易曉榕，桂曉美

(1、南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330006；2、江西省人民醫(yī)院檢驗科，江西 南昌 330006)

肝素結(jié)合蛋白用于診斷膿毒血癥的研究

易曉榕1，桂曉美2

(1、南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330006；2、江西省人民醫(yī)院檢驗科，江西 南昌 330006)

目的比較肝素結(jié)合蛋白（HBP）與其它標志物，如降鈣素原、C反應(yīng)蛋白、白細胞計數(shù)反應(yīng)膿毒血癥的情況，以判斷肝素結(jié)合蛋白是否可作為膿毒血癥的診斷標志物，并且評價肝素結(jié)合蛋白的診斷效果。方法 收集白細胞計數(shù)異?；虬l(fā)熱的病人血樣，同時收集各項檢測指標均在正常范圍內(nèi)的病人血清，根據(jù)各組的納入指標，膿毒血癥組33例，感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組27例，對照組30例，檢測血樣中肝素結(jié)合蛋白，并分別統(tǒng)計靈敏度、特異度。結(jié)果 膿毒血癥組的HBP平均值高于感染但不滿足膿毒血癥標準組和對照組，且肝素結(jié)合蛋白診斷膿毒血癥的靈敏度和特異度均優(yōu)于降鈣素原、C反應(yīng)蛋白以及白細胞計數(shù)。結(jié)論 肝素結(jié)合蛋白可作為膿毒血癥的診斷標志物。

肝素結(jié)合蛋白；降鈣素原；C反應(yīng)蛋白；白細胞計數(shù)；膿毒血癥

如今每年有百萬新增的膿毒血癥患者，其中1/4的患者死亡，嚴重影響人類身心健康。膿毒血癥是指明確或可疑的感染引起的炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS），可發(fā)展為嚴重膿毒癥和膿毒性休克[1]。若是臨床醫(yī)生能夠在疾病早期做出診斷，則可以極大地減少病人的死亡率[2]。

肝素結(jié)合蛋白（HBP），又被稱為azurocidin或者CAP37，是在1984年由Shafer等人發(fā)現(xiàn)并分離出來的一種中性粒細胞源性的顆粒性糖蛋白。它的分子量為37kDa，帶有正電荷，存在于人類中性粒細胞所分泌的分泌泡和嗜苯胺藍顆粒中。HBP是包含222個氨基酸的單鏈蛋白，含有8個半胱氨酸殘基，在第100、114或145位天冬氨酸殘基上具有糖基化位點[3]。研究表明HBP對于診斷膿毒血癥有著重要的意義[4]，膿毒性病人在發(fā)展成為循環(huán)衰竭前，HBP的含量升高[5]，表明HBP對于膿毒血癥的病情檢測也有著重要的作用。HBP有多種功能，如趨化作用、激活單核細胞和巨噬細胞等[5]。機體受到細菌感染后，發(fā)生一系列的應(yīng)答反應(yīng)，釋放炎性調(diào)節(jié)物質(zhì)如IL-6等[6]，在這過程中多形核中性粒細胞也釋放HBP[7]到細胞外發(fā)揮作用。

1 對象與方法

1.1 標本來源2016年6月-2016年7月，于江西省人民醫(yī)院查詢白細胞計數(shù)異?；虬l(fā)熱的病人信息，若發(fā)現(xiàn)降鈣素原（PCT）或C反應(yīng)蛋白（CRP）檢測值也有異常，則將這些病人的血樣納入到研究中；若是這兩項檢測指標均正常，可先將WBC異常的病人血樣先貯存起來，隔3d查詢這些病人的信息，若PCT或CRP異常，則納入到研究中中，樣本于-70℃的冰箱內(nèi)凍存。

1.2 分組將納入的樣本分為三組，分別是膿毒血癥組、感染但不滿足膿毒血癥標準組、對照組[8]。它們的納入標準分別是：⑴膿毒血癥組[1]：明確感染或可疑，并具備以下至少兩條臨床特點①發(fā)熱（T＞38℃）或低體溫（T＜36℃），②心率（R）＞90 次/min，③WBC 計數(shù)＞12×109/L 或 WBC 計數(shù)＜4×109/L，④氣促，即呼吸頻率＞20次/分，⑤低血壓＜90mmHg或成人低血壓下降超過40mmHg。其中，膿毒血癥組可根據(jù)是否有膿毒血癥所致的低血壓收縮壓＜90mmHg，或成人收縮壓下降超過40mmHg，或乳酸是否大于正常值（＞1mmol/L）分為嚴重膿毒血癥組和普通膿毒血癥組[1，8]。⑵感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組：感染但不具備以上任何一項臨床特點。⑶對照組：WBC、PCT、CRP均在正常值范圍內(nèi)的體檢病人血樣，排除腫瘤、糖尿病和近期感染患者。病人信息見表1。

表1 90例病人信息

1.3 材料方法用AXIS-SHIED公司的肝素結(jié)合蛋白試劑盒，采用ELISA法檢測肝素結(jié)合蛋白（HBP）；用上海貝西生物科技有限公司的降鈣素原試劑盒，用固相層析法檢測降鈣素原（PCT）的含量；用Beckman特種蛋白測定儀，用免疫比濁法檢測 C-反應(yīng)蛋白（CRP）；采用 Sysmex 2100血球儀檢測白細胞（WBC）。

1.4 樣本處理以EDTA為抗凝劑，離心后吸取血漿轉(zhuǎn)移到0.5m l的EP管中，于-70℃的冰箱貯存，以待檢測。

1.5 HBP檢測參照試劑盒說明書檢測每份血樣中的HBP含量，按照說明書要求加入質(zhì)控品和標準品，同待測樣本一起檢測。

1.6 數(shù)據(jù)處理17.0 SPSS軟件可用于統(tǒng)計計算相關(guān)參數(shù)，并可以繪制ROC曲線，以95%為可信區(qū)間（CI）。以平均數(shù)、標準差以及變化范圍表示結(jié)果。采用單因素方差分析AN0VA、t檢驗方法進行分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05表示無統(tǒng)計學(xué)意義。用交叉表法計算靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。

2 結(jié)果

2.1 樣本檢測結(jié)果比較

2.1.1 HBP、PCT、CRP與 WBC檢測結(jié)果比較膿毒血癥患者的HBP平均值為104.61±22.36ng/ml，感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組HBP平均值為83.90±20.20ng/ml，對照組 HBP平均值為 11.77±0.45ng/ml。嚴重膿毒血癥組HBP含量的平均值為141.49ng/ml，而普通膿毒血癥組含量的均值為83.04ng/ml。膿毒血癥組PCT濃度的平均值為0.97±0.39ng/ml，感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組PCT濃度的平均值為1.63±1.08ng/ml，對照組PCT濃度的平均值為 0.046±0.009ng/ml，。膿毒血癥組CRP濃度的平均值為49.06±8.41ng/ml，感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組CRP濃度的平均值為22.84±5.58ng/ml，對照組 CRP濃度的平均值為5.34±1.73ng/ml。膿毒血癥組WBC平均值為（8.9±0.81）×109/L，感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組WBC 平均值為（6.76±0.69）×109/L，對照組 WBC 平均值為(7.33±0.75）×109/L。 HBP、PCT、CRP、WBC 的比較見表2。

表2 HBP、PCT、CRP及WBC均值比較

2.1.2 膿毒血癥組中血培養(yǎng)陽性與陰性樣本檢測值比較其中膿毒血癥組中的血培養(yǎng)陽性樣本與血培養(yǎng)陰性樣本的HBP均值比較見表3，血培養(yǎng)陽性患者的HBP平均值高于血培養(yǎng)為陰性的患者。

表3 膿毒血癥組血培養(yǎng)陽性與血培養(yǎng)陰性的比較

2.2 靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值的比較經(jīng)計算得出，HBP的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均優(yōu)于 PCT、CRP、WBC(P=0.03)，見表4。根據(jù)測定結(jié)果繪制了ROC曲線，ROC曲線見圖 1。 HBP 曲線下面積（AUC）為 0.67，置信區(qū)間（CI）為（0.56，0.78）；PCT的AUC為0.56，CI 為（0.42，0.69）；CRP 的 AUC 為 0.57，CI為（0.45，0.69）；WBC 的 AUC 為 0.42，CI為（0.29.0.55）。

表4 膿毒血癥各篩查方法的診斷效果評價

圖1 ROC曲線

3 討論

感染性疾病是困擾人類健康的一大難題，其中膿毒血癥是導(dǎo)致人類死亡的主要原因之一。膿毒血癥進展過程中會逐漸損傷病人的組織器官，組織器官輕度衰竭的病人，生存時間比組織器官嚴重衰竭的病人要長[9，10]。膿毒血癥可發(fā)展為膿毒性休克，并導(dǎo)致死亡，這將極大地降低人類生活質(zhì)量，增加了疾病的死亡率[2]，形成膿毒血癥的重要步驟是血管滲漏以及形成水腫[11]。

HBP可以通過與毛細血管內(nèi)皮細胞作用，使Ca2+內(nèi)流，細胞骨架改變，誘導(dǎo)血管滲漏[12]。HBP最先用于重癥監(jiān)護膿毒血癥患者中[13]，隨著研究發(fā)現(xiàn)HBP還可用于其它急癥的檢測中，且效果良好，如急性腎盂腎炎[14]、急性細菌感染性腦膜炎[15]。若是機體其它系統(tǒng)發(fā)生感染，也可通過檢測HBP發(fā)現(xiàn)，如呼吸系統(tǒng)[16，17]、泌尿系統(tǒng)感染[18，19]等。 且有研究表明，HBP不僅用于診斷細菌性感染的疾病，還可用于診斷病毒感染導(dǎo)致的疾病，如H1N1流感病毒[20]。

根據(jù)表2可得出，膿毒血癥組的HBP平均值高于感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組和對照組，其中嚴重膿毒血癥組HBP含量的平均值為141.49ng/ml，而普通膿毒血癥組含量的均值為83.04ng/ml，這一實驗結(jié)果與一些實驗結(jié)果不一致[21]，查閱病人信息發(fā)現(xiàn)，4例服用了抗生素。PCT的含量通常在發(fā)生嚴重感染時才會大幅度地升高，而一般情況下，PCT的變化幅度不大。服用了抗生素，這些病人的PCT值顯著減小，甚至低于PCT的Cut-off值，使得這些膿毒血癥組病人的PCT值較感染感染但不滿足膿毒血癥診斷標準組的PCT值低。膿毒血癥組中有6例的HPB遠遠高于其它膿毒血癥患者，雖然有4位膿毒血癥患者服用了抗生素，可HBP的均值仍高于感染感染但不滿足膿毒血癥診斷標準患者。而C反應(yīng)蛋白是急性時相反應(yīng)蛋白，當機體受到損傷或感染時可大幅度上升，故它的變化同HBP一致。由表3得出血培養(yǎng)陽性患者的HBP平均值高于血培養(yǎng)陰性的患者，表明發(fā)生感染時，病原體可刺激機體釋放HBP，使得HBP升高，且HBP在人體里的含量會隨著病情的嚴重程度而逐步升高。

由表4可以得出HBP的靈敏度、特異度均高于PCT、CRP和WBC，且ROC曲線表明HBP曲線下面積大于PCT、CRP和WBC，表明HBP對膿毒血癥的篩查效果優(yōu)于PCT、CRP和WBC。CRP的靈敏度雖高，但特異度較低；PCT的特異度較好，但靈敏度不高[22]；WBC雖然在疾病初期最先反映機體異常[23]，但它是一項非特異性的診斷指標。HBP融合了它們的優(yōu)點，能更準確地反應(yīng)病人是否感染了膿毒血癥。雖然臨床上通常以血培養(yǎng)陽性為診斷膿毒血癥的金標準，但血培養(yǎng)所需時間較長且假陽性、假陰性的發(fā)生率較高，而敗血癥的病情進展迅速[24]，與之相比，肝素結(jié)合蛋白的診斷效率更快，提示HBP可以作為診斷膿毒血癥的良好的診斷指標。

本次試驗中，有27例感染了革蘭陰性菌，主要是肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、鏈球菌；15例感染了革蘭陽性菌，以金黃色葡萄球菌為主。經(jīng)統(tǒng)計，有11例為ICU患者，眾所周知上述細菌都是醫(yī)院感染的重要病原菌，故長期住院的患者應(yīng)注意避免發(fā)生獲得性感染。

本次試驗雖然證明了HBP可作為膿毒血癥的診斷指標，但本次試驗的樣本量太小，且患者平均年齡偏大，大多在50歲以上，且標本凍存時間較長，這些都有可能對試驗結(jié)果造成影響。

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The study of Heparin-Binding Protein Being Used in Diagnosing Sepsis

YIxiaorong1，GUIxiaomei2.
1.Medical school of Nanchang University，Nanchang 330006，China；2.Clinical laboratory of JiangxiProvincial people’s Hospital，Nanchang 330006，China.

Objective Comparing heparin-binding protein with other markers，such as procalcitonin，C-reaction protein and leukocyte count to evaluate the sepsis status，to judge whether the heparin-binding protein can be as diagnostic marker in sepsis，and estimate the diagnosis effect of heparin-binding protein.M ethods The blood specimens of patients diagnosed with abnormal leukocyte count or fever and normal controlswith normal laboratory index were enrolled.There were 33 patients in sepsis group，27 patientswith infection but non-sepsis，30 normal controls.Heparin-binding protein was detected and calculated its sensitivity and specificity.Results The average value of Heparin-binding protein in sepsiswas higher than patientswith infection but nonsepsis and normal group.And the sensitivity and specificity of heparin-binding protein was higher than procalcitonin，C-reaction protein and leukocyte count.Conclusion Heparin-binding protein could be as a diagnosticmarker for sepsis patients.

Heparin-binding protein；Procalcitonin；C-reaction protein；Leukocyte count；Sepsis

R446.62，R631

A

1674-1129(2017)05-0654-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.006

易曉榕，女，1993年生，醫(yī)學(xué)學(xué)士學(xué)位，臨床檢驗診斷學(xué)。

桂曉美，女，1963年生，主任技師，臨床檢驗診斷學(xué)，研究方向：老年疾病及代謝性疾病的生化檢測。

2017-03-28；

2017-08-05)