張春節(jié) 姜維美 韓 磊 孫詠梅

（1 連云港市第二人民醫(yī)院病理科，江蘇 連云港 222000；2 連云港市第二人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇 連云港 222000）

ERCC1、β-tubulin3在非小細胞肺癌中的免疫組織化學(xué)及相關(guān)基因表達的差異

張春節(jié)1姜維美2韓 磊1孫詠梅1

（1 連云港市第二人民醫(yī)院病理科，江蘇 連云港 222000；2 連云港市第二人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇 連云港 222000）

目的探討ERCC1、β-tubulin3在非小細胞肺癌（non small celllung cancer，NSCLC）中的免疫組織化學(xué)及相關(guān)基因表達的差異以及其表達與鉑類藥物化療敏感性的關(guān)系。方法分別應(yīng)用免疫組化方法及基因檢測方法檢測經(jīng)過順鉑標準化化療的61例晚期非小細胞肺癌組織中ERCC1、β-tubulin3的表達，并分析它們之間的相互關(guān)系。結(jié)果本組患者ERCC1、β-tubulin3的免疫組織化學(xué)檢測方法陽性表達分別為40.98%（25/61）、47.54%（29/61），基因檢測法陽性分別為59.02%（36/61）、50.82%（31/61）。ERCC1在兩種方法的檢測上本實驗結(jié)果顯示有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。β-tubulin3在兩種方法的檢測上本實驗結(jié)果顯示無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論免疫組化法和基因檢測法ERCC1在檢測中存在差異，二者之間是有統(tǒng)計學(xué)意義的（P＜0.05）?；驒z測方法在陰性檢測的特異性上要高于免疫組織化學(xué)檢測，基因檢測在對ERCC1的檢測特異性上要強于免疫組化檢測。

非小細胞肺癌；ERCC1；β-tubulin3；免疫組化；基因檢測

目前，肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤之一，并且發(fā)病率呈上升趨勢。所有肺癌的類型中非小細胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）約占80%，約有50%患者在確診時即為晚期已無法通過手術(shù)治療，因此化療就成了主要治療手段[1]，鉑類藥物化療是晚期肺癌的重要治療手段之一，但由于先天性或獲得性耐藥，大多數(shù)患者最終出現(xiàn)復(fù)發(fā)或耐藥[2]。本研究分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)、基因檢測的方法對經(jīng)過鉑類標準化治療的患者進行切除修復(fù)交叉互補基因1（excision repair cross-completion 1，ERCC1）、β-微管蛋白3（β-tubulin3）進行檢測并對結(jié)果做相關(guān)分析。

1 材料與方法

1.1 材料：選取自2012年1月至2013年6月在我院腫瘤治療的住院患者，均為支氣管鏡、經(jīng)皮肺穿刺或淋巴結(jié)活檢經(jīng)病理確診的61例NSCLC患者，所有患者均為初診治療，患者均接受培美曲塞聯(lián)合奈達鉑方案化療4～6個周期，每2個周期評價療效其中男性45例，女性16例；年齡46～75歲，中位年齡60歲；鱗癌26例，腺癌35例；ⅢB期29例，Ⅳ期32例；體力狀況（PS）評分≤2；預(yù)計生存時間≥3個月；治療有效27例，治療無效34例。

1.2 方法：免疫組織化學(xué)采用SP二步法檢測，ERCC1陽性表達于細胞核，β-tubulin3陽性表達于細胞質(zhì)，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標志?；虮磉_的檢測方法采用SYBRGreen熒光實時定量PCR法。操作按照試劑盒說明書進行。以B-actin基因為內(nèi)參。利用待測樣本的Ct 值（3復(fù)管均值）求出相應(yīng)基因拷貝數(shù)作為檢測結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，各組間比較采用卡方檢驗并求出P值，按P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ERCC1、β-tubulin3在晚期NSCLC組織中的免疫組化表達：ERCC1陽性表達25例（40.98%）、β-tubulin3陽性表達29例（47.54%）。SYBRGreen熒光實時定量PCR法ERCC1陽性表達為36例（59.02%）、β-tubulin3陽性表達31例（50.82%）。ERCC1在兩種檢測方法中存在差異，二者之間有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），β-tubulin3在兩種檢測方法中不存在差異，二者之間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。二者相互關(guān)系見表1。

2.2 免疫組化法ERCC1：陽性表達為25例，其中化療有效病例為5例（20.00%）、化療無效病例為20例（80.00%）。免疫組化法ERCC1陰性表達為36例，其中化療有效病例為22例（61.11%）、化療無效病例為14例（38.89%）?；驒z測法ERCC1陽性表達為36例，其中化療有效病例為4例（11.11%）、化療無效病例為32例（88.89%）?；驒z測法ERCC1陰性表達為25例，其中化療有效病例為23例（92.00%）、化療無效病例為2例（8.00%）。在陽性表達病例中二者的化療率之間是無差別的，不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），在陰性表達病例中二者的化療率之間是有差別的，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。二者相互關(guān)系見表2。

表1 ERCC1、β-tubulin3的免疫組化表達與PCR表達的關(guān)系

表2 ERCC1、β-tubulin3的免疫組化、PCR表達與療效關(guān)系

2.3 免疫組化法β-tubulin3：陽性表達為29例，其中化療有效病例為14例（48.28%）、化療無效病例為15例（51.72%）。免疫組化法β-tubulin3陰性表達為32例，其中化療有效病例為13例（40.62%）、化療無效病例為19例（59.38%）?；驒z測法β-tubulin3陽性表達為31例，其中化療有效病例為，14例（45.16%）、化療無效病例為17例（54.84%）?；驒z測法β-tubulin3陰性表達為30例，其中化療有效病例為13例（43.33%）、化療無效病例為17例（56.67%）。在陽性或陰性表達病例中二者的化療率之間均是無差別的，不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。二者相互關(guān)系見表2。

3 討 論

ERCC1在核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)（NER）中起限速或調(diào)節(jié)作用[3]，其功能活性的高低可反映整個DNA核苷酸切除修復(fù)的活性水平，順鉑藥物的毒性源于與DNA的結(jié)合，從而干擾DNA修復(fù)、細胞周期阻滯及細胞凋亡等過程，ERCCl過表達通過NER徑可使停滯在G2/M期損傷的DNA迅速修復(fù)，從而導(dǎo)致腫瘤細胞對鉑類耐藥。低表達會促使肺癌的發(fā)生和復(fù)發(fā)，但對鉑類藥物敏感，高表達可減少腫瘤的復(fù)發(fā)，但易引起耐藥的發(fā)生。因此ERCCl的表達水平不僅與腫瘤細胞DNA損傷修復(fù)密切相關(guān)，還是導(dǎo)致鉑類抗腫瘤藥物耐藥的關(guān)鍵基因[4]。Olaussen等[5]研究761例NSCLC患者ERCC1的表達水平，證實陰性表達的患者其總生存期明顯高于陽性表達的患者，且前者應(yīng)用含鉑輔助化療明顯延長生存期，這與Leng等[6]通過研究回顧性分析發(fā)現(xiàn)，ERCClmRNA高表達的NSCLC患者對鉑類產(chǎn)生耐藥性，從而導(dǎo)致其生存率低于低表達者的研究結(jié)果一致。ERCC1mRNA的表達水平可以作為以鉑類為基礎(chǔ)化療NSCLC患者預(yù)后和預(yù)測指標[7]。

β-tubulin3是微管結(jié)構(gòu)的主要組成，而微管是細胞骨架的重要組成部分，在有絲分裂中起重要作用，編碼β-tubulin3的基因位于6p21-3染色體上，該基因有4個外顯子，其中第4外顯子是最重要的，它不僅是主要編碼區(qū)，而且是β-tubulin和微管蛋白結(jié)合紫杉類藥物作用的位點，經(jīng)常發(fā)生突變，基因突變可能與紫杉類耐藥相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)β-tubulin3 表達水平高的患者，其化療療效及患者生存期要低于表達低的患者[8]。β-tubulin3高表達的NscLc患者對紫杉醇耐藥，反之β-tubulin3低表達的NSCLC患者對紫杉醇敏感，這與Rosell等研究發(fā)現(xiàn)β-tubulin3 mRNA的表達與疾病進展時間也密切相關(guān)，低表達者疾病進展時間為6.8個月，高表達者為4.2個月（P=0.03）的結(jié)果相似。與鉑類藥物的耐藥性是否相關(guān)尚不明確。

本研究分別應(yīng)用免疫組化法及SYBRGreen熒光實時定量PCR法檢測ERCC1，結(jié)果顯示在檢測兩種檢測方法之間是有統(tǒng)計學(xué)意義的（P＜0.05，見表1）。SYBRGreen熒光實時定量PCR法在化療有效的陰性患者的檢測特異性上要高于免疫組織化學(xué)檢測，二者之間是有統(tǒng)計學(xué)意義的（P＜0.05，見表2）。SYBRGreen熒光實時定量PCR法與免疫組織化學(xué)檢測在化療有效的陽性患者的檢測二者之間是無區(qū)別的，二者無統(tǒng)計學(xué)意義的（P＞0.05，見表2）。β-tubulin3在兩種方法的檢測上本實驗結(jié)果顯示無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，見表1），在陽性或陰性的特異性上二者均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，見表2）。SYBRGreen熒光實時定量PCR法在對ERCC1的檢測特異性上要強于免疫組化檢測。在對提高療效降低耐藥產(chǎn)生的檢測方法選擇上，SYBRGreen熒光實時定量PCR法的指導(dǎo)作用要強于免疫組化的檢測結(jié)果。希望本實驗的結(jié)果能對臨床靶向用藥時選擇相應(yīng)的檢測方法有一定的指導(dǎo)作用，以提高藥物的療效減少藥物的耐藥產(chǎn)生。由于本實驗病例數(shù)的限制可能存在一些誤差，在以后工作中將進一步收集病例補充實驗完善數(shù)據(jù)。

[1] 湯釗酋.現(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,2000:859-860.

[2] Herbst RS,Dang NH,Skarin AT.Chemotherapy for advanced nonsmall cell lung cancer [J].Hematol Oncol Clin North Am,1997,11(3):473-507.

[3] Reed E.Platinum.DNA adduct nuclcotidc excision repair and platinum based anti-cancer chemotherapy[J].Cancer Treat Rex,1998,24(5):331-344.

[4] Steffensen KD,Waldstrom M,Jakobsen A.The relation-ship of platinum resistance and ERCC1 protein expression in epithelial ovarian cancer[J].Int J Gynecol Cancer,2009,19(5):820-825.

[5] Olaussen KA,Dunant A,Fouret P,et al.DNA repair by ERCC1 in non-small-cell lung cancer and cisplatn-based adjuvant chemotherapy [J].N Eng1 J Med,2006,355(10):983-991.

[6] Leng XF,Chen MW,Xian L,et a1.Combined analysis of mRNA expression of ERCCl,BAG-1,BRCAl,RRMl and TUBB3 to predict prognosis in patients with non-small cell lung cancer who received adjuvant chemonlerapy[J].J Exp Clin cancer Res,2012,31(25):1-11.

[7] 劉芯,李瑩.可切除非小細胞肺癌ERCC1的表達與預(yù)后的關(guān)系[J].Guangdong Med J,2014,35(11):1710-1712.

[8] Gan PP,Pasquier E,Kavallaris M.Class Ⅲ beta-tubulin mediates sensitivity to chemoth-erapeutic drugs in nonsmall-cell-lung cancer[J].Cancer Res,2007,67(19):9356-9363.

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