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        VEGF及其受體在卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義

        2017-11-13 09:38:52李占巍鄭杰劉斐
        中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥 2017年30期

        李占巍 鄭杰 劉斐

        【摘要】 目的 研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及其受體在卵巢癌形成和轉(zhuǎn)化過(guò)程中的表達(dá)特點(diǎn)與卵巢癌的臨床病理學(xué)參數(shù)關(guān)系。方法 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)39例卵巢癌及28例正常卵巢組織(正常對(duì)照)中VEGF、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR2)的mRNA表達(dá)的差異及臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果 卵巢癌中VEGF、VEGFR1、VEGFR2的mRNA表述明顯高于正常卵巢組織, VEGF的mRNA表達(dá)差別倍數(shù)2-△△CT=1.34, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05);VEGFR1的mRNA表達(dá)差別倍數(shù)2-△△CT=3.11, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01);VEGFR2的mRNA表達(dá)差別倍數(shù)2-△△CT=2.34, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

        結(jié)論 VEGF、VEGFR1、VEGFR2的mRNA在卵巢癌組織中表達(dá)明顯增高, 提示VEGF及其受體可能與卵巢癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

        【關(guān)鍵詞】 卵巢癌;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

        DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.30.024

        卵巢癌死亡率高, 嚴(yán)重威脅了婦女健康。由于無(wú)限制細(xì)胞增殖特性, 惡性腫瘤對(duì)于能量的需求是普通細(xì)胞的很多倍, 需要完善的供氧、供血體系, 血管的發(fā)生、成熟程度對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的重要性不言而喻。其中在血管發(fā)育構(gòu)成中, 受體酪氨酸激酶調(diào)控其生長(zhǎng)、移植分化過(guò)程。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及其受體的研究在眾多影響腫瘤血管生成的因子中最受人們的關(guān)注。VEGF在內(nèi)皮細(xì)胞激活其受體從而促進(jìn)血管和淋巴管網(wǎng)絡(luò)的擴(kuò)展[1]。VEGF是通過(guò)其特異性受體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)介導(dǎo), 發(fā)揮其促進(jìn)新血管生成和提高血管通透性的生物學(xué)效應(yīng), 繼而在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生[2]。本文旨在通過(guò)對(duì)正常人卵巢組織和卵巢癌組織中VEGF和VEGF表達(dá)特點(diǎn)的檢測(cè), 進(jìn)一步闡述腫瘤微血管生成機(jī)制與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的

        關(guān)系。

        1 材料與方法

        1. 1 實(shí)驗(yàn)材料 組織材料選取2014年12月~2016年12月遼陽(yáng)市第五人民醫(yī)院手術(shù)切除并未經(jīng)治療且病理和臨床資料完整的卵巢癌組織標(biāo)本39例, 28例正常卵巢組織(正常對(duì)照)。將采集好的樣本放入液氮速凍, 之后再轉(zhuǎn)入-70℃冰箱待用。所有診斷均經(jīng)病理檢查證實(shí)。

        1. 2 試劑 總RNA抽提試劑TRIZOL 美國(guó)Invitrogen公司(生產(chǎn)批號(hào):15596-026);RNAiso Plus Kit寶生物工程(大連)有限公司(生產(chǎn)批號(hào):BK3303);PrimeScript RT reagent Kit寶生物工程(大連)有限公司(批號(hào):BK503);SYBR Premix Ex Taq II Kit 寶生物工程(大連)有限公司(生產(chǎn)批號(hào):BK402);qRT-PCR儀德國(guó)JUIPITER儀器設(shè)備有限公司。

        1. 3 研究方法 采用Trizol試劑盒提取癌組織以及癌旁組織總RNA, 反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA第一鏈合成, 利用按SYAR Drallex Bx CapⅡ試劑盒操作說(shuō)明書制備qRT-PCR, 采用FOLD CHANGE方法對(duì)qRT-PCR的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析。本實(shí)驗(yàn)以美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)中基因?yàn)槟0鍋?lái)設(shè)計(jì)所需用到的基因引物及內(nèi)參基因, 運(yùn)用QIUKE GENE設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行設(shè)計(jì)篩選而成。PCR引物及堿基序列:VEGF正向引物, 5'-CTCGCGGCTCTCCTCCATCTGT-3', 反向引物:5'-TTGGCCTGCATTCACACTTGGTG-3';VEGFR1正向引物:5'-AGATAGCCAGCGGCCTTTTGTGA-3', 反向引物:5'-TGGCGGATCCATTAGCCTTCTG-3';VEGFR2正向引物:5'-CAGGCGAATACCGCTGCTTCTAT-3', 反向引物:5'-CGCGGTGCAGTTGAGTATGAGTC-3'。PCR反應(yīng)條件如下:95℃, 30 s, 預(yù)變性40個(gè)循環(huán);95℃, 5 s, 變性;55℃, 30 s, 退火;72℃, 30 s, 充分延伸, 采集熒光。β-actin 為內(nèi)參。

        1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用 Depression2.1軟件進(jìn)行計(jì)算, 計(jì)算方法為2-△△CT法, 其中將對(duì)照組的2-△△CT 數(shù)值設(shè)為1。通過(guò)SPSS18.0軟件進(jìn)行顯著性差異分析, P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2. 1 卵巢癌臨床特征 診斷時(shí)年齡36~75歲, 平均年齡61.28歲;家族史12例;腹水8例;周圍組織浸潤(rùn)24例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。漿液性囊腺癌19例, 粘液性囊腺癌10例, 子宮內(nèi)膜樣癌8例, 其他類型2例。卵巢癌組織分為三組:低分化(12例)、中分化(17例)、高分化(10例), 按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)(FIGO)分為4期, Ⅰ期3例, Ⅱ期6例, Ⅲ期22例, Ⅳ期8例。

        2. 2 VEGF基因、VEGFR1基因和VEGFR2基因表達(dá)情況的測(cè)定 qRT-PCR擴(kuò)增曲線均形態(tài)平滑, 復(fù)孔間平行性均好, 融解曲線均是單峰, 組間重復(fù)性均好。檢測(cè)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后發(fā)現(xiàn):與正常對(duì)照組織相比, VEGF的mRNA表達(dá)差別倍數(shù)2-△△CT=1.34, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05), 表明卵巢癌組織較正常組織VEGF基因表達(dá)水平發(fā)生了明顯上升;VEGFR1的mRNA表達(dá)差別倍數(shù)2-△△CT=3.11, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01), 表明卵巢癌組織較正常組織VEGFR1基因表達(dá)水平發(fā)生了非常顯著的增高;VEGFR2的mRNA表達(dá)差別倍數(shù)2-△△CT=2.34, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01), 表明卵巢癌組織較正常組織VEGFR2基因表達(dá)水平發(fā)生了非常顯著的增高。endprint

        3 討論

        實(shí)體瘤快速增長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移離不開血管生成, VEGF信號(hào)通路在血管的生成、功能完善、網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建的不同階段, 不同表達(dá)程度的VEGF受體及配體也都扮演著各自重要的角色。VEGF的生物學(xué)特性主要分為以下幾點(diǎn):①引導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂并啟動(dòng)體內(nèi)形成血管;②具備明顯的腔化作用和增加血管通透性之作用;③有利于產(chǎn)生更多便于血管形成的組織因子;④具備免疫抑制作用[3]。VEGF特異性識(shí)別并結(jié)合VEGFR1后, 由于VEGFR1并不具有酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域, 所以它缺乏細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能, 因而竟?fàn)幮缘匾种芕EGF的誘導(dǎo)形成新生血管[4]。近年來(lái)大量的研究表明, VEGF造成的內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、通透性以及存活等相關(guān)生理或病理生理的改變, 主要是通過(guò)特異性識(shí)別VEGFR2來(lái)實(shí)現(xiàn)的[5]。VEGFR2介導(dǎo)的最主要信號(hào)通路是PLC-γ-PKC-Raf-MEK-MAPK, 經(jīng)此通路該通路可將信號(hào)有效的轉(zhuǎn)導(dǎo)至核內(nèi), 增強(qiáng)了相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞增殖[6-8]。

        本研究通過(guò)qRT-PCR法檢測(cè)卵巢癌組織和正常卵巢組織中VEGF和VEGFR表達(dá), 發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織中VEGF、VEGFR1、VEGFR2 的mRNA表達(dá)量明顯高于正常卵巢組織, 這一結(jié)果表明VEGF在卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著重要作用, 深入研究VEGF和VEGFR的生物學(xué)特性, 有助于加深腫瘤微血管生成的分子機(jī)制及其發(fā)生發(fā)展的了解, 從而有助于人們?cè)诼殉舶┑脑\斷治療和預(yù)后判斷方面尋找新的途徑[9-11]。尤其是以此發(fā)現(xiàn)一種新型有效卵巢癌治療的方法, 即通過(guò)在抑制腫瘤血管生成的抗VEGF抗體、VEGF拮抗劑、反義VEGF血管生成抑制物的使用上取得突出的進(jìn)展。

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        [收稿日期:2017-08-04]endprint

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