhì)譜法[12-17]等。液相色譜法具有較高的準(zhǔn)確性，但易受到基體雜質(zhì)干擾的影響，糖類、果膠等復(fù)雜基質(zhì)條件下的應(yīng)用研究少有報(bào)道。氣質(zhì)聯(lián)用法利用了質(zhì)譜檢測(cè)的高靈敏度，但通常需要進(jìn)行柱前衍生來(lái)提高植物激素的揮發(fā)性，而且氣相色譜入口處和色譜柱所處的高溫可能會(huì)使植物激素分解，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。酶聯(lián)免疫法具有較高的特異性，作為一種快速篩選方法，具有較大的應(yīng)用潛力，但由于易出現(xiàn)交叉反應(yīng)，因此在適用范圍、靈敏度、準(zhǔn)確性等方面都受到一定的限制。本研究建立的色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法，兼具色譜的高分離能力和質(zhì)譜的強(qiáng)鑒別能力，對(duì)復(fù)雜基質(zhì)有良好的靈敏度，無(wú)需衍生化，前處理程序簡(jiǎn)化，具有前處理操作簡(jiǎn)單、線性范圍寬、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，可以縮短檢測(cè)時(shí)間，減少誤判，提高準(zhǔn)確度，對(duì)提高葡萄中脫落酸的檢測(cè)效率、保障葡萄果品質(zhì)量安全具有積極的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1儀器設(shè)備與試劑材料

LC-MS-MS，UltiMate 3000+TSQ Quantum Access Max，Thermo SCIENTIFIC公司提供；3K30高速冷凍離心機(jī)，SiGMA公司提供；SD超聲波清洗器，北京中晟銘科技有限公司提供；MS3 basic渦旋振蕩器，IKA公司提供；N-EVAP氮吹儀，Organomation公司提供；Nylon針式濾膜0.22 μm，DiKMA公司提供；電子天平，梅特勒公司提供；MAX SPE固相萃取柱，Waters公司提供；甲醇、乙腈，殘留級(jí)，F(xiàn)isher Scientific公司提供；甲酸、脫落酸(98.5%)，SiGMA-ALDRRICH公司提供；葡萄為市場(chǎng)購(gòu)買。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備

將新鮮的葡萄去梗，放入食品加工器粉碎勻漿，制成待測(cè)樣后放入分裝容器中，于-20～-16 ℃條件下保存，備用。

1.2.2 試樣提取劑前處理

稱取勻漿試樣10.0 g(精確至0.1 g)，置于50 mL具塞聚丙烯試管中(用于回收試驗(yàn)的樣品，加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液并勻漿)，加入20.0 mL提取劑(甲醇+甲酸，二者體積比為99.5∶0.5)，于渦旋振蕩器中混合1 min，超聲提取30 min，然后以5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心8 min，將上清液轉(zhuǎn)移至50 mL比色管中。將殘?jiān)尤? mL提取劑，在渦旋振蕩器上充分混合2 min，再以5 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心8 min，合并上清液。再重復(fù)1次，合并上清液，用水定容至50 mL。

將固相萃取柱經(jīng)5 mL甲醇平衡，用5 mL水淋洗。取上清液5 mL，過(guò)萃取柱，用 5 mL甲醇洗脫，洗脫液氮吹，用甲醇定容至5 mL，過(guò)0.22 μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.2.3 色譜條件

采用Inertsil ODS2(2.1 mm×150 mm，5 μm)色譜柱(日本GL Science公司提供)；流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為0.1%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲酸水溶液，流速為0.2 mL/min。梯度洗脫：0～3 min，3%A；3～8 min，3%～50%A；8～10 min，50%～70%A；10～15 min，70%～80%A；15～25 min，80%A；25～27 min，80%～3%A；27～30 min，3%A。流速為0.2 mL/min，進(jìn)樣10.0 μL。

1.2.4 質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子模式采集；噴霧電壓為3 000 V；輔助氣流量，N25 arb；鞘氣壓力，N25 psi；碰撞氣壓力，Ar 1.0 mTorr；毛細(xì)管溫度為275.0 ℃；蒸氣溫度為180.0 ℃；選擇SRM監(jiān)測(cè)模式。定性定量離子對(duì)為263.1～153.2。其他質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 質(zhì)譜參數(shù)

1.2.5 定性與定量

采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間和SRM圖譜對(duì)照2種方式對(duì)樣品進(jìn)行準(zhǔn)確定性，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算進(jìn)行定量。依次配置不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，定量離子峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1提取條件的選擇

2.1.1 提取劑和提取方式

分別以甲醇、80%甲醇、90%甲醇、甲醇+甲酸(二者體積比為99.5∶0.5)、甲醇+水+甲酸(三者體積比90∶9.5∶0.5)、乙腈、80%乙腈作為提取劑，按照“試樣前處理”稱樣、加標(biāo)和定容。對(duì)第1組采用振蕩提取方式提取60 min，對(duì)第2組采用超聲提取的方式提取30 min，對(duì)比各提取劑在不同提取方式下的提取效率，結(jié)果見表2。

表2 提取效率比較

由表2可以看出：1)超聲提取方式的提取效率顯著高于振蕩提取方式，7種溶劑采用振蕩提取、超聲波提取方式，脫落酸回收率分別為30%～65%和95%～108%；2)在超聲波提取方式下，除80%乙腈外，其他6種提取劑的提取效率沒有顯著差別，同時(shí)，酸性環(huán)境下可以抑制目標(biāo)物質(zhì)的離子化，以獲得對(duì)稱的色譜峰型。因此，綜合考慮提取效率和提取劑的毒性，確定甲醇+甲酸(二者體積比為99.5∶0.5)為目標(biāo)物提取劑。

2.1.2 提取時(shí)間

以甲醇+甲酸(二者體積比為99.5∶0.5)作為提取劑，超聲波提取時(shí)間分別定在15，30，45，60 min，選擇較高效率、滿足回收率要求的提取時(shí)間。結(jié)果見圖1。結(jié)果表明：超聲提取30 min時(shí)，提取效率滿足要求。

圖1 提取時(shí)間的選擇Fig.1 Extraction time selection

2.2富集凈化條件的選擇

綜合時(shí)間成本和工作效率，采用了固相萃取法(SPE)。實(shí)驗(yàn)對(duì)1# StrataTMX patent pending (Phenomenex, 60 mg/3 mL)，2# AccuBOND ODS-C18(Agilent Tech., 500 mg/6 mL)，3# Cleanert NH2(Agela Tech.，500 mg/6 mL)，4# MAX Cartridge (Waters OASIS，500 mg/6 mL) 等固相萃取柱進(jìn)行了測(cè)試，分別考察上樣溶劑為20%甲醇、50%甲醇和100%甲醇時(shí)，4種SPE柱的吸附洗脫效率。實(shí)驗(yàn)步驟如下：1)SPE平衡，先用5 mL甲醇淋洗，再用5 mL水淋洗；2)上樣，取脫落酸儲(chǔ)備液0.1 mL，加入到10 mL的容量瓶中，臨用時(shí)分別配制成溶解介質(zhì)為20%甲醇、50%甲醇和100%甲醇的標(biāo)準(zhǔn)混合工作溶液，取上述工作溶液1.0 mL加到SPE柱上；3)洗脫，用5.0 mL甲醇洗脫，收集洗脫液并定容至5.0 mL，搖勻，此洗脫液過(guò)0.22 μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。結(jié)果表明：脫落酸在4# MAX Cartridge SPE柱的吸附洗脫效率較好，能有效去除雜質(zhì)，當(dāng)上樣溶劑為20%～50%甲醇時(shí)效果較佳。

2.3色譜條件的選擇

色譜柱 脫落酸與葡萄常用植物激素赤霉素的極性差異相對(duì)較小，通過(guò)調(diào)節(jié)洗脫梯度可以分離。結(jié)果表明，Spursil(思博爾)C18-EP，Inertsil(日本GL)ODS2均能夠滿足要求。

流動(dòng)相及梯度 由于乙腈黏度較低，且使用乙腈時(shí)離子化效率優(yōu)于甲醇，因此優(yōu)先選用乙腈作為流動(dòng)相A相，甲酸水溶液(0.1%甲酸)作為B相。洗脫梯度見表3。

表3 洗脫梯度

離子監(jiān)測(cè)模式 采用電噴霧質(zhì)譜(ESI源)，總離子監(jiān)測(cè)方式，單標(biāo)進(jìn)樣，分別在正離子、負(fù)離子監(jiān)測(cè)模式下，對(duì)質(zhì)譜測(cè)定參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，比較總離子流的豐度和穩(wěn)定性。結(jié)果表明，負(fù)離子模式下總離子流的豐度和穩(wěn)定性更佳。

定量離子對(duì) MS/MS+MS方式下，單標(biāo)進(jìn)樣進(jìn)一步優(yōu)化毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、碰撞能量，篩選特征母離子下的子離子，優(yōu)選離子流穩(wěn)定、豐度高的母離子-子離子作為定性定量離子對(duì)。脫落酸MS/MS+MS圖見圖2。結(jié)果表明，263.1～153.2適宜作為定性定量離子對(duì)。

圖2 脫落酸MS/MS+MS圖Fig.2 Abscisic acid MS/MS+MS chart

2.4質(zhì)譜條件的選擇

在選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)SRM模式下，分別優(yōu)化離子對(duì)的質(zhì)譜參數(shù)，確定最佳碰撞能量，作為定量測(cè)定條件。在Chrom Filter Peak Width為10 s，Collision Gas Pressure為1.0 m Torr，Q1 Peak Width(FWHM)為0.40，Cycle Time為5 s的條件下，碰撞能量為14 V、錐孔電壓(Tube Lens)為-53 V較為適宜。

2.5方法評(píng)價(jià)

2.5.1 線性關(guān)系

配置脫落酸系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度依次為19.05，38.10，95.25，190.50，381.00 ng/mL。按照上述方法進(jìn)行LC-MS-MS分析，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。以峰面積y對(duì)質(zhì)量濃度x(ng/mL)進(jìn)行線性回歸分析，y=320.12x+555.54，R2=0.999，滿足農(nóng)藥殘留分析要求。進(jìn)一步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在9.53～952.50 ng/mL范圍內(nèi)也呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。

2.5.2 檢出限

以低含量標(biāo)準(zhǔn)物作為樣品，按上述方法平行測(cè)定20次，以測(cè)定值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差/標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率方法，計(jì)算方法的檢出限為0.06 mg/kg。

2.5.3 回收率和精密度

以葡萄作為基質(zhì)，按0.238，0.476，1.905 mg/kg 3個(gè)水平加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平平行測(cè)定5次。添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表4。結(jié)果表明，方法的平均回收率為92.2%～110.4%，RSD值<8.1%。

表4 添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.5.4 測(cè)量不確定度評(píng)定

以實(shí)驗(yàn)室內(nèi)添加8次平行檢測(cè)結(jié)果作為數(shù)據(jù)來(lái)源，建立方法測(cè)量不確定度評(píng)定數(shù)學(xué)模型，識(shí)別不確定度來(lái)源，量化、計(jì)算不確定度分量，測(cè)算合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果得知：在包含因子k=2(95%置信度)的情況下，試樣品中脫落酸的含量為(0.39±0.08)mg/kg，擴(kuò)展不確定度U=0.08 mg/kg。

3 討 論

提取液富集凈化過(guò)程中，上樣溶劑的含水率對(duì)SPE柱的洗脫效率具有較大影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)上樣溶劑含水率低于50%時(shí)，目標(biāo)物質(zhì)的回收率不能滿足定量測(cè)定要求。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定，大部分葡萄品種水分含量為76.8%～86.6%。綜合以上因素確定稱樣量和提取劑的用量，以保證將最終上樣溶劑的含水率控制在可接受的范圍內(nèi)。

適合的流動(dòng)相能夠改善色譜峰型。在流動(dòng)相中加入適當(dāng)?shù)募姿?或乙酸、三氯乙酸、磷酸等)，可以抑制目標(biāo)物質(zhì)的離子化，以獲得對(duì)稱的色譜峰型。實(shí)驗(yàn)中選擇0.05%，0.1%，0.2%，0.5%的甲酸水溶液作為B相流動(dòng)相，比較流動(dòng)相對(duì)目標(biāo)物質(zhì)分離效果的影響。結(jié)果表明，低于0.2%的甲酸水溶液對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的分離效果影響不顯著，對(duì)目標(biāo)物質(zhì)離子化效率的影響相對(duì)較低。同時(shí)，綜合考慮流動(dòng)相酸性對(duì)色譜柱的長(zhǎng)期影響，測(cè)定方法中選用0.1%的甲酸。

離子監(jiān)測(cè)模式是目標(biāo)物質(zhì)定性和定量的決定性因素之一。結(jié)果表明，正離子模式下，脫落酸易解離成為2個(gè)峰，由于同時(shí)產(chǎn)生[M+H]+和[M+H2O]+等多種類型子離子，單特征離子豐度和穩(wěn)定性均不夠理想。因此，應(yīng)選用更為穩(wěn)定的負(fù)離子模式。

4 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)提取條件、富集凈化條件、色譜條件、質(zhì)譜條件的研究，建立了葡萄中脫落酸的LC-MS-MS定量測(cè)定方法，得到了較好的分離方法和檢測(cè)技術(shù)條件。本方法操作簡(jiǎn)便，線性范圍寬，回收率、精密度、檢出限滿足農(nóng)藥殘留定量檢測(cè)要求，適合批量樣品的定量測(cè)定，對(duì)其他植物激素的測(cè)定方法研究具有一定的借鑒意義。目前，為縮短檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)，提高檢測(cè)效率，在色譜梯度方面仍有進(jìn)一步改進(jìn)提升的空間。隨著液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀的應(yīng)用越來(lái)越普及，本方法在葡萄中脫落酸含量的檢測(cè)方面會(huì)具有廣泛的應(yīng)用前景。

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[1] 何昊.脫落酸對(duì)葡萄抗逆性和果實(shí)品質(zhì)的影響研究[D]. 成都:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

HE Hao. Effect of ABA on Stress Resistance and Fruit Quality of Grape[D]. Chengdu: Sichuan Agricultural University,2013.

[2] 孫崇臻，王超，蔡子哲，等. 高效液相色譜測(cè)定蜂蜜中的脫落酸、黃酮和酚酸[J].食品科學(xué)，2013,34(10): 281-285.

SUN Chongzhen, WANG Chao, CAI Zizhe, et al. Determination of flavonoids, phenolic acids and abscisic acid in honeys of different floral origins by HPLC[J]. Food Science, 2013, 34(10): 281-285.

[3] 王水良，王平，王珍義. 固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定馬尾松組織中內(nèi)源激素[J]. 分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2010,26(5):547-550.

WANG Shuiliang, WANG Ping, WANG Zhenyi. Determination of endogenous hormones in (PinusmassonianaLamb) using solid phaseextraction-high performance liquid chromatography[J]. Journal of Analytical Science, 2010, 26(5): 547-550.

[4] 陳亞玲，江陽(yáng)，李永新，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定瓜果中6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016,43(5):891-895.

CHEN Yaling, JIANG Yang, LI Yongxin, et al. Simultaneous determination of six plant growth regulators in melon andfruit by high-performance liquid chromatography[J]. Modern Preventive Medicine, 2016, 43(5): 891-895.

[5] 馬宏棋, 陳敏氡, 朱海生, 等. 草莓 ABA 的快速提取方法及超高效液相色譜分析[J]. 園藝學(xué)報(bào), 2014, 41(3): 577-584.

MA Hongqi, CHEN Mindong, ZHU Haisheng, et al. Rapid method for the extraction of abscisic acid from strawberry and analysis by ultra-high performance liquid chromatography[J].Acta Horticulturae Sinica, 2014, 41(3): 577-584.

[6] 胡西洲，彭西甜，余瓊衛(wèi)，等.固相萃取-分散液液微萃取-高效液相色譜測(cè)定椰子汁中酸性植物激素[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29(5):593-598.

HU Xizhou, PENG Xitian, YU Qiongwei, et al. Determination of acidic phytohormones in natural coconut juice by combining solid-phase extraction and molecular conlex-base dispersive liquid-liquid microextraction with high performance liquid chromatograph[J]. Journal of Analytical Science, 2013, 29(5): 593-598.

[7] 楊楊，范蓓，生吉萍，等.高效液相色譜測(cè)定芒果皮中脫落酸的含量[J].食品工業(yè)科技，2014，35(2):76-79.

YANG Yang, FAN Bei, SHENG Jiping, et al. Analysis of abscisic acid content in peel of mango by HPLC[J]. Science and Technology of Food Industry, 2014, 35(2): 76-79.

[9] 李莉，田士林. 酶聯(lián)免疫(ELISA)分析晉麥葉片中脫落酸的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007, 35(23): 7098-7099.

LI Li, TIAN Shilin. ELISA analysis on the ABA content of Jinmai leaves[J]. Journal of Anhui Agri Sci,2007, 35(23) : 7098-7099.

[10] FERNANDEZ B, CENTENO M L, FEITO I, et al. Simultaneous analysis of cytokinins, auxins and abscisic acid by combined immunoaffinity chromatography, high performance liquid chromatography and immunoassay [J].Phytochem Analysis, 1995, 6: 49-54.

[11] 李金克，陳華君，陳少良. GC-MS 內(nèi)標(biāo)法定量分析植物組織中的JA,IAA 和ABA[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32(5): 143-148.

LI Jinke, CHEN Huajun, CHEN Shaoliang. Quantitative analysis of jasmonic acids，indole-3-acetic acid and abscisic acid in plant tissues by GC-MS[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2010, 32(5): 143-148.

[12] 侯升杰，朱江，丁明玉，等.液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定冬青芽中的脫落酸[J].分析試驗(yàn)室，2009，28(3): 96-98.

HOU Shengjie, ZHU Jiang, DING Mingyu, et al. Determination of abscisic acid in holly buds by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry[J].Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2009, 28(3): 96-98.

[13] 徐生堅(jiān)，曹慧，陳小珍. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定糧谷中6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留[J].食品科學(xué)，2013，34(18): 218-223.

XU Shengjian, CAO Hui, CHEN Xiaozhen. Determination of plant growth regulator residues in grains by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Science, 2013, 34(18): 218-223.

[14] 張慧，吳穎，路勇，等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蘋果中的赤霉素、脫落酸、甲萘威、多效唑和烯效唑的殘留量[J]. 食品工業(yè)科技，2010，31(10): 383-385.

ZHANG Hui, WU Ying, LU Yong, et al. Determination of gibberellin,abscisic acid, carbaryl, paclobutrazol and uniconazole in apples by ultra performance liuid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Science and Technolgy of Food Industry, 2010, 31(10): 383-385.

[15] 潘星燕,陸云霞,姚軍.高效液相色譜法測(cè)定芒柄花素磺酸鈉相關(guān)物質(zhì)[J].河北科技大學(xué)學(xué)報(bào),2017,38(1):32-38.

PAN Xingyan,LU Yunxia,YAO Jun. Related substance determination of formononetin by HPLC[J]. Journal of Hebei University of Science and Technology，2017,38(1):32-38.

[16] 易勇，唐旭，林錫煌，等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定馬尾藻中4種內(nèi)源性植物激素[J].分析化學(xué)，2016，44(1):124-130.

YI Yong, TANG Xu, LIN Xihuang, et al. Simultaneous determination of 4 kind of plant hormones in sargassum by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry [J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2016, 44(1): 124-130.

[17] 龔明霞,王日升,何龍飛,等.超高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定植物組織中多種激素[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2016，32(6): 789-794.

GONG Mingxia, WANG Risheng, HE Longfei, et al. Simultaneous determination of multiple phytohormones in plant tissues by ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry[J]. Journal of Analytical Science, 2016, 32(6): 789-794.

Analysis of abscisic acid content in grape by LC-MS-MS

SUN Zhen，REN Rui，LI Zengliang，BI Bo

(Hebei Provincial Center for Quality Supervision and Test of Forestry Fruit, Mulberry and Flower, Shijiazhuang，Hebei 050081，China)

Grape contains much sugar, pigment and pectin, which has interference and makes it difficult for quantitative analysis of trace abscisic acid. To solve this problem, LC-MS-MS method for the determination of abscisic acid in grape is established. Several key aspects including extractant, extract methods, enrichment, chromatographic conditions and mass spectrometry are studied. The test sample is prepared through pulverization and homogenate of grape sample, and analyzed with methanol + formic acid (V/V=99.5/0.5) as the extractant, after oscillation extraction for 30 min, and with MAX Cartridge SPE as the enrichment and purification extractant. The research shows that the elution efficiency is better and the impurities can be removed effectively when the solvent is methanol of 20%～50%(mass fraction); the chromatographic condition is of ODS2(2.1 mm×150 mm，5 μm)column, acetonitrile as the phase A, 0.1% formic acid as mobile phase B, flow rate at 0.2 mL/min, and gradient elution is performed; 263.1～153.2 is used as the qualitative-quantitative ion pair in the negative ion monitoring mode, the samples are characterized by the retention time and the SRM atlas, and the external standard method is quantified by the peak area. The method has a calibration curves of good linearity over the range from 19.05 to 381.00 ng/mL. The recovery rate is 92.2%～110.4%, and RSD is less than 8.1%. This research provides an efficient and accurate method for the determination of abscisic acid in grapes.

food inspection； LC-MS-MS； analysis； grape； ABA(abscisic acid) content

1008-1534(2017)06-0428-06

S379.1

A

10.7535/hbgykj.2017yx06007

2017-08-14;

2017-09-26；責(zé)任編輯：張士瑩

河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目(14225503D)

孫 震(1970—)，男，河北清苑人，高級(jí)工程師，主要從事林果質(zhì)量安全方面的研究。

任 瑞正高級(jí)工程師。 E-mail:1608887877@qq.com

孫 震，任 瑞，李增良，等. LC-MS-MS法測(cè)定葡萄中的脫落酸含量[J].河北工業(yè)科技,2017,34(6):428-433.

SUN Zhen, REN Rui, LI Zengliang,et al . Analysis of abscisic acid content in grape by LC-MS-MS[J].Hebei Journal of Industrial Science and Technology,2017,34(6):428-433.