王 超，秦子芳，譚曉妍，胡 靜，寧慧娟，苗雨欣，張秀清

（1.無限極（中國）有限公司，廣東廣州 529156；2.中國農業(yè)大學，北京 100083）

引種杭白菊有效成分含量的分析比較

王 超1，秦子芳2，譚曉妍2，胡 靜2，寧慧娟2，苗雨欣2，*張秀清2

（1.無限極（中國）有限公司，廣東廣州 529156；2.中國農業(yè)大學，北京 100083）

以杭白菊中總糖、黃酮類物質、綠原酸、木犀草苷4種有效成分含量為指標，比較江蘇引種杭白菊與原產地浙江桐鄉(xiāng)杭白菊的品質差異。采用苯酚硫酸法測定總糖含量，以紫外可見分光光度法測定黃酮類物質的含量，并通過高效液相色譜法測定綠原酸和木犀草苷的含量。結果表明，桐鄉(xiāng)杭白菊引種江蘇后，4種有效成分的含量均有所增高；與江蘇本地杭白菊相比，除總糖含量外，黃酮類物質、綠原酸、木犀草苷的含量較高。由此可知，杭白菊引種江蘇有益于杭白菊品質的提高。

杭白菊；引種；總糖；黃酮；綠原酸；木犀草苷

Abstract：Taking the total sugar，flavonoid，chlorogenic acid，luteolin-7-O-glucoside in Chrysanthemum morifolium Ramat as index to compare the quality of species from original habitats Zhejiang Tongxiang.Total sugar content in Chrysanthemum morifolium Ramat is measured by phehol-vitril.The content of flavonoids is analyzed by UV-Vis spectrophotometry.Chlorogenic acid and luteolin-7-O-glucoside is measured by high performance liquid chromatography（HPLC） .The results indicate that the content of four effective components increased after Chrysanthemum morifolium Ramat in Tongxiang introduced to Jiangsu.The content of flavonoids，chlorogenic acid and luteolin-7-O-glucoside are higher in Chrysanthemum morifolium Ramat introduced Jiangsu than Jiangsu native，but the content of total sugar is lower.Therefore，The introduction of Chrysanthemum morifolium Ramat is beneficial to the quality improvement.

Key words：Chrysanthemum morifolium Ramat；introduction；total sugar；flavonoid；chlorogenic acid；luteolin-7-O-glucoside

0 引言

菊花是菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的干燥頭狀花序，具有散風清熱、平肝明目、清熱解毒的功效，可用于治療風熱感冒、頭痛眩暈等癥狀[1]。杭白菊性辛、甘、苦、微寒，歸肺、肝經，具有保肝的功效[2]。杭白菊茶作為一種功能性飲品，以其草本茶的獨特性，在許多地方都很受歡迎[3]。杭白菊中含有多糖、黃酮類、綠原酸、木犀草苷等多種有效成分[4]，從菊花中提取出的糖類物質不僅可以提高免疫力[5]，并且能夠增加機體的抗氧化能力[6]；杭白菊黃酮類成分具有抗氧化、抗炎、降壓、抗病毒等作用[7]，同時能夠起到鎮(zhèn)靜的作用[8]；木犀草苷是黃酮類化合物中的一種，能夠起到抗癌[9]和保護心血管[10]等作用；綠原酸作為藥典中菊花品質標準中的一項檢測內容，具有抗菌、抗腫瘤、降血壓、抗癌等多種藥理活性[11]。

試驗研究的杭白菊樣品屬于小洋菊品種，小洋菊苗期植株直立，后期自然生長呈半匍匐狀，小洋菊葉為綠色、較淡、葉片較小，葉面似有略微的皺折，葉裂多且淺[12]。據付炳華等人[13]的研究，浙江桐鄉(xiāng)杭白菊引種昆明后，在植株高度、生長習性、開花等方面均表現(xiàn)出固有特性，而且黃酮含量有顯著增加。這表明杭白菊的引種有利于其中有效成分的積累，可以進一步提高杭白菊的品質，旨在研究桐鄉(xiāng)杭白菊引種江蘇后有效成分含量的變化情況。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

供試樣品①為種植于浙江省桐鄉(xiāng)市翔厚村種植基地的小洋菊；供試樣品②為種植于江蘇省宿遷市泗洪縣種植基地的小洋菊；供試樣品③為浙江桐鄉(xiāng)杭白菊品種引種江蘇省宿遷市泗洪縣基地種植2年的小洋菊。

Agilent 1200型系列高效液相色譜儀、TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計、TG 16-WS型臺式高速離心機、KQ3200DE型數控超聲波清洗器。

1.2 試驗方法

1.2.1 總糖含量的測定

（1）標準曲線的繪制。精確稱取無水葡萄糖對照品1.000 g，用蒸餾水溶解并定容至100 mL，配制成0.1 g/L的葡萄糖溶液；取出1 mL該溶液于100 mL容量瓶定容，配制成0.1 mg/mL的葡萄糖標準液；移取 0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL 葡萄糖標準液，至20 mL具塞試管中，加蒸餾水至2 mL；向各試管中分別加入6%苯酚1 mL和濃硫酸5 mL；靜置10 min后，振蕩混勻；靜置20 min，使反應液完全冷卻后，用紫外可見分光光度計于波長490 nm處測吸光度；以葡萄糖含量為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制葡萄糖標準曲線。

（2） 總糖含量的測定。稱取0.5 g粉碎過60目篩的各樣品，精確到0.001 g，置于50 mL具塞離心管內。用5 mL水浸潤樣品，緩慢加入20 mL無水乙醇，同時使用渦旋振蕩器振搖，使之混合；將樣品置于超聲提取器中，在超聲功率150 W條件下提取30 min；提取結束后，以轉速8 000 r/min離心20 min，棄去上清液，將不溶物用10 mL 80%的乙醇洗滌再次離心，用50 mL蒸餾水將不溶物轉移至圓底燒瓶，于沸水浴中提取2 h；冷卻至室溫，過濾后將上清液移至100 mL容量瓶中；洗滌殘渣2～3次，用蒸餾水定容。

1.2.2 黃酮類物質的測定

（1） 標準曲線的繪制。精確稱取蘆丁標準品10.000 mg，溶解于甲醇中，容量瓶定容至10 mL，得蘆丁標準溶液質量濃度為1.0 mg/mL；用微量移液槍吸取蘆丁標準品溶液0，50，100，200，300，400 μL于10 mL的具塞試管中，加5%的NaNO20.3 mL搖勻；放置6 min后，加10%的Al（NO3）30.3 mL搖勻；放置6 min，再加4 mL 4%的NaOH搖勻；最后用甲醇定容，放置10 min后，于波長510 nm處測吸光度得到黃酮類物質的標準曲線。

（2）黃酮類物質含量的測定。準確稱取各樣品粉末0.250 g置于50 mL的離心管中，加入甲醇25 mL，超聲處理（150 W）80 min后，進行離心（8 000 r/min，10 min）；將離心之后的液體進行抽濾，取濾液用甲醇定容至50 mL，取上清液0.4 mL于10 mL的具塞試管中；參照1.2.2（1）中繪制標曲的方法，測得樣品（每1個樣品做3個平行）中黃酮的含量。

1.2.3 綠原酸和木犀草苷含量的測定

（1） 色譜條件。色譜柱：Eclipse XDB-C18型（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.1%磷酸溶液-乙腈進行梯度洗脫，乙腈在流動相中的質量分數為0～11 min、10%～18%，11～30 min、18%～20%，30～40 min，20%；流速1.0 mL/min；檢測波長328 nm；柱溫30℃；進樣量20 μL。

（2）標準曲線的繪制。分別稱取綠原酸和木犀草苷的標準品5.000 mg，置于25 mL容量瓶中，用色譜級甲醇定容，混勻，即得到200 μg/mL的標準溶液；用針管移取溶液經0.45 μm的有機濾膜過濾，之后上樣，進行高效液相色譜分析；再用移液槍移取200 μg/mL的標準溶液1 mL，用1 mL的甲醇稀釋至100 μg/mL；按照同樣的方法依次進行稀釋，得到 50.0，25.0，10.0，5.0，2.5 μg/mL 的標準溶液，對7個梯度的樣品依次進行色譜分析，最終得到標準曲線。

（3）綠原酸和木犀草苷含量的測定。準確稱取各樣品粉末0.250 g置于50 mL離心管中，加入甲醇25 mL，超聲處理（150 W） 80 min后，進行離心（8 000 r/min，10 min）；將離心之后的液體進行抽濾，取濾液用甲醇定容至50 mL；取定容后的溶液進行色譜分析，根據標準曲線，得到樣品中含量。

2 結果與分析

2.1 江蘇引種杭白菊中總糖含量的測定

不同產地杭白菊中總糖類物質含量的比較見圖1。

圖1 不同產地杭白菊中總糖類物質含量的比較

由圖1可知，3個產地杭白菊中總糖含量由高到低依次為江蘇本地杭白菊、江蘇引種杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊，江蘇本地杭白菊與江蘇引種杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊中所測定的總糖含量間都存在顯著性差異（p＜0.05）。對于杭白菊的總糖含量來說，3個不同產地之間的差別比較明顯。張紅瑞等人[14]研究了江蘇引種杭白菊在多糖含量方面存在的差異，表明了引種后的杭白菊多糖含量有顯著增加。因此，從總糖含量分析，杭白菊引種江蘇之后總糖的積累有顯著增加。

2.2 江蘇引種杭白菊中黃酮含量的測定

不同產地杭白菊中黃酮類物質含量的比較見圖2。

圖2 不同產地杭白菊中黃酮類物質含量的比較

由圖2可知，3個產地杭白菊中黃酮類物質含量由高到低依次為江蘇引種杭白菊、江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊，江蘇引種杭白菊與江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭菊中所測定的黃酮類物質含量間有顯著性差異（p＜0.05）。即對于杭白菊的黃酮類物質含量來說，3個不同產地之間的差別比較明顯。胡碧波等人[15]的研究結果表明，產地對杭白菊中黃酮類物質的積累有很大影響。因此，從黃酮類物質含量分析，杭白菊引種江蘇種植后黃酮類物質的積累有顯著增加。

2.3 江蘇引種杭白菊中綠原酸含量的測定

不同產地杭白菊中綠原酸含量的比較見圖3。

圖3 不同產地杭白菊中綠原酸含量的比較

由圖3可知，3個產地杭白菊中綠原酸含量由高到低依次為江蘇引種杭白菊、江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊。江蘇引種杭白菊與江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭菊中所測定的總糖含量間有顯著性差異（p＜0.05）；然而，桐鄉(xiāng)杭白菊與江蘇本地杭白菊之間的綠原酸含量的差異不顯著（p＞0.05）。顧瑤華等人[16]的研究結果表明了幾個不同產地杭白菊中的綠原酸含量差別較大，說明產地對其含量有一定影響。因此，從綠原酸的含量分析，杭白菊引種江蘇后綠原酸的積累有顯著增加。

2.4 江蘇引種杭白菊中木犀草苷含量的測定

不同產地杭白菊中木犀草苷含量的比較見圖4。

圖4 不同產地杭白菊中木犀草苷含量的比較

由圖4可知，3個產地杭白菊中木犀草苷含量由高到低依次為江蘇引種杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊、江蘇本地杭白菊。江蘇引種杭白菊與桐鄉(xiāng)杭白菊中所測定的木犀草苷含量間無顯著性差異（p＞0.05），江蘇引種杭白菊與江蘇本地杭白菊之間的木犀草苷含量存在顯著性差異（p＜0.05），桐鄉(xiāng)杭白菊與江蘇本地杭白菊的木犀草苷含量存在顯著性差異（p＜0.05）。結果表明，引種江蘇種植有利于杭白菊中木犀草苷的積累。

3 結論

杭白菊作為我國傳統(tǒng)的中藥材，種植地對藥材品質的保證起著重要作用。植物在不同的生長環(huán)境中，其有效成分含量不同，了解其在不同的生長環(huán)境中，能夠為其引種起到指導作用。

分析了桐鄉(xiāng)杭白菊、江蘇引種杭白菊、江蘇本地杭白菊中的4種有效成分含量，結果表明桐鄉(xiāng)杭白菊引種江蘇后，總糖、黃酮類物質、綠原酸和木犀草苷含量均有明顯提高；與江蘇本地杭白菊相比，黃酮類物質、綠原酸和木犀草苷含量也有所增高。研究結果表明，引種江蘇種植有利于杭白菊中有效成分的積累，為杭白菊的生產提供了理論基礎。試驗研究的對象僅為引種2年生的杭白菊樣品，引種杭白菊的植株形態(tài)與其中的有效成分含量是否會受到引種種植時間的影響，還需要進一步的研究。

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Comparative Study on the Content of Effective Components of Chrysanthemum morifolium Ramat Introduced in Jiangsu

WANG Chao1，QIN Zifang2，TAN Xiaoyan2，HU Jing2，NING Huijuan2，MIAO Yuxin2，*ZHANG Xiuqing2
（1.Infinitus（China） Company Ltd，Guangzhou，Guangdong 529156，China；2.China Agricultural University，Beijing 100083，China）

TS20

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.09.035

1671-9646（2017） 09b-0029-03

2017-07-03

國家自然科學基金項目（21576142）；中國農業(yè)大學基本科研業(yè)務費專項資金項目（2017SP001）。

王 超（1991— ），男，碩士，研究方向為功能性食品及食品生物技術。

*通訊作者：張秀清（1976— ），女，博士，副教授，研究方向為食品生物技術。