.云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，云南 曲靖 655000；.云南健測檢驗(yàn)檢測技術(shù)有限公司，云南 曲靖 655000

消炎利喉口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

呂艷1李莉美1張瑤2袁建平1
1.云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，云南 曲靖 655000；2.云南健測檢驗(yàn)檢測技術(shù)有限公司，云南 曲靖 655000

目的建立消炎利喉口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用TLC法定性鑒別玄參、金蕎麥，HPLC法對黃芩苷含有量進(jìn)行測定。結(jié)果玄參、金蕎麥分離度良好，斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾。黃芩苷在0.208～1.248μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998)，平均加樣回收率為99.47%，RSD為0.43%。結(jié)論該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，可用于消炎利喉口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

消炎利喉口服液；薄層色譜；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

消炎利喉口服液是云南省曲靖市第一人民醫(yī)院院內(nèi)自制純中藥制劑，處方源自我院名中醫(yī)20多年臨床驗(yàn)方，主要由金蕎麥、玄參、黃芩、忍冬藤、臭靈丹等10味中藥組成，具有養(yǎng)陰、清咽、清熱消炎解毒的功效，主要用于急性扁桃體炎、咽峽炎，上呼吸道感染引起的咽喉腫痛。其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較簡單，僅有金蕎麥的薄層鑒別。為提升特色中藥制劑品牌，更全面、有效地控制該制劑的質(zhì)量，提升其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，建立了玄參、金蕎麥的TLC定性鑒別方法，并采用HPLC法測定消炎利喉口服液中黃芩苷的含量，以期全面有效地控制消炎利喉口服液制劑的質(zhì)量[1]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 1260型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)；分析天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司)；R2003KE旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)；DZF9240型干燥箱(上海一恒科技有限公司)；pH計(jì)(梅特勒-托利多國際股份有限公司)。

1.2 材料 玄參對照藥材(批號：121008-201007)、金蕎麥對照藥材(批號：121114-201403)、黃芩苷對照品(批號：110715-201016)均購自中國藥品生物制品檢定所。色譜純乙腈、甲醇均購自美國Merck公司；其余化學(xué)試劑均為分析純。

消炎利喉口服液(批號：20151129、20160117、20160516)和陰性樣品，均由曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別[2-3]

2.1.1 玄參鑒別[2]取本品10mL，加乙酸乙酯振搖提取2次，每次10mL，棄取乙酸乙酯液，再用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次10mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使之溶解，作為供試品溶液。同時制備不含玄參的陰性制劑，同法制成陰性對照溶液。另取玄參對照藥材1g，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(13:2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸乙醇試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖1所示。

2.1.2 金蕎麥鑒別[2]取本品15mL，加甲醇20mL，放置1h，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液濃縮至5mL，作為供試品溶液。同時制備不含金蕎麥的陰性制劑，同法制成陰性對照溶液。另取金蕎麥對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取表兒茶素對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～10μL、對照藥材溶液和對照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(1∶2∶0.2∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以25%磷鉬酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜色譜和對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖2所示。

2.2 黃芩苷的含量測定[4-5]

2.2.1 溶液的制備

2.2.1.1 對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

2.2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取本品0.2mL，置10mL量瓶中，加甲醇35mL，超聲處理(功率135W，頻率59kHz)20min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.1.3 陰性樣品溶液的制備 按照工藝制備消炎利喉口服液陰性樣品(缺黃芩)，按照“2.2.1.2”項(xiàng)下配制陰性樣品溶液。

2.2.2 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：Zorbax C18 (4.6mm×150mm，5μm)；流動相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；柱溫：30℃；檢測波長：280nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL。

2.2.3 線性關(guān)系考察 精密量取濃度為260μg/mL的黃芩苷對照品溶液適量，加甲醇制成濃度分別為20.8、41.6、62.4、83.2、104.0、124.8μg/mL的對照品溶液，分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，以峰面積對黃芩苷的進(jìn)樣質(zhì)量(μg)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y=3479X-37.46，r=0.9998。結(jié)果表明，在0.208～1.248μg范圍，峰面積與黃芩苷進(jìn)樣質(zhì)量呈良好的線性關(guān)系。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 在“2.2.2”項(xiàng)色譜條件下，精密吸取對照品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，RSD為0.08%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.2.1.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下測定峰面積，峰面積RSD為1.2%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，在“2.2.1.2”項(xiàng)色譜條件下0、2、4、8、16、24進(jìn)樣，測定峰面積，峰面積RSD為2.3%，結(jié)果表明在24h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.2.7 專屬性試驗(yàn) 將黃芩苷對照品、供試品溶液和陰性樣品溶液按“2.2.2”項(xiàng)下條件下分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，黃芩苷的保留時間為8.65min左右，高效液相色譜圖顯示在黃芩苷峰位處，陰性樣品中無雜質(zhì)干擾，方法專屬性良好。如圖3所示。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取0.1mL消炎利喉口服液樣品(20160516，濃度2.674 mg/mL)9份置于10mL容量瓶中，作為低、中、高水平組分別加入濃度為96.78μg/ mL的黃芩苷對照品2.0、3.0、4.0mL，每個濃度3份，按照“2.2.1.2”項(xiàng)下操作，依次定容、搖勻、濾過，進(jìn)樣測試，記錄色譜圖，計(jì)算黃芩苷各濃度水平的加樣回收率。結(jié)果表明，平均加樣回收率為99.47%，RSD為0.43 %，加樣回收率符合要求。見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=9)

2.2.3 樣品測定 按照上述驗(yàn)證的方法，取不同批次的消炎利喉口服液測定黃芩苷的含量，3批樣品中黃芩苷的含量分別為2.677、2.663、2.674mg/mL。按照3批樣品計(jì)算，以均值的80%作為含量下限，每1mL消炎利喉口服液中含黃芩苷不少于2.14mg。

3 討論

3.1 玄參和金蕎麥TLC法鑒別 消炎利喉口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升是在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，根據(jù)本院的配制的實(shí)際情況而形成的。在制定玄參和金蕎麥TLC方法時，發(fā)現(xiàn)由于本品為水煎煮液，成分復(fù)雜，通過文獻(xiàn)查閱[6-9]并結(jié)合2015版《中國藥典》，選擇合適的提取方法及展開劑，得到的色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對照無干擾，方法專屬性較強(qiáng)。

3.2 增加黃芩苷含量測定的意義 依據(jù)《中國藥典》2015版要求，對中藥制劑需進(jìn)行定量分析，從院內(nèi)制劑研究開發(fā)及發(fā)展的角度，須提升院內(nèi)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[10]。研究針對處方中另一味臣藥黃芩建立其指標(biāo)性成分黃芩苷的含量測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)采用所建立的方法，對3個不同批次消炎利喉口服液中黃芩苷的含量進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)各批次差異不明顯，表明該工藝比較穩(wěn)定，質(zhì)量控制方法可行。

研究為消炎利喉口服液建立了有效成分含量測定方法，并且增加了玄參的薄層色譜鑒別，進(jìn)一步完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，這對指導(dǎo)該制劑今后的生產(chǎn)、質(zhì)量控制以及產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性提高具有重要意義。

[1]周躍華.中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中常見問題淺析[J].中成藥，2004，26(11)：972-975.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[3]賀云杰，趙晨，李妍，等.參附強(qiáng)心丸中人參、大黃、桑白皮的薄層色譜鑒別及烏頭堿限度檢查[J].世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009，11(3)：468-471.

[4]仕海濤.扶正化積合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，12(6)：91-95.

[5]魏良兵，吳溪，杜紅芳，等.枳殼健胃顆粒的質(zhì)量控制研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2013，20(1)：54-56.

[6]李樹梅，李應(yīng)超，張發(fā)明，等．烏梅酸棗仁口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．時珍國醫(yī)國藥，2010，21(12):3101-3104．

[7]李軍.氣管炎合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，17(3)：43-45.

[8]吳承云，鄭清明，周亞莉，等.試論中藥制劑規(guī)格標(biāo)示的合理性及規(guī)范性[J].中國藥事，2012，26(1)：47-49.

[9]王佳波，左志如．婦科止帶片藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究[J]．黑龍江醫(yī)藥，2009，22(4):464-466.

[10]李哲，常暖，李黎.中藥院內(nèi)制劑政策歷史、現(xiàn)狀及對策[J].中國中醫(yī)藥圖書情報(bào)雜志，2014，38(1)：38-41.

QualityStandardStudyonXiaoyanLihouOralLiquid

LV Yan1LI Limei1ZHANG Yao2YUAN Jianping1

1.The First People's Hospital of Qujing,Qujing 655000,China;2.Yunnan Jian Technology Co., Ltd. measuring inspection,Qujing 655000,China

ObjectiveTo establish quality standards for the Xiaoyan Lihou oral liquid.MethodsIt was used TLC for identification of Scrophulariaceae and Fago, HPLC method for the determination of baicalin conten.ResultsTLC of Scrophulariaceae and Fago had a good specialization and there was no interference when compared with the negative. The linear ranges of Baicalin were 0.208 ～ 1.248μg (r=0.9998), respectively. The average recovery rate was 99.47% andRSDwas 0.43%, respectively.ConclusionThe method is rapid, accurate, sensitive and can be used for the quality control of Xiaoyan Lihou oral liquid.

Xiaoyan Lihou Oral Liquid; TCL; HPLC; Quality Standards

R284

A

1007-8517(2017)17-0015-03

2017-07-31 編輯：陶希睿)

呂艷(1977-)，本科，主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┓治黾百|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：67430552@qq.com