■ 《當(dāng)代水產(chǎn)》李欣瑤 文/圖 [ 微信公眾號(hào)：tsfish ]

寧波大學(xué)教授周歧存：高核苷酸酵母水解物在對(duì)蝦中的應(yīng)用研究

■ 《當(dāng)代水產(chǎn)》李欣瑤 文/圖 [ 微信公眾號(hào)：tsfish ]

我主要講兩個(gè)方面，一是酵母類產(chǎn)品概述，另一方面是高核苷酸酵母水解物在對(duì)蝦中的應(yīng)用，其中在2016年做了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)，把實(shí)驗(yàn)結(jié)果跟大家進(jìn)行分享。

關(guān)于酵母類產(chǎn)品，相信大家都有所了解，現(xiàn)在市場(chǎng)上酵母類產(chǎn)品很多。從2011～2014年，市場(chǎng)上的酵母類產(chǎn)品快速發(fā)展，呈現(xiàn)快速增長(zhǎng)的趨勢(shì)。酵母類的產(chǎn)品主要有酵母培養(yǎng)物、酵母提取物（水解物）、酵母細(xì)胞壁等。

酵母培養(yǎng)物是由酵母在嚴(yán)格控制條件下發(fā)酵制成的產(chǎn)品。酵母培養(yǎng)物由酵母細(xì)胞代謝產(chǎn)物和經(jīng)過發(fā)酵后變異的培養(yǎng)基，以及少量已無活性的酵母細(xì)胞所構(gòu)成。在酵母培養(yǎng)物的生產(chǎn)過程中，酵母細(xì)胞僅僅是被用來生產(chǎn)細(xì)胞代謝產(chǎn)物的一種工具。

2013年中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告（第2038號(hào)）將“釀酒酵母培養(yǎng)物”從《飼料添加劑品種目錄》轉(zhuǎn)入《目錄》。特征描述為以釀酒酵母為菌種，經(jīng)固體發(fā)酵后，濃縮、干燥獲得的產(chǎn)品。強(qiáng)制性標(biāo)識(shí)要求有粗蛋白質(zhì)、粗灰分、水分、甘露聚糖。

圖1 Venn圖

酵母提取物也稱為酵母水解物，是采用自溶、酶解、分離、濃縮等現(xiàn)代生物技術(shù)，將酵母細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等進(jìn)行降解后精制而成的一種棕黃色可溶性膏狀或淺黃色粉狀純天然制品。主要成分為多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族維生素及微量元素。酵母提取物（酵母水解物）是酵母通過質(zhì)壁分離后利用自身水解酶系完全自溶后，去除細(xì)胞壁和不溶性分子后的產(chǎn)品。

酵母細(xì)胞壁是以釀酒酵母為原料，經(jīng)特異性酸、酶解處理，獲得的綠色營(yíng)養(yǎng)性產(chǎn)品。酵母細(xì)胞壁主要成分是葡聚糖、甘露寡糖、糖蛋白和幾丁質(zhì)。

其中，葡聚糖是主要由D-葡萄糖通過β-1,3/1,6鍵結(jié)合而成，這種特殊結(jié)構(gòu)，能激活巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞，提高動(dòng)物的抗病能力；甘露寡糖（簡(jiǎn)稱MOS）是酵母細(xì)胞壁另一重要的多糖成分，具有多種生物活性。甘露寡糖與眾多病原菌在動(dòng)物腸壁上定值的受體相似，能與病原菌結(jié)合，搶占結(jié)合位點(diǎn)，吸附并排除腸道病原菌。同時(shí)它也是一種很好的益生元，有效促進(jìn)有益菌的增殖，調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體微生物平衡。

圖2 BC距離群落非相似性分析

酵母類產(chǎn)品種類很多，其組成成分不盡相同，對(duì)其產(chǎn)品品質(zhì)產(chǎn)生影響的因素也有很多。首先，是酶解工藝。運(yùn)用不同的酶解工藝生產(chǎn)出來的酵母提取物（或水解物），品質(zhì)差異較顯著。其次，菌種不同。在相同的酶解工藝條件下，酵母菌種的不同會(huì)影響酵母提取物（或水解物）的產(chǎn)品品質(zhì)，從而表現(xiàn)出使用效果的不同。再者，應(yīng)用效果不同。酵母提取物（水解物）中具有誘食及腸道修復(fù)功能的成分，但是由于用于生產(chǎn)的菌種及酶解工藝的不同，其對(duì)生長(zhǎng)、免疫及腸道發(fā)育或修復(fù)的改善效果不同。

應(yīng)用方面，我們也做了很多的實(shí)驗(yàn)，其中兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果跟大家進(jìn)行分享。前期準(zhǔn)備，主要實(shí)驗(yàn)條件為初始重量1.86±0.02g，溫度25～28℃，鹽度27～29g/L，pH值為7.6～7.8，氨氮＜0.05mg/L，溶解氧＞6.0mg/L，養(yǎng)殖時(shí)間為 8 周。

第一個(gè)實(shí)驗(yàn)是關(guān)于高核苷酸酵母提取物對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、飼料利用、消化酶活力、非特異性免疫指標(biāo)和腸道微生物群落組成的影響。

在配方方面，還是考慮到成本，加入降低魚粉的設(shè)計(jì)理念。進(jìn)口魚粉17%，國(guó)產(chǎn)魚粉8%，酵母水解物添加比例分別為1%、3%和5%，以未添加酵母水解物為對(duì)照組。

在生長(zhǎng)性能方面，在飼料中添加5%酵母提取物組增重率和特定生長(zhǎng)率最高，各處理組間成活率沒有顯著性差異，但未添加組成活率在各處理組間最低。

在飼料利用方面，飼料系數(shù)1%組最高，飼料中添加5%酵母提取物組飼料系數(shù)顯著低于添加1%組，而蛋白質(zhì)效率顯著高于添加1%酵母提取物組。

在血清免疫酶活性方面，有酚氧化酶、一氧化氮合酶、溶菌酶三組，添加酵母提取物組對(duì)蝦血清酚氧化酶和溶菌酶活性的影響顯著，且5%處理組顯著高于其它各組。

在血清生化指標(biāo)方面，飼料中添加酵母提取物對(duì)對(duì)蝦總蛋白、葡萄糖和甘油三酯的含量以及丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性影響顯著。

在肝胰腺消化酶活性方面，飼料中添加酵母提取物對(duì)對(duì)蝦肝胰腺胰蛋白酶和脂肪酶活性的影響顯著，且5%組胰蛋白酶和脂肪酶活力最高。

還有，從皺襞高度、腸上皮高度、皺襞寬度、微絨毛高度對(duì)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)指標(biāo)進(jìn)行分析。以及，腸道微生物區(qū)系分析，從圖1Venn圖中可以看到各組間存在相同的OTU數(shù)量為279，從表2中可以直觀看到各組間α多樣性指數(shù)不存在顯著性差異。

從圖2中BC距離群落非相似性分析來看，Y3處理組BC距離顯著低于其它組，而究竟怎樣的群落比較好則需要我們深入關(guān)注這個(gè)指標(biāo)。這個(gè)指標(biāo)是初步的結(jié)果，還沒有深入的去做分析。群落非相似性低（群落相似性高），說明其微生物群落穩(wěn)定性最高。

表1 飼料配方

表2 腸道微生物區(qū)系分析

表3 飼料配方

腸道微生物區(qū)系分析顯示，變形菌門為對(duì)蝦腸道的優(yōu)勢(shì)菌，其次是擬桿菌，酵母提取物對(duì)對(duì)蝦腸道微生物群落組成產(chǎn)生顯著影響。

簡(jiǎn)單做個(gè)結(jié)論，飼料中添加酵母提取物能有效改善凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、提高飼料利用率、改善腸道健康以及提高機(jī)體非特異性免疫功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明添加5%酵母提取物時(shí), 可以顯著改善凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、飼料利用、肝胰腺消化酶活力、腸道健康和非特異性免疫指標(biāo)。

第一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束以后，結(jié)果非常好，我們做第二個(gè)實(shí)驗(yàn)，高核苷酸酵母水解物（YT500）對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、飼料利用、消化酶活力和非特異性免疫指標(biāo)的影響。第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中配方設(shè)計(jì)考慮到成本，降低魚粉含量。第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中的配方則做另一種設(shè)計(jì)，第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中魚粉含量一樣，添加劑含量更加細(xì)化，高核苷酸酵母水解物添加量從0、0.5、1一直到2。

而第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中，非常奇怪的一點(diǎn)，生長(zhǎng)性能中增重率結(jié)果顯示為各處理組間增重率和成活率無顯著性差異。第二個(gè)實(shí)驗(yàn)和第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中把成本降下來的結(jié)果和魚粉一樣的結(jié)果出現(xiàn)差異，對(duì)增重率沒有顯著的影響。

針對(duì)這一結(jié)果，我們也做了原因分析，把魚粉降低以后，添加高核苷酸酵母水解物，可能對(duì)生長(zhǎng)有所改善。反過來，魚粉和高核苷酸酵母水解物都用，增重效果可能會(huì)不明顯，包括成活率。

在肝體比和飼料系數(shù)方面，高核苷酸酵母水解物對(duì)肝體比和飼料系數(shù)影響顯著，飼料中添加1%組肝體比顯著高于對(duì)照組，而飼料系數(shù)顯著低于添加2%組。

在血清免疫酶活性指標(biāo)方面，高核苷酸酵母水解物對(duì)酚氧化酶、一氧化氮合酶和溶菌酶活性影響顯著，飼料中添加1%組酚氧化酶、一氧化氮合酶和溶菌酶活力最高。對(duì)比兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果，一氧化氮合酶在第二組實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生顯著影響，而在第一組實(shí)驗(yàn)中沒有。還要深入的分析一下，導(dǎo)致這個(gè)結(jié)果的原因，為什么有些酶有影響而有些酶沒有？包括像淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶就有一系列的影響。

在肝胰腺消化酶活性方面，高核苷酸酵母水解物添加水平對(duì)蝦肝胰腺消化酶活性影響不顯著，但飼料中1%添加組的淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性均高于其它各組。

而腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)指標(biāo)，包括皺襞高度、皺襞寬度、微絨毛高度，主要對(duì)高核苷酸酵母水解物水平對(duì)蝦腸道皺襞高度和微絨毛高度影響顯著，這與第一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是一致的；而皺襞寬度隨著添加量的增加而增高。

從目前實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，本實(shí)驗(yàn)中，在飼料中添加高核苷酸酵母水解物能改善凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能，降低飼料系數(shù)，促進(jìn)消化，維護(hù)腸道健康，增強(qiáng)免疫力。建議在實(shí)際生產(chǎn)中的添加量為5～10g/kg較為合適。

周歧存，1967年12月出生于安徽省舒城縣。寧波大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖及漁業(yè)資源專業(yè)博士生導(dǎo)師。研究方向?yàn)樗?jīng)濟(jì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理與飼料學(xué)。1990年畢業(yè)于中國(guó)海洋大學(xué)淡水漁業(yè)專業(yè)，獲農(nóng)學(xué)學(xué)士學(xué)位；1998年畢業(yè)于中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)，獲農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位；2005年畢業(yè)于中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院海洋生物學(xué)專業(yè)，獲理學(xué)博士學(xué)位。

多年來一直從事海水魚、甲殼類（對(duì)蝦和海水蟹）、貝類營(yíng)養(yǎng)生理與飼料開發(fā)等研究工作，為農(nóng)業(yè)部現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系“海水蟹營(yíng)養(yǎng)需求與飼料”崗位科學(xué)家。近年來主持國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目2項(xiàng)、參與國(guó)家自然科學(xué)基金、國(guó)家“863”項(xiàng)目、國(guó)家支撐計(jì)劃、國(guó)家（農(nóng)業(yè)部和海洋局）公益性行業(yè)專項(xiàng)等省部級(jí)課題20多項(xiàng)；獲省、部級(jí)科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)7項(xiàng)。在國(guó)內(nèi)外知名刊物發(fā)表學(xué)術(shù)論文90余篇，其中以第一作者或通訊作者發(fā)表SCI收錄論文40多篇，以第一完成人獲得國(guó)家授權(quán)發(fā)明專利10項(xiàng)，指導(dǎo)研究生獲得國(guó)家授權(quán)發(fā)明專利7項(xiàng)。是世界水產(chǎn)學(xué)會(huì)會(huì)員、中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)會(huì)員，中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料委員會(huì)委員，中國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)委員。并擔(dān)任國(guó)際刊物“Journal of the World Aquaculture Society”（SCI收錄期刊）副主編。