李興東，鞏偉

原濟(jì)南軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所，山東濟(jì)南 250022

小柴胡顆粒制劑的多波長(zhǎng)指紋圖譜及藥材-制劑譜峰匹配分析

李興東，鞏偉

原濟(jì)南軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所，山東濟(jì)南 250022

目的分析小柴胡顆粒制劑的多波長(zhǎng)指紋圖譜及藥材-制劑譜峰匹配。方法運(yùn)用反相高效液相色譜法（RP-HPLC法）對(duì)3個(gè)廠家及實(shí)驗(yàn)室自制12批小柴胡顆粒評(píng)價(jià)多波長(zhǎng)指紋圖譜相似性，并匹配實(shí)驗(yàn)室自制小柴胡顆粒相同色譜條件下所用的原藥材指紋圖譜譜峰；運(yùn)用RP-HPLC法對(duì)不同來源的小柴胡顆粒中的指標(biāo)成分的量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果210 nm、254 nm、323 nm 波長(zhǎng)下，A 廠和實(shí)驗(yàn)室自制小柴胡顆粒的 r1、r2均＞0.9，B、C 兩廠的 r1、r2均＜0.9，280 nm 波長(zhǎng)下12批小柴胡顆粒的r1、r2均＞0.9，210 nm、254 nm、280 nm、323 nm波長(zhǎng)下來自同一廠家3個(gè)批次的小柴胡顆粒均具有極小的相似度差異；A廠和實(shí)驗(yàn)室自制制劑和柴胡藥材的匹配相似度≥0.900，B廠和C廠＜0.900。結(jié)論小柴胡顆粒制劑的多波長(zhǎng)指紋圖譜及藥材-制劑譜峰匹配能夠?qū)⒂行⒖继峁┙o臨床對(duì)中藥制劑質(zhì)量進(jìn)行較為全面的評(píng)價(jià)，值得在臨床推廣。

小柴胡顆粒制劑；多波長(zhǎng)指紋圖譜；藥材-制劑譜峰；匹配

中藥具有廣泛的成分和復(fù)雜的作用機(jī)制，局限性較大，這是因?yàn)槠滟|(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)僅僅是某種活性組分的量[1-2]。該實(shí)驗(yàn)對(duì)12批小柴胡顆粒的RP-HPLC指紋圖譜進(jìn)行了研究，將4個(gè)波長(zhǎng)下的指紋圖譜分別選取了出來，選取過程中嚴(yán)格依據(jù)制劑用藥材特性，同時(shí)匹配了制劑及其原藥材指紋圖譜的譜峰，并考察了樣品化學(xué)組成的總體波動(dòng)情況，將匹配結(jié)合制劑用藥材和制劑指紋圖譜多指標(biāo)成分定量測(cè)定的方法提了出來，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器和材料

儀器采用美國(guó)Waters生產(chǎn)的M32色譜管理站、2996型二極管陣列檢測(cè)器、2695型高效液相色譜儀，材料采用北京化工廠生產(chǎn)的磷酸、冰醋酸分析純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司禹城化工廠生產(chǎn)的甲醇、乙腈色譜純，蘭州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科提供的超純水，蘭州黃河藥材市場(chǎng)提供的100201傘形科柴胡屬植物南柴胡的干燥根柴胡，蘇州華葆藥業(yè)有限公司(A廠)生產(chǎn)的小柴胡顆粒 1、2、3，批號(hào)分別為 20070204、20061006、20061205，甘肅岷海制藥有限責(zé)任公司（B廠）生產(chǎn)的小柴胡顆粒4、5、6，批號(hào)分別為 20070502、20070810、20061101，云南白藥集團(tuán)股份有限公司（C廠）生產(chǎn)的小柴胡顆粒7、8、9，批號(hào)分別為 20070507、20070913、20061219，實(shí)驗(yàn)室自制制劑小柴胡顆粒 10、11、12， 批號(hào)分別為 20071011、20071121、20071229 及柴胡皂苷 a、d，批號(hào)分別為 110777-200507、110778-200506，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的對(duì)照品。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

Kromasil ODS保護(hù)柱、大連依利特C18色譜柱的規(guī)格分別為 10 mm×4.6 mm，5 μm、250 mm×4.6 mm，5 μm，進(jìn)行梯度洗脫時(shí)將流動(dòng)相設(shè)定為乙腈-0.5%磷酸水溶解，梯度程度：0～10 min、10～30 min、30～45 min、45～60 min、60～70 min乙腈濃度分別為 10%～25%、25%～45%、45%～55%、55%～80%、80%～100%，體積流量、柱溫、色譜圖光譜采集范圍分別為 0.8 mL/min、25℃、210～410 nm[3-4]。

2.2 小柴胡顆粒樣品溶液的制備

在100 mL具塞三角瓶中放置稱取出來的10.0 g小柴胡顆粒精密，將50 mL甲醇精密加入其中，對(duì)質(zhì)量進(jìn)行精密成定，進(jìn)行30 min的超聲處理，放置到室溫，將質(zhì)量稱定并對(duì)減失的質(zhì)量進(jìn)行補(bǔ)足，補(bǔ)足過程中用甲醇，搖勻，用微孔濾膜濾過，微孔濾膜直徑為0.45 μm，將續(xù)濾液取出來備用，將每個(gè)小柴胡顆粒樣品溶液樣品分為3份，然后對(duì)其進(jìn)行平行處理。

2.3 色譜柱相似性分析

將上述12批小柴胡顆粒樣品溶液取出來進(jìn)樣，容量為10 μL，依據(jù)上述色譜條件將小柴胡顆粒制劑的指紋圖譜建立起來。具體見表1。210 nm、254 nm、323 nm波長(zhǎng)下，A廠和實(shí)驗(yàn)室自制小柴胡顆粒的r1、r2均＞0.9，B、C兩廠的r1、r2均＜0.9，280 nm波長(zhǎng)下12批小柴胡顆粒的 r1、r2 均＞0.9，210 nm、254 nm、280 nm、323 nm 波長(zhǎng)下來自同一廠家3個(gè)批次的小柴胡顆粒均具有極小的相似度差異。

表1 不同波長(zhǎng)下各制劑的全譜平均數(shù)及中位數(shù)相似度

2.4 制劑和藥材譜峰匹配

將10 μL柴胡藥材樣品溶液、10 μL柴胡皂苷a和10 μLd對(duì)照品溶液取出來進(jìn)樣，將柴胡藥材色譜圖獲取過來，獲取過程中依據(jù)上述色譜條件，將210 nm色譜圖提取出來。對(duì)小柴胡顆粒模式進(jìn)行匹配，匹配過程中依據(jù)譜峰匹配方法，參照峰為1號(hào)峰，匹配峰的相對(duì)保留時(shí)間及峰面積具體見表2，共有匹配峰5個(gè)，柴胡皂苷a、d的匹配峰不存在，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因是水提柴胡過程中水解了柴胡皂苷a、d。如果小柴胡顆粒的制備工藝為水提取，那么其也不含柴胡皂苷a、d，和相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者[5-6]研究結(jié)果一致。A廠和柴胡藥材的匹配相似度為0.900，B廠為0.844，C廠為0.555，實(shí)驗(yàn)室自制制劑為0.930，A廠和實(shí)驗(yàn)室自制制劑和柴胡藥材的匹配相似度≥0.900，B 廠和 C 廠＜0.900。

表2 柴胡藥材和制劑譜峰匹配結(jié)果和相似度

3 結(jié)論

小柴胡顆粒制劑的多波長(zhǎng)指紋圖譜及藥材-制劑譜峰匹配能夠?qū)⒂行⒖继峁┙o臨床對(duì)中藥制劑質(zhì)量進(jìn)行較為全面的評(píng)價(jià)[7]，值得在臨床推廣。

[1]靳勇，孫磊，喬善義．小柴胡湯HPLC指紋圖譜的建立[J]．國(guó)際藥學(xué)研究雜志，2013，40(2):224-227．

[2]石志軍，徐以亮．小柴胡湯配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2010，12(7):31-32，40．

[3]馬艷芝.不同播期對(duì)柴胡有效成分含量、產(chǎn)量的影響及評(píng)價(jià)[J].中藥材,2014,10(12):2175-2177.

[4]莊延雙，蔡皓，劉曉，等．小柴胡顆粒中5種指標(biāo)性成分的同時(shí)含量測(cè)定及其特征圖譜研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012，47(1):84-87．

[5]李家春,孫蘭,李紅娟,等.桂枝茯苓膠囊HPLC指紋圖譜研究[J].中草藥,2012,43(7):1333-1335.

[6]劉歡,何忠俊,梁社往,等.滇重樓高效液相色譜指紋圖譜研究[J].中草藥,2012,43(9):1846-1851.

[7]張保國(guó)，李昌勤，劉慶芳．小柴胡湯現(xiàn)代藥效學(xué)研究[J].中成藥，2010，32(4):648-651．

R95

A

1672-5654（2017）10（a）-0042-02

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.28.042

李興東（1970-），男，江蘇鹽城人，本科，會(huì)計(jì)師，研究方向：質(zhì)量管理。

鞏偉（1980-），男，山東新泰人，博士，主管藥師，研究方向：藥物分析，藥品質(zhì)量監(jiān)督，E-mail:lixingdong@163.com。

2017-07-04）