潘紅

【摘要】 目的 探討盆腔淋巴結人類乳頭瘤病毒基因（HPV-DNA）檢出率與早期宮頸癌臨床轉移的關系。方法 對62例宮頸癌患者原發(fā)部位腫瘤組織和盆腔淋巴結組織的HPV-DNA區(qū)基因序列進行測定， 同時分析其陽性率與早期宮頸癌轉移之間的關系。結果 62例盆腔淋巴結當中的HPV-DNA檢出率為51.6%（32/62）， 26例淋巴結轉移的組織當中HPV-DNA檢出率為84.6%（22/26）， 36例檢查沒有淋巴結轉移的盆腔淋巴結HPV-DNA檢出率為27.8%（10/36）， 有無淋巴結轉移患者盆腔淋巴結HPV-DNA檢出率比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。另外， 陽性淋巴結當中的閉孔、髂外以及髂內的淋巴結占90%以上。結論 盆腔淋巴結的HPV-DNA檢出陽性屬于一個具有重要意義的淋巴結轉移預測因子， 其中最為關鍵的前哨淋巴結包括有閉孔、髂外以及髂內的淋巴結。

【關鍵詞】 盆腔淋巴結；HPV-DNA；早期宮頸癌；臨床轉移

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.017

根據研究表明[1]， 盆腔淋巴結轉移是影響宮頸癌患者預后的主要原因之一， 是正確指導手術以后輔助治療和判斷預后的重要依據。HPV感染與宮頸癌的發(fā)病有密切關系。檢測宮頸癌患者盆腔淋巴結當中的HPV-DNA是否能夠幫助淋巴結早期隱匿轉移還存在一定的爭議， 為此進行相關研究報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年8月～2016年8月在本院進行手術治療的宮頸癌患者62例， 年齡28～59歲， 平均年齡（44.6±3.1）歲。

1. 2 方法 ①石蠟包埋組織當中總DNA的提取刮取組織3～4片， 放置在1.5 ml Eppendorf管當中， 加入二甲苯1 ml脫蠟， 震蕩搖晃均勻， 在37℃恒溫水浴30 min， 以12000 r/min離心5 min， 將上層溶液去除， 可以反復1～2次。密切觀察沒有石蠟殘留以后加入無水乙醇1 ml進行清洗， 渦旋搖晃均勻， 以12000 r/min離心5 min， 去除上清液， 反復1次， 干燥組織。按照說明書提取總DNA。②目的基因片段聚合酶鏈反應（GP-PCR）擴增提取的組織DNA作為模板， 采取GP5+、GP6+給予HPV-DNA L1區(qū)基因序列的PCR擴增。反應體系為20 μl。反應設陽性和陰性的空白對照， 陽性模板為Hela細胞株提取的DNA。③瓊脂糖凝膠電泳選取5μl PCR擴增產物給予1.5%瓊脂糖凝膠電泳， 其成像分析系統(tǒng)觀察， 同時進行對照， 以140～150 bp部位發(fā)生明顯條帶作為陽性結果[2]。④PCR產物的純化根據其說明書的方法進行操作， 純化的DNA立即應用或者保存在零下20℃作為備用。⑤序列測定采取引物GP5+、GP6+將純化的PCR產物在DNA序列自動分析儀上進行測序。

1. 3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件進行數據統(tǒng)計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

62例盆腔淋巴結當中的HPV-DNA檢出率為51.6%

（32/62）， 26例淋巴結轉移的組織當中HPV-DNA檢出率為84.6%（22/26）， 36例檢查沒有淋巴結轉移的盆腔淋巴結HPV-DNA檢出率為27.8%（10/36）， 有無淋巴結轉移患者盆腔淋巴結HPV-DNA檢出率比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。另外， 陽性淋巴結當中的閉孔、髂外以及髂內的淋巴結占90%以上。

3 討論

根據研究表明[3]， 宮頸癌早期患者的手術后生存率與淋巴結轉移情況、腫瘤類型、體積、子宮旁邊浸潤程度、深度以及臨床主治醫(yī)師的操作水平等有密切關系， 當中淋巴結轉移非常關鍵。對比5年的生存率， 盆腔淋巴結轉移呈現陰性的患者能夠達到85%以上， 然而如果區(qū)域出現淋巴結轉移， 則會呈現下降趨勢[4]。然而在實踐中發(fā)現一些臨床分期相對比較早和組織學沒有淋巴結一個切面， 而無法發(fā)現的微小病灶[5]。目前， 對一系列實體瘤的研究當中微轉移的檢出率與患者預后有直接關系。宮頸癌在整個發(fā)展期間HPV-DNA整合進入到宿主細胞DNA， 進而能夠充分發(fā)揮致癌的作用[6]。隨著腫瘤的進一步擴散， 整合到宿主細胞當中的HPV-DNA片斷在轉移病灶中也可以檢測出來。所以， 可以通過HPV-DNA對淋巴結微轉移進行診斷， 可以為制定手術后的輔助治療提供重要依據， 使預后得到明顯改善。淋巴結中的HPV-DNA與轉移分布情況也大致相同。淋巴結轉移主要伴有HPV-DNA呈現陽性、陰道切緣浸潤以及宮體侵犯， 因此， 可以表明其陽性與轉移具有密切的關系[7]。根據研究表明[8]， 組織病理學沒有癌轉移的淋巴結當中檢查出來HPV-DNA的存在顯示沒有可以發(fā)現的腫瘤擴散。然而組織病理學檢查呈現陰性的淋巴結當中的HPV-DNA陽性檢出率有密切關系如下[9]：組織病理學沒有能夠及時的發(fā)現微轉移， 經過淋巴道通過擴散的游離HPV病毒顆粒以及免疫活性細胞吞噬消化的微轉移灶。所以， 也有部分相關研究人員認為其無法當作有效判斷復發(fā)的預測因子， 根據研究表明， 組織病理學檢查呈現陰性的淋巴結HPV-DNA的檢出率在10%以上[10]。對宮頸癌原發(fā)部位的腫瘤以及淋巴結的HPV-DNA檢測全部呈現陽性的患者。常規(guī)清掃術經常給宮頸癌患者帶來一系列并發(fā)癥?，F如今， 利用確定前哨淋巴結， 對其清掃范圍給予一定的限制， 可降低手術所帶來的創(chuàng)傷。根據研究表明， 前哨淋巴結大部分包括閉孔、髂外以及髂內。

綜上所述， 盆腔淋巴結的HPV-DNA檢出陽性屬于一個具有重要意義的淋巴結轉移預測因子， 其中最為關鍵的前哨淋巴結包括有閉孔、髂外以及髂內的淋巴結。

參考文獻

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[收稿日期：2017-06-02]endprint