萬(wàn)宇平，韓深，吳小勝，劉螢，孔祥雅，桑旭升，鄔良賢，彭鴿

（1.北京勤邦生物技術(shù)有限公司，北京102206；2.北京市食品安全免疫快速檢測(cè)工程技術(shù)研究中心，北京102206；3.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，北京100026；4.福建省龍巖市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，福建龍巖364000）

動(dòng)物性食品中替米考星酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究

萬(wàn)宇平1，2，韓深3，吳小勝1，2，劉螢3，孔祥雅1，2，桑旭升1，2，鄔良賢4，彭鴿1，2

（1.北京勤邦生物技術(shù)有限公司，北京102206；2.北京市食品安全免疫快速檢測(cè)工程技術(shù)研究中心，北京102206；3.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，北京100026；4.福建省龍巖市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，福建龍巖364000）

通過(guò)對(duì)替米考星分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，制備替米考星半抗原及人工抗原，通過(guò)免疫動(dòng)物得到替米考星的單克隆抗體。該抗體靈敏度為0.5 μg/L，對(duì)泰樂(lè)菌素的交叉反應(yīng)率小于1%。基于該抗體建立了替米考星間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法檢測(cè)動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋、牛奶的檢測(cè)限分別為0.5、10、1、5、5μg/kg，添加水平回收率為70%～110%，變異系數(shù)小于15%。

替米考星；單克隆抗體；酶聯(lián)免疫檢測(cè)

替米考星（Tilmicosin）是半合成大環(huán)內(nèi)酯類畜禽專用抗生素，其主要作用機(jī)理是干擾菌體蛋白質(zhì)的合成，主要用于防治家畜肺炎（由胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌、支原體等感染引起）、禽支原體病及泌乳動(dòng)物的乳腺炎，低劑量時(shí)亦可作豬的飼料添加劑以促進(jìn)增重和提高飼料轉(zhuǎn)換率。雖然該藥物具有良好的藥理作用，但在體內(nèi)蓄積達(dá)到一定濃度，可引起過(guò)敏反應(yīng)、耳蝸神經(jīng)損害、聽(tīng)力減退，嚴(yán)重者造成肝腎的嚴(yán)重?fù)p害，同時(shí)導(dǎo)致攜帶耐藥因子的菌株擴(kuò)散[1]。農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件中規(guī)定，替米考星在肌肉、脂肪中的最高殘留限量為 75 μg/kg~100 μg/kg；在肝臟、腎臟中的最高殘留限量為250 μg/kg~1 000 μg/kg；在奶中的最高殘留限量為 50 μg/kg。

目前替米考星的檢測(cè)方法主要是儀器檢測(cè)方法[2-5]和免疫分析檢測(cè)方法[6-12]。由于儀器設(shè)備昂貴，技術(shù)水平要求較高，樣品還需要進(jìn)行純化處理，不利于現(xiàn)場(chǎng)篩查。文獻(xiàn)報(bào)道替米考星殘留檢測(cè)的免疫學(xué)方法相對(duì)較少，大多數(shù)對(duì)泰樂(lè)菌素存在交叉或涉及的檢測(cè)基質(zhì)單一。本文應(yīng)用酶聯(lián)免疫法，測(cè)定動(dòng)物組織、蜂蜜、雞蛋和牛奶中替米考星藥物的殘留量，具有檢測(cè)限低、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)速度快、檢測(cè)成本低，容易推廣等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

替米考星、泰樂(lè)菌素、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、卵清蛋白（ovalbumin，OVA）、辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）：美國(guó)Sigma公司；包被液（0.05mol/L碳酸鹽緩沖液pH 9.6）、洗滌液（含1%吐溫-20的0.15mol/L PBS pH 7.4）、封閉液（10%小牛血清溶液）、樣本稀釋液（含0.5%吐溫-20的0.02 mol/L PBS pH 7.4）：北京化學(xué)試劑公司；8周齡的雌性Balb/C小鼠、無(wú)病原體羊：北京勤邦生物技術(shù)有限公司；動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋、牛奶：北京安為天檢測(cè)技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

MK3酶標(biāo)儀：上海雷勃分析儀器有限公司；Costar酶標(biāo)板：北京諾博萊德科技有限公司；TDL-40B離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 半抗原及人工抗原

按照如圖1所示的技術(shù)路線合成替米考星半抗原。取1.0 g替米考星，加DMF溶解，加氫化鈉0.138 g，加 2-（4-溴丁基）-1，3-二氧戊環(huán) 0.72 g，60℃攪拌 5 h。停止反應(yīng)，冷卻到室溫，加水稀釋，加適量稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值到7，1，2-二氯乙烷萃取，分去水相，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，正己烷/乙醚（5/1，體積比）重結(jié)晶，得到中間產(chǎn)物縮醛替米考星0.95 g，收率83.33%。取0.95 g中間產(chǎn)物縮醛替米考星加20 mL乙醇溶解，加1 mol/L稀鹽酸10 mL，50℃攪拌反應(yīng)4 h。停止反應(yīng)，加碳酸氫鈉水溶液，調(diào)節(jié)pH值到7，加乙酸乙酯萃取，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干，上硅膠柱，二氯甲烷/甲醇（5/1，體積比），洗脫分離，得到戊醛替米考星半抗原產(chǎn)物0.8 g，收率 88.9%。

圖1 替米考星半抗原的合成Fig.1 Synthesis of tilmicosin hapten

將上述的半抗原與BSA和OVA進(jìn)行偶聯(lián)分別得到替米考星免疫原和包被原，具體合成過(guò)程如下：取戊醛-替米考星半抗原36 mg用0.4 mL乙醇溶解，緩慢滴加到6 mL含50 mg BSA的0.1 mol/L碳酸鹽緩沖液（CB，pH 9.6）中溶解，室溫避光攪拌6 h后用0.02 mol/L PBS透析3 d得到免疫原。取戊醛-替米考星半抗原16 mg用0.3 mL乙醇溶解，緩慢滴加到5 mL含50 mg OVA的CB（pH 9.6）中溶解，室溫避光攪拌4 h后用0.02 mol/L PBS透析3 d得到包被原。

1.3.2 單克隆抗體的制備及效價(jià)驗(yàn)證

將免疫原與等量弗氏完全佐劑充分乳化，免疫8周齡Balb/c小鼠，取免疫后的鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選獲得能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。采用體內(nèi)誘生法得到替米考星單克隆抗體溶液[13]，-20℃保存。

1.3.3 制備酶標(biāo)記抗體

用1.3.2步驟得到的替米考星單克隆抗體免疫無(wú)病原體羊，得到羊抗鼠抗體，然后將羊抗鼠抗體與HRP偶聯(lián)，即得到酶標(biāo)記抗體[13]。

1.3.4 優(yōu)選抗原包被濃度、單克隆抗體濃度，制備酶標(biāo)板

抗原稀釋倍數(shù)依次為：1∶3000、1 ∶6000、1 ∶12000；單克隆抗體稀釋倍數(shù)依次為：1∶20 000、1∶40 000、1∶80 000、1∶160 000；酶標(biāo)記抗體液的稀釋倍數(shù)為1 ∶1 000；測(cè)定波長(zhǎng)為 450 nm，分別測(cè)定 0、0.5 μg/L 質(zhì)量濃度的替米考星標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，并按如下公式計(jì)算百分吸光率：

在酶標(biāo)板包被100 μL/孔抗原包被液，37℃環(huán)境中避光孵育2 h或4℃過(guò)夜，隨后清洗酶標(biāo)板1次～2次，再加入150 μL/孔封閉液，37℃避光孵育2 h，傾去孔中液體拍干，即制備完成酶標(biāo)板。

1.3.5 樣本的前處理方法

組織（豬肉、雞肉、牛肉、羊肉、魚、蝦）前處理方法：稱取2.0±0.05 g均質(zhì)后的組織樣本加入2 mL 0.1 mol/L CB（PH 10.6）和8 mL乙酸乙酯，渦動(dòng)儀渦動(dòng)3 min，3 000 g室溫離心5 min，取4 mL上層有機(jī)相于50℃~60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈?，加?mL正已烷，渦旋儀渦動(dòng)30 s，加入1 mL樣本稀釋液，渦旋儀渦動(dòng)30 s，3 000 g室溫離心5 min，取下層50 μL用于分析。

肝臟（雞肝、豬肝）的前處理方法：稱?。?.0±0.05）g均質(zhì)后的樣本加入2 mL 0.5 mol/L CB（pH10.6）和8 mL乙酸乙酯，渦動(dòng)儀渦動(dòng)3 min，3 000 g室溫離心5 min，取2 mL上層有機(jī)相于50℃~60℃（122℉~140℉）水浴氮?dú)饬飨麓蹈?，加? mL正已烷，渦旋儀渦動(dòng)30 s，加入1 mL樣本稀釋液，渦旋儀渦動(dòng)30 s，3 000 g室溫離心5 min，取100 μL下層加400 μL樣本稀釋液，渦旋儀渦動(dòng)30 s，取50 μL用于分析。

蜂蜜的前處理方法：稱取2.0±0.05 g蜂蜜樣本加入 2 mL 0.1 mol/L CB（PH=10.6）和 8 mL乙酸乙酯，渦動(dòng)儀渦動(dòng)3 min，3 000 g室溫離心5 min，取2 mL上層有機(jī)相于50℃~60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈?，加? mL樣本稀釋液，渦旋儀渦動(dòng)30 s，取50 μL用于分析。

雞蛋、牛奶的前處理方法：取100 μL均質(zhì)后的雞蛋或牛奶樣本加900 μL特殊樣本稀釋液（取樣本稀釋液與甲醇按19∶1體積比混合），渦旋儀渦動(dòng)30 s，取50 μL 用于分析。

1.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

用0.02 mol/L PBS將替米考星稀釋成0、0.5、1.5、4.5、13.5、40.5 μg/L 共 6 個(gè)質(zhì)量濃度，50 μL/孔加入酶標(biāo)板中，然后加入酶標(biāo)二抗50 μL/孔，再加入抗體工作液50 μL/孔，25℃避光反應(yīng)30 min。洗板拍干后加入底物液 100 μL/孔，25℃避光反應(yīng) 15 min，最后每孔加入50 μL終止液，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm吸光度值。標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)為替米考星標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值，縱坐標(biāo)為百分吸光度值B（其他濃度孔的顯色值）/B0（0 μg/L孔的顯色值），重復(fù)測(cè)定2次。

1.3.7 樣品中替米考星的檢測(cè)

根據(jù)1.3.6測(cè)定所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋或牛奶樣本的OD450nm值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到其相應(yīng)的質(zhì)量濃度，用該質(zhì)量濃度乘以稀釋倍數(shù)即樣本中替米考星殘留量。

1.3.8 檢測(cè)性能

1）計(jì)算檢出限

測(cè)定動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋和牛奶空白樣本各20份，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)差，以測(cè)定平均值加3倍的標(biāo)準(zhǔn)差作為方法的檢測(cè)限（limit of detection,LOD），即可檢測(cè)出的最低被測(cè)物濃度。

2）精密度及準(zhǔn)確度

分別向空白動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋和牛奶中添加替米考星至終濃度為 2、20、2、10、10 μg/L，重復(fù)5次，分別取3個(gè)批次的試劑盒計(jì)算變異系數(shù)。準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)以回收率作為指標(biāo)；精密度評(píng)價(jià)以重復(fù)測(cè)定某一濃度樣品的檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)作為指標(biāo)。

3）測(cè)定抗體的特異性

分別測(cè)定替米考星、泰樂(lè)菌素與抗體的結(jié)合反應(yīng)。交叉反應(yīng)率為替米考星的IC50與這些物質(zhì)的IC50的百分比，決定了它們對(duì)替米考星檢測(cè)的干擾程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 替米考星人工抗原的檢測(cè)結(jié)果

將載體蛋白及偶聯(lián)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳法檢測(cè)，結(jié)果顯示偶聯(lián)物的電泳條帶較載體蛋白滯后，認(rèn)定免疫原和包被原偶聯(lián)成功。

2.2 優(yōu)選抗原包被濃度、單克隆抗體濃度

測(cè)定不同單克隆抗體稀釋倍數(shù)以及抗原稀釋倍數(shù)條件下，質(zhì)量濃度為0 μg/L和0.5 μg/L的替米考星標(biāo)準(zhǔn)品的OD450值，并計(jì)算百分吸光率，結(jié)果見(jiàn)表1。

抗原、單克隆抗體的最佳稀釋倍數(shù)為百分吸光率為70%～85%時(shí)的最大稀釋倍數(shù)。由表1可知，此次篩選的抗原稀釋倍數(shù)為6 000，最佳單克隆抗體稀釋倍數(shù)為80 000。

表1 抗原、抗體的濃度優(yōu)選結(jié)果Table 1 Concentration detection results of antigen and antibody

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以百分吸光度值B/B0為縱坐標(biāo)，以替米考星標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。

圖2 替米考星標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 The standard curve of tilmicosin

以評(píng)定模型Logit（B/B0）為縱坐標(biāo)，以替米考星標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，將圖2轉(zhuǎn)換后可知，在0.5 μg/L～40.5 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，Logit（B/B0）與替米考星質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（見(jiàn)圖3），建立擬合回歸直線方程為Y=-2.182 9X-0.007 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.997 1。

圖3 替米考星檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 The detection standard curve of tilmicosin

2.4 計(jì)算檢測(cè)限

20個(gè)動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋和牛奶空白樣本中替米考星的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。檢測(cè)限以測(cè)定平均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算。

表2 火空白樣本檢測(cè)限測(cè)定結(jié)果Table 2 Detection limit results of blank samples

由表2可知，本文建立的替米考星間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，檢測(cè)動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋和牛奶的檢測(cè)限分別為 0.5、10、1、5、5 μg/kg。

2.5 精密度及準(zhǔn)確度試驗(yàn)

樣本中替米考星的殘留量測(cè)定，要求有可靠合理的檢測(cè)方法，并有較高的靈敏度。在動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋和牛奶中按照設(shè)定的量分別添加替米考星標(biāo)準(zhǔn)品，然后按照1.2.3的方法測(cè)定?；厥章史秶鸀?0%～110%，變異系數(shù)小于15%，符合《農(nóng)業(yè)部文件》農(nóng)醫(yī)發(fā)[2005]17號(hào)附件2試劑盒備案參考評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)中第4點(diǎn)精密度和準(zhǔn)確度的規(guī)定，說(shuō)明此檢測(cè)方法是可靠的，可用于替米考星在動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋和牛奶中殘留量的分析測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 精密度及準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of precision and accuracy tests

2.6 抗體的特異性測(cè)定

單克隆抗體與替米考星、泰樂(lè)菌素的交叉反應(yīng)率見(jiàn)表4。

表4 抗體與其他物質(zhì)的交叉反應(yīng)率Table 4 Cross-reaction rate of tilmicosin and related analytes

替米考星單克隆抗體對(duì)泰樂(lè)菌素的交叉反應(yīng)率均較低，對(duì)替米考星具有較好的特異性。

3 結(jié)論

對(duì)替米考星的免疫分析方法中大多數(shù)對(duì)泰樂(lè)菌素存在交叉或涉及的檢測(cè)基質(zhì)單一。朱事康等[6]研究的泰樂(lè)菌素單克隆抗體與替米考星的交叉反應(yīng)率為40%，對(duì)肌肉、肝臟、蜂蜜中泰樂(lè)菌素的檢測(cè)限為1.5 μg/L ～3.0 μg/L。ZHANG 等[7]制備的單克隆抗體可同時(shí)識(shí)別泰樂(lè)菌素、替米考星、乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素、脫碳霉糖泰樂(lè)菌素，對(duì)牛奶中這4種物質(zhì)殘留的檢測(cè)限為 5.5 μg/L～11.7 μg/L。Burkin 等[8]研究的 ELISA 方法也是同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌素和替米考星，對(duì)牛奶、雞蛋、蜂蜜和雞肉中替米考星的檢測(cè)限為0.14 μg/L。羅曉琴等[9]、Le等[10]建立的膠體金免疫層析法以及王旗等[11]建立的熒光微球免疫層析法均是同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌素和替米考星。韓青等[12]建立的ELISA方法對(duì)泰樂(lè)菌素交叉反應(yīng)率為5%，涉及了牛奶中替米考星的檢測(cè)，其檢測(cè)限為2 μg/L。本研究制備的單克隆抗體靈敏度為0.5 μg/L，對(duì)泰樂(lè)菌素的交叉反應(yīng)率小于1%?；谠摽贵w建立了替米考星間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法檢測(cè)動(dòng)物組織、肝臟、蜂蜜、雞蛋和牛奶的檢測(cè)限分別為0.5、10、1、5、5 μg/kg，添加水平回收率為 70%～110%，變異系數(shù)小于15%。

[1] 林秋敏,賴寶色,林伯全,等．復(fù)方中草藥和替米考星對(duì)仔豬免疫功能的影響[J]．福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,30(11):1041-1045

[2] 張敏敏,王建兵,裴琳,等．雞血漿中替米考星HPLC檢測(cè)方法的建立[J]．中國(guó)家禽,2016,38(12):21-24

[3] 王海濤,張睿,段宏安,等．高效液相色譜法同步檢測(cè)牛奶中替米考星泰樂(lè)菌素和螺旋霉素殘留量[J]．分析試驗(yàn)室,2008,27(7):98-101

[4] 劉永濤,艾曉輝,鄒世平,等．水產(chǎn)品中螺旋霉素、替米考星、泰樂(lè)菌素與北里霉素殘留量的超高效液相色譜-紫外檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定[J]．分析測(cè)試學(xué)報(bào),2010,29(3):316-320

[5] JUAN C,MOLTOJ C,MANES J,et al.Determination of macrolide and lincosamide antibiotics by pressurized liquid extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry in meat and milk[J].Food Control,2010,21(12):1703-1709

[6] 朱事康,聶繼斌,劉星,等．動(dòng)物源性食品中泰樂(lè)菌素殘留ELISA試劑盒的研制[J]．中國(guó)獸藥雜志,2009,43(8):5-8

[7] ZHANG J K,LIU J X,WANG L L,et al.Production of the monoclonal antibody against tylosin for immunoassay of macrolide antibiotics in milk[J].Journal of Environment al Science and Health Part B-Pesticides Food Contaminants and Agricultural Wastes,2012,47(9):876-882

[8] BURKIN M,GALVIDIS I.Simultaneous separate and group determination of tylosin and tilmicosin in food-stuffs using sindle antibody-based immunoassay[J].Food Chemistry,2012,132(2):1080-1086.

[9] 羅曉琴,萬(wàn)宇平,孫震,等．牛奶中泰樂(lè)菌素和替米考星的膠體金免疫層析法測(cè)定[J]．中國(guó)乳品工業(yè),2012,40(10):42-48

[10]LE T,HE H Q,NIU X D,et al.Development of an immunochromatographic assay for tylosin and tilmicosin in muscle,liver,fish and eggs[J].Agricultural Sciences,2013,24(4):467-480

[11]王旗,裴星瑤,李向梅,等．基于單一抗體的熒光微球免疫層析法快速定量檢測(cè)牛奶中泰樂(lè)菌素和替米考星殘留[C]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十一屆會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)與中國(guó)毒理學(xué)會(huì)獸醫(yī)毒理專業(yè)委員會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì),2015:184

[12]韓青,王靜,徐豪,等．牛奶中替米考星間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法的建立[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī),2015,42(10):2625-2630

[13]何方洋,沈建忠,萬(wàn)宇平,等．蘇丹紅殘留酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)研究[J]．食品研究與開(kāi)發(fā),2009,30(6):139-143

Detecting Tilmicosin in Animal Product Using Enzyme Linked Immunosorbent Assay

WAN Yu-ping1，2，HAN Shen3，WU Xiao-sheng1，2，LIU Ying3，KONG Xiang-ya1，2，SANG Xu-sheng1，2，WU Liang-xian4，PENG Ge1，2
（1.Beijing Kwinbon Biotechnology Company，Beijing 102206，China；2.Beijing Engineering Research Centre of Food Safety Immunodetection，Beijing 102206，China；3.Inspection and Quarantine Technical Center of Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Beijing 102206，China；4.Longyan Quality Inspection of Agriculture Products Monitoring Center，Longyan 364000，F(xiàn)ujian，China）

Artificial hapten and immunogens were synthesized，after which monoclonal antibodies against tilmicosin was raised.The sensitivity of the antibody was 0.5 μg/L，and it cross-reaction rate of tylosin was less than 1%.An indirect competitive enzyme immunoassay based on the antibody for the quantitative analysis of tilmicosin was described.The results showed that the limit of detection was 0.5 μg/kg in animal tissue，10 μg/kg in liver，1 μg/kg in honey and 5 μg/kg in eggs，and milk.The average recovery rate of 70%-110%，and the coefficients of variation of less than 15%.

tilmicosin；monoclonal antibody；enzyme immunoassay

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.22.032

北京市科技計(jì)劃課題（Z151100002115059）

萬(wàn)宇平（1982—），男（漢），研究員，學(xué)士，研究方向：食品安全快速檢測(cè)技術(shù)。

2017-04-15