馬姍姍，王旭蘭，于 婷，王群讓

1.458030河南省鶴壁市人民醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科 2.712000陜西省咸陽(yáng)市，咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院 3.712000陜西省咸陽(yáng)市，陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科

空腹血糖與急性冠脈綜合征合并2型糖尿病患者循環(huán)微粒濃度的相關(guān)性研究

馬姍姍1，王旭蘭2，于 婷2，王群讓3

1.458030河南省鶴壁市人民醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科 2.712000陜西省咸陽(yáng)市，咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院 3.712000陜西省咸陽(yáng)市，陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科

目的分析空腹血糖與急性冠脈綜合征(ACS)合并2型糖尿病患者循環(huán)微粒(MPs)濃度的相關(guān)性。方法選取2014年7—12月陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科收治的ACS患者77例，其中未合并2型糖尿病者42例(A組)、合并2型糖尿病者35例(B組)；另選取同期體檢健康者20例作為對(duì)照組。比較3組受試者血脂指標(biāo)、循環(huán)MPs濃度及內(nèi)皮型一氧化氮(eNOS)蛋白相對(duì)表達(dá)量，空腹血糖與ACS合并2型糖尿病患者循環(huán)MPs濃度的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析。結(jié)果3組受試者總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A組和B組患者低密度脂蛋白(LDL)和循環(huán)MPs濃度高于對(duì)照組，B組患者LDL和循環(huán)MPs濃度高于A組(P<0.05)。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，空腹血糖與ACS合并2型糖尿病患者循環(huán)MPs濃度呈正相關(guān)(r=0.59，P<0.01)。A組和B組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，B組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量低于A組(P<0.05)。結(jié)論空腹血糖與ACS合并2型糖尿病患者循環(huán)MPs濃度有關(guān)，空腹血糖可能通過(guò)增加循環(huán)MPs濃度而抑制抗動(dòng)脈硬化作用。

急性冠脈綜合征；血糖；循環(huán)微粒

臨床研究顯示，急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)合并2型糖尿病患者的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化程度較嚴(yán)重，且糖尿病被認(rèn)為是ACS的等危癥[1]。病理學(xué)研究顯示，糖尿病與ACS均可通過(guò)激活凝血系統(tǒng)而導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能異常[2-4]。微粒(microparticles，MPs)是在各種炎性因子或有害因素刺激下由內(nèi)皮細(xì)胞、血小板和中性粒細(xì)胞等血管源細(xì)胞激活而釋放的納米級(jí)顆粒。早期，循環(huán)MPs被認(rèn)為是細(xì)胞垃圾，但大量研究顯示，病理狀況下循環(huán)MPs具有促進(jìn)炎癥、促進(jìn)凝血、抑制離體細(xì)胞及心肌組織血管新生、損傷內(nèi)皮細(xì)胞功能等作用[5-7]。但血糖升高是否會(huì)影響循環(huán)MPs濃度尚未明確。本研究旨在分析空腹血糖與ACS合并2型糖尿病患者循環(huán)MPs濃度的影響，探討空腹血糖在ACS合并2型糖尿病患者中的分子生物學(xué)機(jī)制。

1 對(duì)象與方法

1.1 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)合并急慢性腎功能不全、高血壓及自身免疫系統(tǒng)疾病者；(2)近3個(gè)月內(nèi)有創(chuàng)傷、急性感染和手術(shù)者。

1.2 一般資料 選取2014年7—12月就診于陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科的ACS患者77例，均符合2007年美國(guó)心臟協(xié)會(huì)(AHA)、美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)基金會(huì)(ACCF)、歐洲心臟學(xué)會(huì)(ESC)發(fā)布的ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中未合并2型糖尿病者42例作為A組，合并2型糖尿病者35例作為B組。A組中男24例，女18例；平均年齡(48.6±5.4)歲；疾病類(lèi)型：不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)26例，ST段抬高型心肌梗死(STEMI)10例，非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)6例。B組中男20例，女15例；平均年齡(45.8±6.8)歲；疾病類(lèi)型：UAP 19例，STEMI 10例，NSTEMI 6例。另選取同期在陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院進(jìn)行體檢的體檢健康者20例作為對(duì)照組，其中男10例，女10例；平均年齡(40.3±7.6)歲。3組受試者年齡(F=1.78)和性別(χ2=1.06)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A組和B組患者疾病類(lèi)型比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.46，P>0.05)，具有可比性。本研究所有受試者簽署知情同意書(shū)，且本研究經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.3 糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn) 有糖尿病病史，且入院時(shí)空腹血糖≥7.0 mmol/L。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 主要儀器與試劑 RPMI 1640培養(yǎng)基(Biosera，美國(guó))，高速離心機(jī)(Beckman coulter，美國(guó))，采血管及離心管(BD，美國(guó))，BCA蛋白定量試劑盒(Thermo，美國(guó))，脫脂奶粉(國(guó)奧生物科技有限公司，北京)，RIPA蛋白裂解液(Cell Signaling Technology，美國(guó))，內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)抗體(Santa Cruz，美國(guó))，GAPDH抗體(Protein Tech Group，美國(guó))，超聲破碎儀(Cole-Parmer，美國(guó))，X射線膠片(柯達(dá)，美國(guó))，電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(Bio-RAD，美國(guó))，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Science Cell，美國(guó))，EPSON掃描儀(Epson，日本)。

1.4.2 血脂檢測(cè)方法 采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)。

1.4.3 循環(huán)MPs提取及檢測(cè)方法 3組受試者均于空腹?fàn)顟B(tài)下抽取肘靜脈血3 ml，低溫運(yùn)輸至心血管病研究所，參考文獻(xiàn)[8]中方法于4 h內(nèi)提取MPs：首先離心血液(4 ℃，4 000×g，10 min)取得血漿，然后將血漿移入離心管并離心(4 ℃，11 000×g，2 min)獲得乏血小板血漿，再次離心乏血小板血漿(4 ℃，13 000×g，45 min)獲得MPs，最后采用RPMI 1640培養(yǎng)基重懸MPs。將提取的MPs放置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?可存放3周)，采用BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)循環(huán)MPs濃度。

1.4.4 eNOS蛋白檢測(cè)方法 分別采用含有一定濃度循環(huán)MPs的培養(yǎng)基(對(duì)照組為1.5 mg/ml，A組和B組為2.5 mg/ml)孵育人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞12 h，孵育結(jié)束后棄細(xì)胞上清液，取冰冷RIPA蛋白裂解液1 ml裂解細(xì)胞5 min，將裂解的細(xì)胞懸液再次使用超聲破碎儀進(jìn)一步破碎(20 Hz，9 s)后置于離心機(jī)離心(4 ℃，12 000×g，10 min)；離心結(jié)束取10 μl蛋白樣液，采用BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，進(jìn)行免疫印跡試驗(yàn)(主要步驟為蛋白電泳-蛋白轉(zhuǎn)膜-5%牛血清白蛋白封閉-一抗孵育-二抗孵育-蛋白顯影和定影至X線膠片)，然后采用EPSON掃描儀掃描膠片，最后采用Image J軟件統(tǒng)計(jì)分析3組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 3組受試者血脂指標(biāo)和循環(huán)MPs濃度比較 3組受試者TC、TG、HDL比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3組受試者LDL和循環(huán)MPs濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中A組和B組患者LDL和循環(huán)MPs濃度高于對(duì)照組，B組患者LDL和循環(huán)MPs濃度高于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。

Table1 Comparison of blood lipid index and circulation MPs concentration among the three groups

組別例數(shù)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)循環(huán)MPs(g/L)對(duì)照組204 13±1 231 27±0 861 03±0 492 16±0 771 57±0 53A組426 08±0 742 07±0 511 19±0 643 64±0 82a2 52±0 38aB組356 15±0 962 11±0 540 98±0 464 25±0 71ab4 83±0 74abF值1 131 111 143 985 12P值0 150 130 130 021;0 05

注：TC=總膽固醇，TG=三酰甘油，HDL=高密度脂蛋白，LDL=低密度脂蛋白，MPs=微粒；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與A組比較，bP<0.05

2.2 相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，空腹血糖與ACS合并2型糖尿病患者循環(huán)MPs濃度呈正相關(guān)(r=0.59，P<0.01，見(jiàn)圖1)。

2.3 3組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 對(duì)照組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量為(0.72±0.11)，A組為(0.48±0.09)，B組為(0.11±0.03)；3組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=414.38，P<0.001)。其中A組和B組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，B組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量低于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)圖2)。

注：MPs=微粒

圖1 空腹血糖與ACS合并2型糖尿病患者循環(huán)MPs濃度關(guān)系的散點(diǎn)圖

Figure1 Scatter diagram for relationship between fasting blood glucose and circulation MPs concentration in ACS patients complicated with diabetes mellitus

注：eNOS=內(nèi)皮型一氧化氮合酶

圖2 3組eNOS蛋白電泳圖

Figure2 Eelectrophoretogram of circulation MPs protein in 3 groups of subjects

3 討論

ACS的病理生理學(xué)改變包括內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷和血小板激活、黏附、聚集并最終形成斑塊及斑塊破裂等。有研究顯示，與單純重度冠狀動(dòng)脈狹窄患者相比，合并2型糖尿病的冠狀動(dòng)脈重度狹窄病變患者心血管事件發(fā)生率明顯增加[9]，其部分機(jī)制如下：(1)高血糖可以加重機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)一步激活血小板，加重機(jī)體血栓負(fù)荷，同時(shí)還可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及功能障礙，內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和血小板激活最終導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈缺血進(jìn)一步加劇[10]；(2)多數(shù)糖尿病患者存在胰島素抵抗，而胰島素抵抗可上調(diào)LDL表達(dá)及下調(diào)HDL表達(dá)，高表達(dá)的LDL通過(guò)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和增加脂質(zhì)沉積而加重冠狀動(dòng)脈狹窄程度及心肌缺血[11]；(3)胰島素抵抗還可通過(guò)影響纖溶系統(tǒng)、血壓、炎癥、鈣離子通道、茶酚胺釋放等而影響冠狀動(dòng)脈血流供需平衡[12]。

循環(huán)MPs目前被認(rèn)為是機(jī)體受到有害刺激后由血管源細(xì)胞釋放的微小顆粒，主要由內(nèi)皮細(xì)胞、血小板及單核細(xì)胞凋亡或激活后釋放。VAN IERSSEL等[13]研究結(jié)果顯示，循環(huán)MPs可以導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、加重炎性反應(yīng)、促進(jìn)血液凝固等，且循環(huán)MPs可反映內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷程度。本研究結(jié)果顯示，A組和B組患者循環(huán)MPs濃度高于對(duì)照組，B組患者循環(huán)MPs濃度高于A組，提示ACS合并2型糖尿病患者內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷較嚴(yán)重。內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷是動(dòng)脈粥樣硬化形成的始動(dòng)環(huán)節(jié)，在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。一氧化氮(NO)是在eNOS作用下由內(nèi)皮細(xì)胞分泌的氣體信號(hào)分子，具有強(qiáng)大的心血管保護(hù)和抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。本研究結(jié)果顯示，A組和B組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，B組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量低于A組，提示ACS合并2型糖尿病患者心血管保護(hù)和抗動(dòng)脈粥樣硬化作用較弱。

綜上所述，空腹血糖與ACS合并2型糖尿病患者循環(huán)MPs濃度有關(guān)，空腹血糖可能通過(guò)增加循環(huán)MPs濃度而抑制抗動(dòng)脈硬化作用。但本研究樣本量較小，結(jié)果有待較大樣本量研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

作者貢獻(xiàn)：馬姍姍、王旭蘭進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，研究的實(shí)施與可行性分析；王旭蘭、于婷進(jìn)行數(shù)據(jù)收集、整理、分析；馬姍姍進(jìn)行結(jié)果分析與解釋?zhuān)煌跣裉m撰寫(xiě)論文；馬姍姍、王群讓負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校；王群讓對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無(wú)利益沖突。

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2017-07-12；

2017-10-19)

(本文編輯：謝武英)

CorrelationbetweenFastingBloodGlucoseandCirculationMicroparticlesConcentrationinAcuteCoronarySyndromePatientsMergedwithType2DiabetesMellitus

MAShan-shan1，WANGXu-lan2，YUTing2，WANGQun-rang3

1.DepartmentofRehabilitationMedicine，theFirstPeople′sHospitalofHebi，Hebi458030，China2.MedicalSchoolofXianyangVocationalandTechnicalCollege，Xianyang712000，China3.DepartmentofCardiology，theAffiliatedHospitalofShaanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Xianyang712000，China

WANGQun-rang，E-mail：yaohe1977@126.com

ObjectiveTo analyze the correlation between fasting blood glucose and circulation microparticles(MPs)concentration in acute coronary syndrome(ACS)patients merged with type 2 diabetes mellitus.MethodsFrom July to December in 2014，a total of 77 patients with ACS were selected in the Department of Cardiology，the Affiliated Hospital of Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine，thereinto 42 patients without type 2 diabetes mellitus were served as A group，other 35 cases with type 2 diabetes mellitus were served as B group，meanwhile 20 healthy people admitted to this hospital for physical examination were selected as control group.Blood lipids index，circulation MPs concentration and relative protein expression quantity of eNOS were compared among the three groups，and Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between fasting blood glucose and circulation MPs concentration in patients with ACS.ResultsNo statistically significant differences of TC，TG or HDL was found among the three groups(P>0.05)；LDL and circulation MPs concentration of A group and B group were statistically significantly higher than those of control group，meanwhile LDL and circulation MPs concentration of B group were statistically significantly higher than those of A group(P<0.05).Pearson correlation analysis results showed that，fasting blood glucose was positively correlated with circulation MPs concentration in ACS patients merged with type 2 diabetes mellitus(r=0.59，P<0.01).Relative protein expression quantity of eNOS of A group and B group was statistically significantly lower than that of control group，respectively，meanwhile relative protein expression quantity of eNOS of B group was statistically significantly lower than that of A group(P<0.05).ConclusionFasting blood glucose is significantly correlated with circulation MPs concentration in ACS patients merged with type 2 diabetes mellitus，it may inhibit the anti-atherosclerosis action through increasing the circulation MPs concentration.

Acute coronary syndrome；Blood glucose；Circulation microparticles

國(guó)家自然科學(xué)基金專(zhuān)項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(81341112)；咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級(jí)科學(xué)技術(shù)研究資助項(xiàng)目(2017KYC02)

通信作者：王群讓?zhuān)珽-mail：yaohe1977@126.com

R 542.2

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2017.10.005

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