樊星+陳紅+高雪峰+趙鵬+董貴成

摘 要：γ-氨基丁酸（GABA）會對溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的混合液有專一性的顯色反應(yīng)。顯色劑溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的最適濃度分別為0.5 mg/mL、6mg/mL和4mg/mL，比例為1∶1∶1。測定GABA最適條件4mL樣品溶液，加入2mL顯色劑，混勻，在618nm測定吸光度。

中圖分類號：TB 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A doi：10.19311/j.cnki.16723198.2017.27.093

γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyric Acid，GABA）是一種非蛋白質(zhì)的天然氨基酸。由谷氨酸（Glu）經(jīng)谷氨酸脫梭酶（GAD）催化而來，是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。GABA有鎮(zhèn)靜安神、增強(qiáng)記憶、抗曬老、調(diào)節(jié)食欲、改善脂質(zhì)代謝等生理功能，在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域有重要作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

GABA：源葉生物；溴甲酚綠：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；乙醛酸：薩思化學(xué)技術(shù)有限公司；琥珀酸：天津市福晨化學(xué)試劑廠；L-谷氨酸鈉：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

紫外可見分光光度計(jì)TU-1800：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 顯色劑的配制

配置0.5 mg/mL溴甲酚綠、6mg/mL乙醛酸、4mg/mL琥珀酸，并以比例1∶1∶1混勻。

1.2.2 最適波長的檢測

吸取4mg/mLGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻。在紫外可見分光光度計(jì)檢測最適波長。

1.2.3 顯色條件的影響

（1）溴甲酚綠濃度的影響。

分別配置 0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mg/mL的溴甲酚綠溶液，與6mg/mL乙醛酸溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合為顯色劑。4mg/LGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻，618nm處測定吸光度。

（2）乙醛酸濃度的影響。

分別配置2、4、6、8、10mg/mL的乙醛酸溶液，與05mg/mL溴甲酚綠溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合為顯色劑。4mg/LGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻，618nm處測定吸光度。

（3）琥珀酸濃度的影響。

分別配置2、4、6、8、10mg/mL的琥珀酸溶液，與05mg/mL溴甲酚綠溶液，4mg/mL乙醛酸溶液以1：1：1的比例混合為顯色劑。4g/LGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻，618nm處測定吸光度。

1.2.4 繪制GABA標(biāo)準(zhǔn)曲線

配置0.5、1、2、3、4g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，顯色劑為0.5 mg/mL溴甲酚綠、6mg/mL乙醛酸和4mg/mL琥珀酸以1∶1∶1的比例混合。吸取各濃度GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，與2mL顯色劑混合均勻，在618nm處測吸光度。

1.2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

2.5mg/mLGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，以1.2.4的方法進(jìn)行操作，測定吸光值。

1.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

5mL 1g/L和4g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液分別加入5mL 2.5g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，以1.2.4的方法操作，重復(fù)測定3次吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 波長的選擇

經(jīng)紫外可見光分度計(jì)測定，溶液在618nm處有最大吸收峰。

2.2 溴甲酚綠濃度的影響

如圖1所示，隨著顯色劑中溴甲酚綠濃度增加，吸光度呈線性增加。溴甲酚綠與乙醛酸、琥珀酸共同作用，才會對GABA有專一性顯色反應(yīng)。若溴甲酚綠濃度過高，會對其作用有影響。而且，吸光度數(shù)值越大，誤差越大。最后，溴甲酚綠濃度選用0.5mg/mL。

2.3 乙醛酸濃度的影響

如圖2所示，隨著顯色劑中乙醛酸濃度增加，反應(yīng)液吸光度呈下降趨勢。降低乙醛酸濃度，會提高反應(yīng)液的吸光度，但過低的乙醛酸濃度，會對其與溴甲酚綠、琥珀酸的共同顯色反應(yīng)有影響。最后，乙醛酸濃度選用0.6mg/mL。

2.4 琥珀酸濃度的影響

如圖3所示，琥珀酸濃度在4mg/mL時，反應(yīng)液吸光度有峰值，并且吸光度處在合理范圍內(nèi)，誤差不會太大。所以，琥珀酸濃度選用0.4mg/mL。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

經(jīng)過分析，GABA標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y = 02493x - 0.0208，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.996，相關(guān)系數(shù)大于099，此方程可用。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

吸取2.5g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，在618nm處重復(fù)測定6次吸光度，6次吸光度分別為0.560，0.551，0.556，0.563，0.556，0.550。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.90%，RSD小于5%，本方法有良好的重現(xiàn)性。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

如表1所示，平均回收率為97.09%，平均RSD為 4.08%，說明本方法準(zhǔn)確率較好。

3 結(jié)論

GABA會對溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的混合液有專一性的顯色反應(yīng)在618nm處有最大吸收峰。顯色劑溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的最適濃度分別為0.5 mg/mL、6mg/mL和4mg/mL，比例為1∶1∶1。測定GABA最適條件4mL樣品溶液，加入2mL顯色劑。標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y = 0.2493x - 0.0208，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.996。精密度試驗(yàn)RSD為0.90%，平均回收率為97.09%。

參考文獻(xiàn)

[1]楊藻衰. 藥理學(xué)和藥物治療學(xué)（上冊） [J]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2000，487503.

[2]翁旭初，匡培梓，陳雙雙. γ-氨基丁酸系統(tǒng)與記憶：行為藥理學(xué)研究進(jìn)展[J]. 心理學(xué)動態(tài)， 1996，1922.

[3]林親錄，王婿，陳海軍. γ-氨基丁酸的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代食品科技， 2008，124（5）：496500.

[4]王姣姣，白衛(wèi)東，梁彬霞. γ-氨基丁酸的生理功能及富集的研究進(jìn)展[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工， 2012，268（1）：4145.

[5]Tadashi O， Tomoko S. Effect of the Defatted Rice Germ Enriched with GABA for Sleepness， Depression， Autonomic Discorder by Oral Administration[J]. Nippon Shokuhin Kagaku Kogaku Kaishi， 2000，47（8）：596603.