黃俊云，陸文仙，廖一群，凌寶殿，盧洪飛

(贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西贛州 341000)

·調(diào)查研究·

阿薩希毛孢子菌泌尿系感染的流行病學(xué)及藥物敏感性分析

黃俊云，陸文仙，廖一群，凌寶殿，盧洪飛

(贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西贛州 341000)

目的分析阿薩希毛孢子菌泌尿系感染的流行病學(xué)、感染狀況、危險(xiǎn)因素以及微生物學(xué)的特征，指導(dǎo)臨床選擇及時(shí)、有效的抗真菌治療。方法收集分離自2013至2016年泌尿系感染患者的18株阿薩希毛孢子菌，對(duì)該病原菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)以及病歷資料進(jìn)行流行病學(xué)回顧性調(diào)查。結(jié)果18株阿薩希毛孢子菌對(duì)5-氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的耐藥率分別為0、5.6%、0、0、0，但是伊曲康唑的敏感率僅為50.0%。阿薩希毛孢子菌泌尿系統(tǒng)感染的風(fēng)險(xiǎn)因素以男性、患有基礎(chǔ)疾病(占100%)、長(zhǎng)期使用廣譜抗菌藥物(占100%)、留導(dǎo)尿管(占83.3%)、皮質(zhì)激素的應(yīng)用(占50.0%)、免疫抑制劑應(yīng)用(占38.9%)為主，粒細(xì)胞減少的比例較少(占5.6%)。臨床16例選用氟康唑治療好轉(zhuǎn)，另2例用伊曲康唑、伏立康唑治療后死亡，其主要死亡原因與真菌治療無(wú)關(guān)。結(jié)論阿薩希毛孢子菌可引起泌尿系統(tǒng)感染，高危因素主要有基礎(chǔ)疾病、廣譜抗菌藥物的長(zhǎng)期使用和留置導(dǎo)尿管等，治療首選氟康唑。及早明確病原學(xué)診斷、正確選用抗真菌藥物是成功治療阿薩希毛孢子菌感染的關(guān)鍵。

阿薩希毛孢子菌；泌尿系感染；流行病學(xué)；分離鑒定；藥物敏感性分析

阿薩希毛孢子菌(Trichosporonasahii) 屬于半知菌亞門(mén)、芽生菌綱、隱球酵母目、隱球酵母科、毛孢子菌屬，廣泛存在于自然界及人體的部分器官中，有12.4%人群的生殖器皮膚表面有該菌存在[1]。目前認(rèn)為是一種條件致病真菌，也是毛孢子菌病最多見(jiàn)的致病菌，不僅可引起免疫缺陷患者危及生命的各種機(jī)會(huì)性感染，而且在免疫正常人群中也有感染該菌的報(bào)道[2]；其感染部位及臨床類(lèi)型多見(jiàn)于肺感染、全身播散性感染、皮膚損害和毛發(fā)感染等[3]，泌尿系感染僅見(jiàn)于個(gè)案報(bào)道[4-5]。本研究對(duì)2013至2016年贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿系阿薩希毛孢子菌病患者進(jìn)行回顧性分析，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 收集2013年1月至2016年12月贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院住院患者中段尿標(biāo)本分離的18例阿薩希毛孢子菌。入選標(biāo)準(zhǔn)：均有泌尿系感染癥狀和體征(尿頻、尿急、尿痛或血尿)；實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)符合2014版《中國(guó)泌尿外科疾病診斷治療指南》中尿路感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)；在同一患者連續(xù)多份尿標(biāo)本中分離出純阿薩希毛孢子菌并且菌落計(jì)數(shù)均≥105CFU/mL；可確診該菌為泌尿系感染的病原菌。對(duì)同一患者多份標(biāo)本不重復(fù)計(jì)數(shù)。

1.2培養(yǎng)基、儀器和試劑 哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂平板(SDA)、中國(guó)藍(lán)瓊脂平板(廣州迪景公司)；乳酸酚棉藍(lán)染色液(珠海貝索公司)；萊芙特敏真菌熒光染色液(江蘇萊芙時(shí)代公司)；ECLIPSE 80i共聚焦熒光顯微鏡(Nikon公司)；Vitek 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏儀、Vitek 2 YST酵母菌鑒定卡、麥?zhǔn)媳葷醿x、ATB FUNGUS 3真菌藥敏試劑條(法國(guó)生物梅里埃公司)。

1.3分離培養(yǎng)與鑒定 吸取10 μL中段尿接種于哥倫比亞血瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)瓊脂平板、沙氏瓊脂平板，于35 ℃培養(yǎng)過(guò)夜，選擇菌落計(jì)數(shù)≥105CFU/mL的陽(yáng)性菌落使用Vitek 2 YST酵母菌鑒定卡經(jīng)Vitek 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏儀進(jìn)行菌株鑒定。

1.4藥物敏感性試驗(yàn) 用ATB FUNGUS 3真菌藥敏試劑條測(cè)定最低抑菌濃度(MIC)值(μg/mL)，包括5-氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑。質(zhì)控菌株為克柔假絲酵母菌ATCC 6258。根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)頒布的M27-A準(zhǔn)則進(jìn)行質(zhì)控和結(jié)果判斷。因阿薩希毛孢子菌菌落較干燥而且生長(zhǎng)較慢，于48 h判讀5-氟胞嘧啶和兩性霉素B結(jié)果；而對(duì)于氟康唑、伏立康唑和伊曲康唑，分別于24 h和48 h判讀，判讀結(jié)果無(wú)明顯差異。

2 結(jié)果

2.1患者的一般臨床資料 18例阿薩希毛孢子菌泌尿系感染患者中，男性14例，女性4例；年齡(68.8±12.8)歲；均患有基礎(chǔ)疾?。?8例患者使用廣譜抗菌藥物(使用皮質(zhì)激素9例，免疫抑制劑7例)；15例使用留置尿管；18例應(yīng)用抗真菌藥治療(使用氟康唑16例、伊曲康唑1例、伏立康唑1例)；16例用氟康唑治療4周以后，中段尿真菌培養(yǎng)陰性，病情好轉(zhuǎn)出院；另2例死亡,主要死亡原因與抗真菌治療效果無(wú)關(guān)。

2.2形態(tài)學(xué)觀察 阿薩希毛孢子菌在哥倫比亞血瓊脂平板、沙氏瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)瓊脂平板35 ℃培養(yǎng)24 h生長(zhǎng)速度中等，為奶油色酵母樣、柔軟、潮濕，呈突起、針尖樣的菌落。各種培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)特征見(jiàn)圖1，染色和鏡下形態(tài)特征見(jiàn)圖2、3、4。

注：A,沙氏平板35 ℃ 48 h;B,哥倫比亞平板35 ℃ 48 h；C，哥倫比亞平板35 ℃ 5 d；D，中國(guó)藍(lán)平板35 ℃ 5 d。

圖1 阿薩希毛孢子菌菌落形態(tài)

注：A，乳酸酚棉藍(lán)染色(×400)；B，革蘭染色(×1 000)。均可見(jiàn)關(guān)節(jié)孢子，數(shù)目不等、長(zhǎng)短不一，末端圓形呈筒狀；大量多形性酵母樣細(xì)胞；少量分枝分隔真菌絲，無(wú)明顯的叉狀分枝，粗細(xì)不等。

圖2 阿薩希毛孢子菌鏡下形態(tài)

注：可見(jiàn)棒狀或桶狀關(guān)節(jié)孢子，呈卵形的游離芽生孢子以及分隔菌絲。

圖3 阿薩希毛孢子菌鏡下形態(tài)(熒光染色，×1 000)

注：可見(jiàn)排列整齊的大量芽生孢子、關(guān)節(jié)孢子和分隔菌絲。

圖4 阿薩希毛孢子菌小培養(yǎng)鏡下形態(tài)(×400)

2.3藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果 18株阿薩希毛孢子菌藥敏結(jié)果顯示對(duì)5種抗真菌藥物抗菌活性較好，見(jiàn)表1。5-氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的耐藥率分別為0%、5.6%、0%、0%、0%，敏感率分別為94.4%、94.4%、94.4%、50.0%、100%，其中伊曲康唑的中介率高達(dá)50.0%。

表1 18株阿薩希毛孢子菌的耐藥特征[n(%)]

3 討論

近年來(lái)，我們?cè)趯?shí)際工作中發(fā)現(xiàn)在中段尿中檢出阿薩希毛孢子菌的病例數(shù)有所增多，通過(guò)對(duì)18份泌尿系感染病例資料的回顧性分析發(fā)現(xiàn)，侵犯泌尿系統(tǒng)的阿薩希毛孢子菌感染患者以男性為主，均患有基礎(chǔ)疾病。進(jìn)一步調(diào)查分析發(fā)現(xiàn)，阿薩希毛孢子菌感染泌尿系統(tǒng)的危險(xiǎn)因素主要有長(zhǎng)期使用廣譜抗菌藥物、留導(dǎo)尿管、皮質(zhì)激素與免疫抑制劑的應(yīng)用，而感染較少發(fā)生于粒細(xì)胞減少患者。臨床應(yīng)避免或重視以上因素，以防阿薩希毛孢子菌感染。

文獻(xiàn)報(bào)道淺表性或播散性阿薩希毛孢子菌對(duì)多種抗真菌藥均不敏感，僅唑類(lèi)藥物對(duì)其顯示出良好的抗菌活性。而近年來(lái)阿薩希毛孢子菌對(duì)唑類(lèi)，特別是氟康唑的耐藥現(xiàn)象日益突出[3]。楊杰等[5]報(bào)道1例肺部及泌尿道感染患者痰液及尿液標(biāo)本分離的阿薩希毛孢子菌均對(duì)氟康唑、伏立康唑中介，伊曲康唑、兩性霉素B、5-氟胞嘧啶均耐藥。我們對(duì)泌尿系感染阿薩希毛孢子菌的藥敏結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，其對(duì)5種抗真菌藥物的抗菌活性除伊曲康唑外均較好。綜合分析藥敏試驗(yàn)和臨床治療轉(zhuǎn)歸，本研究認(rèn)為阿薩希毛孢子菌引起的泌尿系統(tǒng)感染推薦首選藥物為氟康唑。

[1]Chagas-Neto TC，Chaves GM，Colombo AL．Update on the genusTrichosporon[J]．Mycopathologia，2008，166(3)：121-132．

[2]Kim SH，Kim DH，Joo SI，etal．Chronic cutaneous disseminatedTnchospomnasahiiinfection in a nonimmunocompromised patient[J]．J Am Acad Dermatol，2008，59(2 Suppl 1)：S37-S39．

[3]Miceli MH，Diaz JA，Lee SA．Emerging opportunistic yeast infections[J]．Lancet Infect Dis，2011，11(2)：142-151．

[4]翁繩鳳, 劉宏蘊(yùn). 阿薩希毛孢子菌致泌尿系統(tǒng)感染2例[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志, 2010, 28(5): 344.

[5]楊杰, 崔敏. 阿薩希毛孢子菌致肺部及泌尿道感染1例[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志, 2012, 30(1): 75.

2017-08-14)

(本文編輯：劉群)

EpidemiologyandantifungalsusceptibilityanalysisofTrichosporonasahiiinurinarytractinfection

HUANGJun-yun,LUWen-xian,LIAOYi-qun,LINGBao-dian,LUHong-fei

(DepartmentofClinicalLaboratory,FirstAffiliatedHospitalofGannanMedicalUniversity,Ganzhou341000,Jiangxi,China)

ObjectiveTo analyze the epidemiology, infection status, risk factors and microbiological characteristics ofTrichosporonasahiiin urinary tract infection for guidance of selecting the prompt and effective antifungal drugs in clinical therapy.MethodsA total of 18 strains ofTrichosporonasahiiisolated from the patients with urinary tract infection were selected from 2013 to 2016. The isolation and identification of pathogenic bacteria, results of antimicrobial susceptibility test and clinical data were investigated by retrospective epidemiological survey.ResultsThe 5 antifungal drugs, i.e., 5-fluorocytosine, amphotericin B, fluconazole, itraconazole and voriconazole, exhibited favorable antibacterial activity for the 18 strains ofTrichosporonasahiiwith resistance rate of 0, 5.6%, 0, 0 and 0 except itraconazole which showed only 50% of sensitive rate. The risk factors ofTrichosporonasahiiinfection in urinary system mainly included such as male, basic diseases (100%), long-term use of broad-spectrum antimicrobial agents (100%), indwelling catheter (83.3%) , application of corticosteroids (50.0%) and immunosuppressive agents (38.9%) as well as a small proportion of granulocytopenia (5.6%). The 16 cases treated with fluconazole were improved, while the other 2 cases died following the treatment with itraconazole or voriconazole for reasons irrelevant to antifungal treatment.ConclusionTrichosporonasahiicould cause urinary tract infections with high risk factors including basic diseases, long-term use of broad-spectrum antimicrobial agents, indwelling catheter, etc. The drug of top choice should be fluconazole. The key elements for successful treatment ofTrichosporonasahiiinfection include early diagnosis of pathogens and correct selection of antifungal agents based on sensitivity and resistance tests of drugs.

Trichosporonasahii; urinary tract infection; epidemiology; isolation and identification; drug susceptibility analysis

10.13602/j.cnki.jcls.2017.10.12

黃俊云， 1976年生，女，副主任技師，碩士，從事臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)研究工作。

R446.5

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