王 慶 李丹丹 - 潘蕓蕓 - 吳 衛(wèi)

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，四川 成都 611130) (Agronomy College, Sichuan Agricultural University, Chengdu, Sichuan 611130, China)

提取方法對(duì)天麻多糖提取率及其抗氧化活性的影響

王 慶WANGQing李丹丹LIDan-dan潘蕓蕓PANYun-yun吳 衛(wèi)WUWei

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，四川 成都 611130) (AgronomyCollege,SichuanAgriculturalUniversity,Chengdu,Sichuan611130,China)

分別采用熱水浸提、超聲輔助提取和酶法提取對(duì)四川平武烏天麻多糖進(jìn)行提取，并對(duì)天麻多糖提取率及其抗氧化化活性進(jìn)行比較，為篩選適合天麻多糖提取的方法提供參考。結(jié)果表明：3種提取方法對(duì)天麻多糖提取率及其抗氧化活性影響較大，其中酶法提取天麻多糖提取率最高(為50.315%)，與其他2種提取方法間差異達(dá)到極顯著水平(P<0.01)；在DPPH和FRAP法抗氧化評(píng)價(jià)體系中，多糖抗氧化活性表現(xiàn)為超聲輔助提取>酶法提取>熱水浸提法，而在ABTS抗氧化評(píng)價(jià)體系中，其活性順序是酶法提取>超聲輔助提取>熱水浸提。綜合分析，超聲輔助提取和酶法提取有利于天麻多糖提取，且能保持其高效的抗氧化活性。

天麻；多糖；熱水浸提；超聲輔助提??；酶法提??；抗氧化活性

多糖作為生物大分子物質(zhì)存在于植物、動(dòng)物和微生物中，是自然界含量最豐富的生物大分子聚合物之一[1]，在醫(yī)藥、食品以及材料等方面有著重要應(yīng)用。研究表明，多糖具有抗氧化[2]、抗腫瘤[3]和免疫調(diào)節(jié)[4-5]等多種生理功能，此外，多糖來(lái)源廣泛且毒副作用極低。目前關(guān)于多糖的研究逐漸成為了熱點(diǎn)。

天麻為蘭科真菌營(yíng)養(yǎng)型多年生草本植物天麻(GastrodiaelataBl.)的干燥塊莖，是中國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材之一。具有息風(fēng)止痙、平抑肝陽(yáng)和祛風(fēng)通絡(luò)的功效，主要應(yīng)用于小兒驚風(fēng)、癲癇抽搐、破傷風(fēng)、頭痛眩暈、手足不遂、肢體麻木以及風(fēng)濕痹痛等癥狀[6]。經(jīng)現(xiàn)代藥理研究表明，天麻具有增智健腦[7]、清除自由基、延緩衰老[8]、保護(hù)心血管[9-10]的作用，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)性疾病[11-12]、老年性癡呆癥等有一定療效[13-14]。自20世紀(jì)50年代以來(lái)，在天麻中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分主要包括酚類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、多糖類(lèi)以及甾體類(lèi)等[15]。

人體生活的環(huán)境必然要與外界接觸，所以必定會(huì)因呼吸、環(huán)境污染、射線等因素不斷在體內(nèi)產(chǎn)生自由基?，F(xiàn)代自由基醫(yī)學(xué)研究證明，生物體的衰老、免疫性疾病，甚至癌變等都與自由基過(guò)量產(chǎn)生有關(guān)?？寡趸饕侵缚寡趸杂苫Ｒ延醒芯勘砻麒坭蕉嗵荹16]、赤靈芝多糖[17]、牛蒡多糖[18]、石斛多糖[19]、銀杏葉多糖[20]等均具有清除自由基的作用。張夢(mèng)娟[21]對(duì)天麻多糖進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)其具有一定抗氧化活性。有研究[22]報(bào)道，提取方式對(duì)多糖活性具有一定的影響。傳統(tǒng)針對(duì)植物多糖提取多采用熱水提取法，此方法具有操作簡(jiǎn)便、使用儀器少等特點(diǎn)[23]，隨著新的提取工藝不斷出現(xiàn)，在天麻多糖研究中，已有關(guān)于超聲輔助提取[24]、酶解提取[25]、微波提取[26]等方面的報(bào)道，但關(guān)于其對(duì)抗氧化活性的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。盡管這些方法均各具優(yōu)缺點(diǎn)，但是否適宜于天麻多糖提取，需進(jìn)一步研究，故本試驗(yàn)擬采用3種提取方法，對(duì)天麻多糖提取率及其抗氧化活性進(jìn)行比較，以期篩選出適合天麻多糖提取的方法，并為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用天麻多糖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

天麻：來(lái)自四川平武，經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)吳衛(wèi)教授鑒定為烏天麻(G.elataBl.f.glaucaS. Chow)。將其蒸至透心，烘干至恒重，粉樣，過(guò)60目篩，備用。

1.2 試驗(yàn)儀器和試劑

電子分析天平：CP224S型，德國(guó)賽多利斯公司；

電子恒溫水浴鍋：DZKW-4型，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；

粉樣機(jī)：FW-100型，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司；

電熱鼓風(fēng)干燥箱：101-3AB型，天津市泰斯特儀器有限公司；

高速冷凍離心機(jī)：Allegra X-30R Centrifuge型，美國(guó)Beckman Conlter公司；

超聲波清洗機(jī)：SB25-12DTDN型，寧波新芝生物科技股份有限公司；

冷凍干燥機(jī)：SJIA-10N型，寧波雙嘉儀器有限公司；

紫外-可見(jiàn)光光度計(jì)：UV2450型，日本Shimadzu公司；

酶標(biāo)儀：Multiskan GO型，美國(guó)Thermo Scientific公司；

纖維素酶、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2`-聯(lián)胺-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、2,4,6-三吡啶基三嗪(TPTZ)： 美國(guó)Sigma公司；

苯酚、硫酸、乙醇、石油醚(60～90 ℃)、無(wú)水葡萄糖、Vc等：分析純，成都市科龍化工試劑廠。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品預(yù)處理 稱(chēng)取天麻粉樣，加入3倍量石油醚回流脫脂4 h，重復(fù)2次，45 ℃烘干后，再加入80%乙醇以1∶8 (g/mL)的比例，于80 ℃回流提取2 h，用真空抽濾機(jī)濾去液體，重復(fù)2次，得濾渣，45 ℃烘干，備用。

1.3.2 天麻多糖提取

(1) 熱水浸提法：參考文獻(xiàn)[24～25]提取方法，修改如下：取經(jīng)過(guò)預(yù)處理的天麻樣品約10 g，按料液比1∶37 (g/mL)，提取溫度70 ℃，提取時(shí)間2.5 h，提取3次。待冷卻至室溫后，于4 ℃、10 000 r/min離心10 min，將上清液過(guò)濾，合并濾液并濃縮，再向提取液中緩慢加入無(wú)水乙醇至混合液乙醇終濃度為80%，置于4 ℃沉淀過(guò)夜，離心得天麻多糖沉淀，經(jīng) -50 ℃ 冷凍干燥后，-20 ℃低溫保存。

(2) 超聲輔助提取法：準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)過(guò)預(yù)處理的天麻樣品約10 g，在超聲波功率250 W條件下，按料液比1∶25(g/mL)，超聲溫度40 ℃，超聲時(shí)間35 min，重復(fù)提取3次[26]。其余步驟與“1.3.2(1)”相同，得到天麻多糖沉淀。

(3) 酶法提取：參考文獻(xiàn)[27]，修改如下：稱(chēng)取預(yù)處理天麻樣品約10 g，加入pH 5的檸檬酸緩沖液，使總體積為500 mL，加入纖維素酶20 mg，50 ℃水浴提取60 min，80 ℃水浴10 min使酶滅活。其余步驟與“1.3.2(1)”相同，得到天麻多糖沉淀。

1.3.3 天麻多糖含量測(cè)定

(1) 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：參考文獻(xiàn)[18]。以葡萄糖濃度(x)為橫坐標(biāo)、吸光度值(y)為縱坐標(biāo)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為：y=5.372x-0.012，R2=0.998，葡萄糖對(duì)照品濃度的線性范圍為0.020 2～0.161 7 mg/mL。其標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。

圖1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1 Standard curve of Polysaccharides

(2) 天麻多糖提取液制備：稱(chēng)取經(jīng)過(guò)預(yù)處理的天麻樣品1 g，按照“1.3.2”項(xiàng)提取得不同天麻多糖溶液，合并濾液，定容于250 mL的容量瓶中，每種提取方法重復(fù)3次。

(3) 天麻多糖含量測(cè)定：用移液管吸取1.0 mL粗多糖提取液置于試管中，依次加入蒸餾水2 mL， 5%苯酚1 mL，搖勻，滴加濃硫酸5 mL，搖勻，在室溫下靜置10 min，沸水浴15 min，冷卻至室溫，于490 nm處檢測(cè)其吸光度。按式(1)計(jì)算天麻多糖含量。

(1)

式中：

W——多糖含量，%；

C——多糖的葡萄糖濃度，mg/mL；

D——多糖稀釋倍數(shù)；

V——提取液體積，mL；

m——原料干重，g。

1.3.4 抗氧化活性測(cè)定

(1) DPPH自由基清除：參照文獻(xiàn)[28]，修改如下：用無(wú)水乙醇配制成0.04 mg/mL DPPH溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)。分別吸取70 μL不同質(zhì)量濃度的多糖溶液和200 μL DPPH溶液于96孔酶標(biāo)板，27 ℃孵育10 min，每份樣品平行操作3次，在517 nm處用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值(A)；以去離子水70 μL和200 μL DPPH溶液的吸光度值作對(duì)照(A0)；空白為供試待測(cè)液70 μL和無(wú)水乙醇200 μL的吸光度值(B)；以不同濃度的Vc溶液作陽(yáng)性對(duì)照。按式(2)計(jì)算DPPH自由基清除率。

(2)

式中：

D——DPPH自由基清除率，%；

A——70 μL多糖溶液和200 μL DPPH溶液的吸光度值；

B——70 μL多糖溶液和200 μL無(wú)水乙醇的吸光度值；

A0——70 μL去離子水和200 μL DPPH溶液的吸光度值。

(2) ABTS自由基清除：參照文獻(xiàn)[29]配制ABTS工作液。參考文獻(xiàn)[30]并略作修改：將不同方法提取的天麻多糖配制成梯度濃度的樣品溶液，分別吸取30 μL多糖溶液、180 μL ABTS工作液于96孔酶標(biāo)板，37 ℃下孵育30 min。蒸餾水調(diào)零后，在734 nm處用酶標(biāo)儀測(cè)定其吸光度?？瞻滋幚恚?0 μL去離子水和180 μL ABTS工作液。每份供試樣品操作3次。以不同濃度的Vc溶液作陽(yáng)性對(duì)照。按式(3)計(jì)算ABTS自由基清除率。

(3)

式中：

R——ABTS自由基清除率，%；

A1——30 μL多糖溶液與180 μL ABTS液的吸光度值；

A0——30 μL去離子水與180 μL ABTS液的吸光度值。

(3) FRAP鐵離子還原能力：參照文獻(xiàn)[31]配制FRAP工作液(現(xiàn)配現(xiàn)用)。參照文獻(xiàn)[32]繪制FeSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線?？傔€原能力測(cè)定：吸取70 μL不同質(zhì)量濃度的多糖溶液，加入200 μL 37 ℃預(yù)熱的FRAP工作液于96孔酶標(biāo)板，搖勻后，37 ℃反應(yīng)30 min，用酶標(biāo)儀在593 nm測(cè)定其吸光度值。空白為供試液溶劑代替供試液加入FRAP工作液。根據(jù)FeSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得相應(yīng)FeSO4的濃度(μmol/L)為FRAP值。每個(gè)稀釋濃度做3次平行試驗(yàn)，求平均值。以不同濃度的Vc溶液作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及作圖均采用Microsoft Excel 2007進(jìn)行，利用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)清除自由基活性數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析與顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取方法的天麻多糖提取率

由圖2可知，3種提取方法對(duì)天麻多糖提取率影響較大，彼此間差異均達(dá)到極顯著水平(P< 0.01)，其中酶法的提取率最高。

本試驗(yàn)通過(guò)熱水浸提法提取多糖得率為22.380%，與宗露[33]對(duì)平武烏天麻多糖測(cè)定含量25.02%結(jié)果基本一致；超聲輔助提取法天麻多糖得率為33.089%，該結(jié)果與楊天友等[26]以超聲波輔助提取60目德江天麻粉末，多糖得率為33.4%結(jié)果一致；酶法提取天麻多糖得率為50.315%，遠(yuǎn)高于目前報(bào)道[34]的38.34%，可能與兩者所選材料有關(guān)。

不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)圖2 不同提取方法天麻多糖提取率Figure 2 The extraction rates of polysaccharides from different extraction methods

2.2 不同提取方法所得粗多糖抗氧化活性的差異

2.2.1 DPPH自由基清除活性 由圖3可知，3種提取方法得到的天麻粗多糖與Vc的DPPH自由基清除活性存在較大差異。在2.5 mg/mL濃度下，酶法提取粗多糖的DPPH自由基清除率顯著高于同濃度其他2種提取方法的，但在4，5 mg/mL濃度下，超聲輔助提取粗多糖的DPPH自由基清除活性顯著高于其他提取方法的。在一定濃度范圍內(nèi)，3種提取方法得到的粗多糖對(duì)DPPH自由基清除率隨粗多糖濃度升高而升高，且存在一定的線性關(guān)系(見(jiàn)表1)，通過(guò)計(jì)算，熱水浸提、超聲輔助提取、酶法提取的多糖溶液和Vc溶液的DPPH自由基清除率的IC50分別為5.057，4.437，4.993，0.051 mg/mL。由于IC50值越小，多糖對(duì)DPPH自由基清除率越高，3種方法提取的粗多糖中，以

*表示在同濃度下與其他方法提取的多糖差異顯著(P<0.05)圖3 不同提取方法所得粗多糖對(duì)DPPH自由基清除能力

Figure 3 The DPPH free radical scavenge capacities of crude polysaccharides from different extraction methods

表1不同提取方法所得粗多糖及VC對(duì)DPPH自由基清除率的IC50

Table 1IC50of crude polysaccharides from different extraction methods and Vc on DPPH free radical scavenge capacities

樣品回歸方程R2IC50/(mg·mL-1)熱水浸提多糖y=7.566x+11.7400.8645.057超聲輔助提取多糖y=8.357x+12.9200.9584.437酶法提取多糖y=6.668x+16.7100.8084.993VCy=935.900x+2.0910.9800.051

超聲輔助提取的粗多糖對(duì)DPPH自由基清除率最高，其活性最強(qiáng)。這可能與超聲波強(qiáng)烈的機(jī)械剪切作用致多糖分子結(jié)構(gòu)改變有關(guān)[35]。

2.2.2 ABTS自由基清除活性 由圖4可知，不同提取方法提取的天麻粗多糖均表現(xiàn)出一定的ABTS自由基清除活性，在粗多糖濃度為5 mg/mL時(shí)，酶法提取的粗多糖ABTS自由基清除率最高 (47.449%)，與其他2種方法提取的粗多糖差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。此外，在一定濃度范圍內(nèi)具有明顯的量效關(guān)系(見(jiàn)表2)，且所有回歸方程的R2均>0.9，表明方程的擬合度很高。依據(jù)所得線性方程計(jì)算各多糖溶液的ABTS自由基清除率的IC50分別為6.130，5.406，4.917 mg/mL，陽(yáng)性對(duì)照Vc對(duì)ABTS自由基清除率的IC50為0.040 mg/mL。可見(jiàn)，在ABTS抗氧化評(píng)價(jià)體系中，其活性順序是酶法提取粗多糖>超聲輔助提取粗多糖>熱水浸提粗多糖。唐小琴[36]研究發(fā)現(xiàn)酶提法提取的溫和條件能更好保全多糖的生物活性，本試驗(yàn)同樣顯示酶法提取天麻多糖活性較高，可能與此有關(guān)。

*表示在同濃度下與其他方法提取的多糖差異顯著(P<0.05)圖4 不同提取方法所得粗多糖對(duì)ABTS自由基清除能力

Figure 4 The ABTS free radical scavenge capacities of crude polysaccharides from different extraction methods

表2不同提取方法所得粗多糖及VC對(duì)ABTS自由基

清除率的IC50

Table 2IC50of crude polysaccharides from different extraction methods and Vc on ABTS free radical scavenge capacities

樣品回歸方程R2IC50/(mg·mL-1)熱水浸提多糖y=7.417x+4.5340.9806.130超聲輔助提取多糖y=8.555x+3.7550.9595.406酶法提取多糖y=9.467x+3.4530.9724.917VCy=1069.000x-1.1100.9800.040

2.2.3 FRAP鐵離子還原能力 由圖5可知，在所測(cè)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，各組粗多糖還原Fe3+的能力隨濃度的升高而增大，且呈現(xiàn)一定線性關(guān)系，所有線性回歸方程R2值均>0.960，表明方程的擬合度很高(表3)。在質(zhì)量濃度2.5 mg/mL時(shí)，超聲輔助提取的粗多糖還原Fe3+的能力顯著高于同濃度下其他提取法的；在質(zhì)量濃度3，4，5 mg/mL時(shí)，超聲輔助提取的粗多糖還原Fe3+的能力極顯著高于同濃度下其他提取法的?？傮w來(lái)看，超聲輔助提取的粗多糖還原Fe3+的能力最強(qiáng)，但各組粗多糖還原Fe3+的能力都較弱，均低于同濃度的陽(yáng)性對(duì)照。

**表示在同濃度下與其他方法提取的多糖差異極顯著(P<0.01)； *表示在同濃度下與其他方法提取的多糖差異顯著(P<0.05)圖5 不同提取方法所得粗多糖的FRAP值Figure 5 FRAP values of crude polysaccharides from different extraction methods表3 不同提取方法所得粗多糖及VC對(duì)Fe3+還原能力的回歸方程

Table 3 The regression equations of crude polysaccharides from different extraction methods and Vc on Fe3+reducing capacity

樣品回歸方程R2熱水浸提多糖y=38.410x+6.0180.980超聲輔助提取多糖y=46.760x+2.7270.981酶法提取多糖y=38.020x+6.3280.990VCy=14179.000x-151.90.966

3 結(jié)論

不同提取方法對(duì)天麻多糖提取率及其抗氧化活性影響不同，其中酶法提取率最高，其次為超聲輔助提??；超聲輔助提取法和酶法提取均可保持天麻多糖高效的抗氧化活性。3種提取方法得到的天麻粗多糖與陽(yáng)性對(duì)照Vc相比，抗氧化活性相對(duì)較低，但多糖作為生物大分子化合物，和Vc相同質(zhì)量濃度時(shí)，多糖物質(zhì)的量濃度顯著低于Vc。由此，天麻多糖也仍具有良好的抗氧化活性，可以作為一種抗氧化劑進(jìn)一步深入研究。

[1] FAN Tao, HU Jian-guo, FU Li-dan, et al. Optimization of enzymolysis-ultrasonic assisted extraction of polysaccharides fromMomordicacharabtiaL. by response surface methodology[J]. Carbohydrate Polymers, 2015, 115: 701-706.

[2] ZENG Hong-liang, MIAO Song, ZHANG Yi, et al. Isolation, preliminary structural characterization and hypolipidemic effect of polysaccharide fraction fromFortunellamargarita(Lour.)[J]. Food Hydrocolloids, 2016, 52: 126-136.

[3] ZHENG Yan-fei, ZHANG Qiang, LIU Xiong-ming, et al. Extraction of polysaccharides and its antitumor activity onMagnoliakwangsiensisFiglar & Noot[J]. Carbohydrate Polymers, 2016, 142: 98-104.

[4] 李欽, 胡繼宏, 高博, 等. 黃芪多糖在免疫調(diào)節(jié)方面的最新研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2017, 32(2): 199-206.

[5] CHEN Rui-zhan, LI Hai-ping, LI Shi-zhe, et al. Extraction optimization, preliminary characterization and immunological activity of polysaccharides from figs[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2015, 72: 185-194.

[6] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 一部[S]. 2015年版. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2015: 58-59.

[7] 劉智慧, 馬浩, 王偉平, 等. 天麻素及派立辛改善東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙的構(gòu)效關(guān)系[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 51(5): 743-748.

[8] 謝學(xué)淵, 晁衍明, 杜珍, 等. 天麻多糖的抗衰老作用[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 26(3): 206-210.

[9] 苗凱, 王美, 謝祎. 天麻素治療冠心病心絞痛臨床效果的觀察[J]. 天津藥學(xué), 2009, 21(6): 26-27.

[10] TANG Chun-lan, WANG Li, LIU Xin-xin, et al. Pharmacokinetic study ofGastrodiaelatain rats[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2015, 407(29): 8 903-8 910.

[11] LIU Zhi-hui, WANG Wei-ping, FENG Nan, et al. Parishin C`s prevention of Abeta 1-42-induced inhibition of long-term potentiation is related to NMDA receptors[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2016, 6(3): 189-197.

[12] 王燦, 于濱, 孔維佳. 天麻和天麻素改善糖脂代謝紊亂的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2016, 13(27): 51-54, 58.

[13] HUANG Guang-biao, ZHAO Tong, MUNA Sushama-shrestha, et al. Therapeutic potential ofGastrodiaelataBl. for the treatment of Alzheimer’s disease[J]. Neural Regeneration Research, 2013, 8(12): 1 061-1 070.

[14] DOO Ah-reum, KIM Seung-nam, HAHM Dae-hyun, et al.GastrodiaelataBl. alleviates L-DOPA-induced dyskinesia by normalizing FosB and ERK activation in a 6-OHDA-lesioned Parkinson’s disease mouse model[J]. BMC Complementary and Alternative Medicine, 2014, 14: 107-115.

[15] 李云, 王志偉, 劉大會(huì), 等. 天麻化學(xué)成分研究進(jìn)展[J]. 山東科學(xué), 2016, 29(4): 24-29.

[16] 鄭玲利, 李燕, 黃玲, 等. 枸杞多糖的微波提取及抗氧化性分析[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 32(1): 1-5.

[17] 徐雪峰, 李桂娟, 閆浩, 等. 赤靈芝多糖分離純化及體外抗氧化性研究[J]. 食品與機(jī)械, 2017, 33(1): 143-147.

[18] 喻俊, 張利, 李亞波, 等. 干燥方式對(duì)牛蒡多糖理化性質(zhì)及抗氧化活性的影響[J]. 食品與機(jī)械, 2016, 32(6): 160-163.

[19] 嚴(yán)慕賢, 周雅亮, 藍(lán)義琨, 等. 兩種石斛的水溶性多糖和堿溶性多糖體外抗氧化活性的研究[J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào), 2016, 32(1): 88-91.

[20] ZHANG Chang-wei, WANG Cheng-zhang, TAO Ran. Characterization and antioxidant activities of polysaccharides extracted from enzymatic hydrolysate ofGikgobilobaleaves[J]. Journal of Food Biochemistry, 2017, DOI: 10.1111/jfbc.12 352.

[21] 張夢(mèng)娟. 天麻多糖的提取、純化及活性研究[D]. 西安: 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2007: 51-60.

[22] ZHANG Qin, DONG Lan-fang, TONG Tong, et al. Polysaccharides in Sipunculus nudus: Extraction condition optimization and antioxidant activities[J]. Journal of Ocean University of China, 2017, 16(1): 74-80.

[23] WANG Chen-yu, ZHANG Jing, WANG Fei, et al. Extraction of crude polysaccharides fromGomphidiusrutilusand their antioxidant activitiesinvitro[J]. Carbohydrate Polymers, 2013, 94: 479-486.

[24] 張夢(mèng)娟, 徐懷德, 牛素哲, 等. 天麻多糖水提取工藝優(yōu)化研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2006, 27(11): 119-121.

[25] 朱潔平, 李峰, 沈業(yè)壽. 天麻多糖的提取工藝及含量測(cè)定研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 40(18): 9 648-9 650.

[26] 楊天友, 劉金濤, 李剛鳳. 超聲波輔助提取德江天麻多糖工藝優(yōu)化[J]. 中國(guó)釀造, 2015, 34(12): 117-121.

[27] 王勛, 羅珊珊, 蔣嘉燁, 等. 酶解法提取天麻多糖的研究[J]. 中藥材, 2013, 36(1): 137-140.

[28] MA Qing, XIE Hai-hui, LI Sha, et al. Flavonoids from the pericarps ofLitchichinensis[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2014, 62: 1 073-1 078.

[29] THAIPONG Kriengsak, BOONPRAKOB Unaroj, CROSBY Kevin, et al. Comparison of ABTS, DPPH, FRAP, and ORAC assays for estimating antioxidant activity from guava fruit extracts[J]. Journal of Food Composition Analysis, 2006, 19(6/7): 669-675.

[30] YANG Dan, XIE Hai-hui, JIANG Yue-ming, et al. Phenolics from strawberry cv. Falandi and their antioxidant andα-glucosidase inhibitory activities[J]. Food Chemistry, 2016, 194: 857-863.

[31] WOOTTON-BEARD Peter-c, MORAN Aisling, RYAN Lisa. Stability of the total antioxidant capacity and total polyphenol content of 23 commercially measured by FRAP, DPPH, ABTS and Folin-ciocalteu methods[J]. Food Research International, 2011, 44(1): 217-224.

[32] ZHANG Shan-shan, LIU Xiao-qian, YAN Li-hua, et al. Chemical compositions and antioxidant activities of polysaccharides from the sporophores and cultured products ofArmillariamellea[J]. Melecules, 2015, 20(4): 5 680-5 697.

[33] 宗露. 平武產(chǎn)栽培天麻的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[D]. 成都: 成都中醫(yī)藥大學(xué), 2013: 41-43.

[34] 葉文斌. 響應(yīng)面法與酶法聯(lián)用提取天麻素和天麻多糖的優(yōu)化工藝研究[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2015, 36(12): 25-30.

[35] 王小梅. 超聲對(duì)麥冬多糖結(jié)構(gòu)，溶液行為及生物活性影響的研究[D]. 西安: 陜西師范大學(xué), 2013: 91-94.

[36] 唐小琴. 川白芷多糖提取、結(jié)構(gòu)和活性研究[J]. 成都: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2016: 52-53.

EffectofdifferentextractionmethodsontheextractionratioandantioxidantactivityofpolysaccharidesfromGastrodiaelataBl.

In order to screen a suitable extraction method for polysaccharides fromGastrodiaelataBl., the hot water extraction, ultrasound extraction and enzymatic hydrolysis were applied to extracting polysaccharides fromG.elataBl.f.glaucaS. Chow from Pingwu in Sichuan province, then the polysaccharides extraction ratios and their antioxidant activities were compared. The polysaccharides extraction ratios and antioxidant activities were obviously influenced by the extraction methods. Of them, the extraction ratio of enzymatic hydrolysis was the highest with the value of 50.315%, which was extremely different from the other extraction methods (P<0.01). The antioxidant activities were in the following order: ultrasound extraction, enzymatic hydrolysis and hot water extraction by using DPPH free radical scavenge capacity and FRAP values. However, the antioxidant activities were in the following order: enzymatic hydrolysis, ultrasound extraction and hot water extraction by using ABTS free radical scavenge capacity. In conclusion, due to the higher extraction rate and antioxidant activity, ultrasound extraction and enzymatic hydrolysis were efficient to extract polysaccharides fromG.elata.

GastrodiaelataBl.; polysaccharides; hot water extraction; ultrasound extraction; enzymatic hydrolysis; antioxidant activities

四川省科技支撐計(jì)劃子課題(編號(hào)：2014SZ0131)

王慶，男，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)在讀碩士研究生。

吳衛(wèi)(1970—)，女，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師，博士。E-mail：ewuwei@sicau.edu.cn

2017—05—04

10.13652/j.issn.1003-5788.2017.09.031