王瓏 ，吳霞 ，謝愛華 ，盧志勇 ，朱良 ，劉敏

(1、瑞金市婦幼保健院檢驗科，江西 瑞金 342500；2、浦東新區(qū)曹路鎮(zhèn)社區(qū)醫(yī)院，上海 201209；3、瑞金市中醫(yī)院檢驗科，江西瑞金342500)

贛南地區(qū)1452例女性宮頸重度炎癥和TCT陽性患者人乳頭瘤病毒（HPV）感染型別分析探討

王瓏1，吳霞2，謝愛華3，盧志勇1，朱良1，劉敏1

(1、瑞金市婦幼保健院檢驗科，江西 瑞金 342500；2、浦東新區(qū)曹路鎮(zhèn)社區(qū)醫(yī)院，上海 201209；3、瑞金市中醫(yī)院檢驗科，江西瑞金342500)

目的 探討核酸分子快速導流雜交基因芯片分型技術(shù)（HybriMax）在人乳頭瘤病毒HPV感染分型檢測中的應用，了解贛南地區(qū)女性人乳頭瘤病毒(HPV)型別的感染狀況，為HPV高危型疫苗的研制提供參考。方法 挑選重度炎癥和非典型鱗狀細胞（ASCUS）以上的患者1452例女性作為做HPV基因分型檢測的研究對象，同時做陰道鏡檢查和進行宮頸組織病理檢查處理。結(jié)果 在1452例女性中HPV感染646例，感染率為44.5%。HPV陽性患者中主要為單一高危型感染261例，占HPV總陽性標本陽性率40.4%（261/646），占總標本數(shù)陽性率17.98%（261/1452）。HPV陽性患者中單獨低危型感染75例，占HPV總陽性標本陽性率11.6%(75/646)，占總標本數(shù)陽性率5.2%（75/1452）。高危與低危復合感染70例，占總陽性標本陽性率10.84%(70/646)，占總標本數(shù)陽性率4.82%（70/1452）。HPV高危型陽性患者491例，占總陽性標本陽性率76.0%(491/646)，占總標本數(shù)陽性率33.82%（491/1452）。HPV低危型陽性患者感染155例，占總陽性標本陽性率24.0%(155/646)，占總標本數(shù)陽性率10.67%（155/1452）。贛南女性HPV感染主要為HPV16、52、58、39、53型。結(jié)論 贛南地區(qū)婦女宮頸感染HPV的主要類型是HPV16、52、58，可為我國HPV分型疫苗的研制提供參考。

高危型HPV16、52、58感染；人乳頭瘤病毒HPV；HPV基因分型；贛南地區(qū)女性

宮頸癌目前仍然是危害全球女性的第二大惡性腫瘤。人乳頭瘤病毒(HPV)感染被認為是患宮頸癌的重要因素，99.70%宮頸癌患者曾感染過1種或多種HPV。在已發(fā)現(xiàn)的150多種HPV中約40種能引起生殖道感染，至少有20種與腫瘤發(fā)生有關(guān)[1]。高危型HPV感染，易導致高度宮頸病變，且從高度宮頸病變到癌變一般需要10年左右的時間[2]。為了解贛南地區(qū)女性HPV感染情況，本研究用核酸分子快速導流雜交基因芯片分型技術(shù)（Hybri-Max），對在我院就診的1452例女性HPV分型檢測資料進行回顧分析。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取ASCUS以上做HPV的1452例女性為研究對象 （本院全部HPV標本送江西華星醫(yī)學檢驗中心檢測報告結(jié)果），對其宮頸脫落細胞進行細胞學檢查（TCT）和HPV基因檢測，同時進行宮頸組織病理檢查。

1.2 方法

1.2.1 標本采集暴露宮頸，將采樣刷置于宮頸口順時針旋轉(zhuǎn)5圈，取出宮頸刷，置于加有細胞保存液的采樣瓶中，折斷刷頭，密閉送檢。

1.2.2 試劑和儀器DNA提取試劑盒（凱普生物化學有限公司提供），HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀和HPV擴增分型檢測試劑盒 （凱普生物化學有限公司提供），ABI7300基因擴增儀 （伯樂公司，美國）。

1.2.3 實驗方法采用HybriMax技術(shù)檢測21種HPV亞型，基本原理是先將標本中HPV病毒基因的DNA進行基因擴增，然后利用核酸分子快速導流雜交技術(shù)，使目的分子導流穿過固定有DNA探針的低密度基因芯片薄膜上，而發(fā)生快速雜交。HPV基因檢測實驗步驟：樣本HPV DNA提取，PCR擴增，核酸分子快速導流雜交，結(jié)果判斷，按芯片上HPV亞型分布的相應著色點判斷。21種HPV分為高危型和低危型兩類[3]，高危型（high-risk types，HR-HPV）15 種，包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68， 低危型 （lowrisktypes，LR-HPV）6種HPV6、11、42、43、44、CP8304，患者兩型為雙重感染，患者3型以上屬多型感染。

1.2.4 宮頸細胞學TCT檢測采用湖北泰康醫(yī)療設備有限公司提供設備：微電腦控制的TKY-B6B液基薄層細胞自動片機，使用帶攝像的顯微鏡（OLYMPUS，CX31）觀察標本染片，液基細胞學的診斷采用TBS(theBethesdasystem，TBS)診斷標準報告檢測結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學分析對HPV陽性率及各高危型別陽性率進行統(tǒng)計，采用SPSS 20.0軟件分析數(shù)據(jù)，卡方檢驗χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染情況及年齡分布1452例女性中HPV感染646例，感染率為44.5%。HPV陽性患者中主要為單一高危型感染261例，占HPV總陽性標本陽性率40.4%（261/646），占總標本數(shù)陽性率17.98%（261/1452）。HPV陽性患者中單獨低危型感染75例，占HPV總陽性標本陽性率11.6%(75/646)，占總標本數(shù)陽性率 5.2%（75/1452）。高危與低危復合感染70例，占總陽性標本陽性率 （%）10.84%(70/646)，占總標本數(shù)陽性率（%）4.82%（70/1452）。HPV高危型陽性患者感染491例，占總陽性標本陽性率76.0%(491/646)，占總標本數(shù)陽性率33.82%（491/1452）。HPV低危型陽性患者感染155例，占總陽性標本陽性率24.0%(155/646)，占總標本數(shù)陽性率10.67%（155/1452）。見表1。

表1 1452例標本HPV總陽性率及高危、低危、復合型HPV的陽性率

2.2 HPV感染型別分布 1452例女性中HPV感染646例，感染率為44.5%。其中：HPV高危型別感染總計491例(76%)：單一高危型感染261例40.4%，雙重高危型感染117例(18.11%)，多重高危型感染114例 (17.65%)，HPV檢出率在前面5位的是16、52、58、39、33型。 HPV 低危型別感染總計 155例(24%)：單一低危型感染75例(11.61%)，雙重低危型感染36例(5.6%)，多重低危型感染44例(6.8%)；HPV檢出率在前面3位的是CP8304、6、11型。43型未檢測出單一感染型，42型未檢測出雙重感染型。其中檢測出一例HPV多重感染最多型包括8型之多罕見特例： 高危型有 4 種（52、56、58、59），低危型有（11、42、44、cp8304）4 種，現(xiàn)已治愈。 見表2。

表2 1452例女性21種HPV感染情況[n（%）]

3 討論

目前研究發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒的感染（HPV），尤其是高危型HPV的感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[4]。絕大部分的CIN和宮頸癌中均可檢測出HPV高危型別，高危型HPV與癌前病變相關(guān)已成共識。流行病學調(diào)查[4]顯示，世界范圍內(nèi)女性HPV感染主要型為16、18、31、58和52， 而在不同地區(qū)主要型別比例存在一定的差異，在歐美地區(qū)HPV16、18與宮頸癌發(fā)生最為密切，也是疫苗研制的主要目標型別，但在亞洲某些地區(qū)[5]宮頸癌患者中卻以HPV52、58最為流行，提示在該地區(qū)HPV疫苗應包括這些型別。HPV在我國普通女性中的感染率為15.71%，全國范圍內(nèi)前6位常見高危型HPV分布依次為：HPV-16、52、58、33、18、31 型。 HPV-16型是我國最常見的感染型別，HPV的感染率及高危型別分布在我國不同地區(qū)及不同人群中有一定差異，HPV-16、52、58型是中國特有的優(yōu)勢感染型別[1]。本研究中 21種 HPV檢出率最高的是HPV16，其次是 HPV52、58 和 39、33。 但在歐美人群分布的HPV型別第二位是HPV18。值得注意的是，本研究檢測出1例HPV多重感染最多型包括8型之多的罕見特例：高危型有4種（52、56、58、59），低危型有（11、42、44、cp8304）4 種，楊曉華[5]等認為多重感危險更大，更易導致宮頸病變。南部地區(qū)HPV型別最多有18種，也是少數(shù)民族最多的省份地區(qū)。由此推測我國女性人群中HPV型別與歐美女性人群不同，HPV型別具有地域特性。

高危型HPV持續(xù)感染與宮頸病變及宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，且是否合并感染對宮頸疾病治療的預后及評估有重要意義[6]。在宮頸疾病治療前有必要了解HPV感染狀況及基因型別，這有利于宮頸癌的預防、疫苗的研制和接種，以及宮頸疾病患者術(shù)后管理[7]。HPV感染普遍存在，只有少部分感染者會發(fā)生CIN，而CIN中也只有部分患者將進展為宮頸癌。利用宮頸細胞TCT檢測、HPV型別檢測、細胞DNA分析系統(tǒng)，可早期發(fā)現(xiàn)婦女宮頸細胞核DNA的變化，有條件的醫(yī)院可盡快應用于婦科和保健門診，以便早期篩查宮頸病變高風險人群。本研究選取ASCUS以上做HPV的1452例女性中HPV高危型陽性患者感染491例，占總陽性標本陽性率76.0%(491/646)，占總標本數(shù)陽性率33.82%（491/1452）。HPV低危型陽性患者感染155例，占總陽性標本陽性率24.0%(155/646)，占總標本數(shù)陽性率10.67%（155/1452）；HPV檢出率在前面3位的是CP8304、6、11型；43型未檢測出單一感染型，42型未檢測出雙重感染型。在多重感染構(gòu)成比中，女性由HPV16、58、52高危亞型組成的雙重感染或形成混合型感染為主要形式[8]。HPV多重感染對宮頸病變及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起促進作用，結(jié)果與Fife KH[9]等的研究結(jié)果一致。持續(xù)高危型HPV感染是CIN進一步進展為宮頸癌的必須過程[10]。當多種型別的HPV感染同時存在時，致癌危險增高，當 HPV6，11，16，18 均呈陽性時，其相對危險最高[11]。

本研究顯示，贛南地區(qū)1452例女性宮頸重度炎癥和TCT陽性患者人乳頭瘤病毒（HPV）感染型別分析，具有結(jié)果直觀、判斷準確的優(yōu)點，與組織病理學診斷有較高的符合率。我們認為，單獨低危型的人群可以按照婦科一般炎癥治療對待，而有多重感染特別是其中有一個是高危型HPV感染的患者，應注意治療時間和定期復查，防止向早期宮頸病變和宮頸癌的方向發(fā)展。贛南地區(qū)所處是客家人居住地，HPV16、52、58型為高發(fā)型，可能有地域、環(huán)境溫度、民族生活習慣有一定關(guān)系。研發(fā)機構(gòu)應聯(lián)合衛(wèi)生相關(guān)機構(gòu)，組織全國各省份婦女保健醫(yī)療部門針對婦女HPV檢測成立：二級防疫，三級治療的防疫治療機構(gòu)，面對婦女HPV感染實際情況，積極收集相關(guān)臨床資料提高宮頸癌和宮頸癌前病變篩查的工作效能；特別是針對高危型別HPV陽性者應做好定期檢測和隨訪工作，掌握人群中HPV感染狀況及基因型別分布特點，為宮頸疾病和宮頸癌的篩查防治及HPV疫苗研制，以便為決策者和研發(fā)機構(gòu)提供科學依據(jù)。

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2016-12-06；

2017-06-16)