●王富考

熒光定量PCR法檢測乙肝DNA與酶聯(lián)法檢測乙肝五項的關(guān)系

●王富考

目的：臨床上常通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝五項指標和熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA來對乙肝患者進行診斷，探討這兩種方法的關(guān)系。方法：本研究以523例來我中心就診的乙肝患者為研究對象，對其進行乙肝五項檢測和乙肝病毒檢測，并根據(jù)乙肝五項指標將患者進行分組，同時分析聯(lián)合應(yīng)用乙肝五項和病毒DNA量進行診斷的關(guān)系。結(jié)果：根據(jù)乙肝五項指標結(jié)果可將患者分為6組，其中“大三陽”具有較高的病毒DNA陽性率和最高的DNA拷貝數(shù)（P＜0.05），另外HbeAg的出現(xiàn)伴隨著乙肝病毒的高檢出率。結(jié)論：對乙型肝炎的準確診斷需聯(lián)合應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測肝五項和熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA量。

乙肝五項；酶聯(lián)免疫吸附法；熒光定量PCR法

目前臨床上常用的乙型肝炎診斷方法是檢測乙肝五項指標，熒光定量PCR能檢測患者血清中乙肝病毒DNA拷貝數(shù)。將乙肝五項檢測與乙肝病毒DNA檢測聯(lián)合應(yīng)用于乙肝的診斷和篩查將大大減少誤診率。本文以523例乙肝患者為研究對象，探討了乙肝患者體內(nèi)的血清標志物與乙肝病毒DNA量之間的關(guān)系，并為臨床上聯(lián)合使用乙肝五項指標和乙肝病毒載量進行乙型肝炎診斷提供依據(jù)[1]。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選擇2014年3月至2016年9月在我中心確診的523例乙型肝炎患者，其中男性293例，女性230例，患者年齡介于22～67歲，平均為43.7歲。抽取病人空腹時的靜脈血2mL，分離血清后分成兩份冷凍保存，一份用于免疫吸附法檢測乙肝五項，一份用于熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA量。

1.2 研究方法

1.2.1 乙肝五項檢測

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測所有患者血清中的HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbsAb、HbcAb。嚴格按照廈門新創(chuàng)乙肝五項檢測試劑說明書進行檢測和結(jié)果評定。使用普朗9602G酶標儀進行檢測，并將病例分為6組。

1.2.2 乙肝病毒DNA測定

乙肝病毒DNA樣品送至艾迪康檢驗中心檢測。

1.3 統(tǒng)計學處理

病毒DNA拷貝數(shù)以mean±SD copies/mL表示，計數(shù)資料用百分比表示。用SPSS 19.0進行數(shù)據(jù)分析，采用t檢驗比較不同組之間的DNA拷貝數(shù)，用卡方檢驗比較不同組之間乙肝病毒陽性率，P＜0.05表示差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 乙肝五項檢測結(jié)果

根據(jù)532例乙肝患者血清樣本乙肝五項指標的檢測結(jié)果，可將樣本分為6組，結(jié)果見表1。

表1 523例患者血清樣本乙肝病毒DNA檢測結(jié)果

2.2 不同組之間結(jié)果的比較

從檢出率看，1和5組的乙肝病毒DNA陽性率要明顯高于其他組（P＜0.05）。臨床上將第1組的乙肝五項模式成為“大三陽”，同時第1組的DNA檢出濃度也要顯著高于其他組（P＜0.05）。臨床上將第2組稱為“小三陽”，從表1中得出“小三陽”組的乙肝病毒DNA檢出率要遠低于“大三陽“組，而平均檢出濃度與”大三陽“組處于同一數(shù)量級。第6組所有患者均未檢出乙肝病毒DNA。

3 討論

3.1 乙肝五項與乙肝病毒DNA的關(guān)系

此次研究中“大三陽”患者共255例，此類患者體內(nèi)還未產(chǎn)生病毒抗體，乙肝病毒處于快速復(fù)制階段，具有傳染性，對乙肝病毒DNA的結(jié)果也表明，此類患者血清中病毒DNA拷貝數(shù)也明顯高于其他組（P＜0.05）。此次研究中“小三陽”患者有169例，其中乙肝病毒陽性僅79例（46.7%），但在陽性患者中乙肝病毒的DNA濃度也處于較高水平，僅低于“大三陽”患者，“小三陽”中仍有部分患者檢測出乙肝病毒DNA可能是因為病毒發(fā)生變異而檢測不到HBeAg。根據(jù)乙肝五項指標，將本次研究的病例分為6組，其中第1、3、5組中HBeAg都為陽性，且都具有較高的乙肝病毒DNA檢出率，表明HBeAg陽性結(jié)果提示乙肝病毒復(fù)制活躍，具有強傳染性。第4、6組中HBsAg為陽性，而HBSAb、HBeAg、HBeAb為陰性，表明患者為乙肝病毒攜帶者，或患者處于恢復(fù)期，病毒活力弱，處于較低水平[2]。這兩組的乙肝病毒DNA陽性率也較低，第6組未檢出病毒DNA，而在第4組中乙肝病毒DNA也處于較低水平，所以血清中未檢出病毒DNA并不代表體內(nèi)沒有乙肝病毒，此時需結(jié)合乙肝五項結(jié)果進行綜合判斷。

3.2 酶聯(lián)免疫與熒光定量PCR的聯(lián)合應(yīng)用

酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝五項指標的優(yōu)點是簡單、快捷、廉價、特異性好。但乙肝五項指標并不能真實的反應(yīng)病毒在體內(nèi)的復(fù)制情況。熒光定量PCR法檢測病毒DNA的優(yōu)點是靈敏度高、特異性好、能及時準確反應(yīng)病毒復(fù)制水平。熒光定量PCR法檢測費用較酶聯(lián)免疫法高，當病毒處于低水平復(fù)制時，也不能準確檢測出病毒的存在。所以臨床上將兩種方法結(jié)合起來對乙肝患者進行診斷是必然的趨勢。

4 結(jié)論

臨床上常用的乙肝診斷方法包括酶聯(lián)免疫吸附法和熒光定量PCR法，此兩種方法各有優(yōu)缺點，臨床上常將兩種方法聯(lián)合應(yīng)用于乙肝的診斷和抗病毒藥物的療效評價。本研究結(jié)果表明對乙肝患者的準確診斷和真實反映病毒在患者體內(nèi)的情況需要綜合參考乙肝五項指標和乙肝病毒DNA量[3]，所以將酶聯(lián)免疫吸附法和熒光定量PCR法聯(lián)合應(yīng)用于乙型肝炎的診斷值得進一步推廣。

（作者單位：甘谷縣疾病預(yù)防控制中心）

[1]尚小云.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝血清標志物相關(guān)性分析[J].中國保健營養(yǎng),2014(4):1836.

[2]石伍華,王海清,許艾明等.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝五項指標相關(guān)性分析[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2009,8(1):87-88.

[3]黃靜.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學檢測的探討[J].醫(yī)學檢驗,2013,3(6):110-112.