樊星+陳紅+高雪峰+趙鵬+董貴成

摘 要：γ-氨基丁酸（GABA）會(huì)對(duì)溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的混合液有專一性的顯色反應(yīng)。顯色劑溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的最適濃度分別為0.5 mg/mL、6mg/mL和4mg/mL，比例為1∶1∶1。測(cè)定GABA最適條件4mL樣品溶液，加入2mL顯色劑，混勻，在618nm測(cè)定吸光度。

中圖分類號(hào)：TB 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A doi：10.19311/j.cnki.16723198.2017.27.093

γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyric Acid，GABA）是一種非蛋白質(zhì)的天然氨基酸。由谷氨酸（Glu）經(jīng)谷氨酸脫梭酶（GAD）催化而來(lái)，是哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。GABA有鎮(zhèn)靜安神、增強(qiáng)記憶、抗曬老、調(diào)節(jié)食欲、改善脂質(zhì)代謝等生理功能，在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域有重要作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

GABA：源葉生物；溴甲酚綠：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；乙醛酸：薩思化學(xué)技術(shù)有限公司；琥珀酸：天津市福晨化學(xué)試劑廠；L-谷氨酸鈉：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)TU-1800：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 顯色劑的配制

配置0.5 mg/mL溴甲酚綠、6mg/mL乙醛酸、4mg/mL琥珀酸，并以比例1∶1∶1混勻。

1.2.2 最適波長(zhǎng)的檢測(cè)

吸取4mg/mLGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻。在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)最適波長(zhǎng)。

1.2.3 顯色條件的影響

（1）溴甲酚綠濃度的影響。

分別配置 0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mg/mL的溴甲酚綠溶液，與6mg/mL乙醛酸溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合為顯色劑。4mg/LGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻，618nm處測(cè)定吸光度。

（2）乙醛酸濃度的影響。

分別配置2、4、6、8、10mg/mL的乙醛酸溶液，與05mg/mL溴甲酚綠溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合為顯色劑。4mg/LGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻，618nm處測(cè)定吸光度。

（3）琥珀酸濃度的影響。

分別配置2、4、6、8、10mg/mL的琥珀酸溶液，與05mg/mL溴甲酚綠溶液，4mg/mL乙醛酸溶液以1：1：1的比例混合為顯色劑。4g/LGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，加入2mL顯色劑，混勻，618nm處測(cè)定吸光度。

1.2.4 繪制GABA標(biāo)準(zhǔn)曲線

配置0.5、1、2、3、4g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，顯色劑為0.5 mg/mL溴甲酚綠、6mg/mL乙醛酸和4mg/mL琥珀酸以1∶1∶1的比例混合。吸取各濃度GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液4mL，與2mL顯色劑混合均勻，在618nm處測(cè)吸光度。

1.2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

2.5mg/mLGABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，以1.2.4的方法進(jìn)行操作，測(cè)定吸光值。

1.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

5mL 1g/L和4g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液分別加入5mL 2.5g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，以1.2.4的方法操作，重復(fù)測(cè)定3次吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 波長(zhǎng)的選擇

經(jīng)紫外可見(jiàn)光分度計(jì)測(cè)定，溶液在618nm處有最大吸收峰。

2.2 溴甲酚綠濃度的影響

如圖1所示，隨著顯色劑中溴甲酚綠濃度增加，吸光度呈線性增加。溴甲酚綠與乙醛酸、琥珀酸共同作用，才會(huì)對(duì)GABA有專一性顯色反應(yīng)。若溴甲酚綠濃度過(guò)高，會(huì)對(duì)其作用有影響。而且，吸光度數(shù)值越大，誤差越大。最后，溴甲酚綠濃度選用0.5mg/mL。

2.3 乙醛酸濃度的影響

如圖2所示，隨著顯色劑中乙醛酸濃度增加，反應(yīng)液吸光度呈下降趨勢(shì)。降低乙醛酸濃度，會(huì)提高反應(yīng)液的吸光度，但過(guò)低的乙醛酸濃度，會(huì)對(duì)其與溴甲酚綠、琥珀酸的共同顯色反應(yīng)有影響。最后，乙醛酸濃度選用0.6mg/mL。

2.4 琥珀酸濃度的影響

如圖3所示，琥珀酸濃度在4mg/mL時(shí)，反應(yīng)液吸光度有峰值，并且吸光度處在合理范圍內(nèi)，誤差不會(huì)太大。所以，琥珀酸濃度選用0.4mg/mL。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

經(jīng)過(guò)分析，GABA標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y = 02493x - 0.0208，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.996，相關(guān)系數(shù)大于099，此方程可用。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

吸取2.5g/L的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，在618nm處重復(fù)測(cè)定6次吸光度，6次吸光度分別為0.560，0.551，0.556，0.563，0.556，0.550。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.90%，RSD小于5%，本方法有良好的重現(xiàn)性。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

如表1所示，平均回收率為97.09%，平均RSD為 4.08%，說(shuō)明本方法準(zhǔn)確率較好。

3 結(jié)論

GABA會(huì)對(duì)溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的混合液有專一性的顯色反應(yīng)在618nm處有最大吸收峰。顯色劑溴甲酚綠、乙醛酸和琥珀酸的最適濃度分別為0.5 mg/mL、6mg/mL和4mg/mL，比例為1∶1∶1。測(cè)定GABA最適條件4mL樣品溶液，加入2mL顯色劑。標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y = 0.2493x - 0.0208，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.996。精密度試驗(yàn)RSD為0.90%，平均回收率為97.09%。

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