徐 妍，劉細平，潘 靜，東 琴，高敬雨，劉潤峰

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26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑高效液相色譜分析

徐 妍1，劉細平2，潘 靜1，東 琴1，高敬雨1，劉潤峰1

(1.北京明德立達農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 102206；2.江西威敵生物科技有限公司，江西南昌 331700)

建立高效液相色譜法同時測定26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑中有效成分的分析方法。采用ZORBAX SB C18反相柱和紫外可變波長檢測器，以乙腈-水為流動相(磷酸調(diào)制弱酸性液體)同時測定試樣中嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的含量。嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺標準偏差分別為0.16和0.21，變異系數(shù)分別為2.52%和1.03%，平均回收率分別為99.34%和99.51%。該方法操作簡便，分離效果好，精密度與準確度高，可同時快速測定嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺含量。

嘧菌環(huán)胺；啶酰菌胺；高效液相色譜法；分析

嘧菌環(huán)胺(cyprodinil)化學名稱為-(4-甲基-6-環(huán)丙基嘧啶-2-基)苯胺，是瑞士諾華(現(xiàn)先正達公司)開發(fā)的嘧啶胺類殺菌劑。其作用機理是抑制真菌水解酶分泌和蛋氨酸的生物合成，同三唑類、咪唑類、嗎啉類、二羧酸亞胺類、苯基吡咯類等無交互抗性。嘧菌環(huán)胺具有保護、治療、葉片穿透及根部內(nèi)吸活性。啶酰菌胺(boscalid)化學名稱2-氯--(4′-氯聯(lián)苯-2-基)煙酰胺，是BASF公司開發(fā)的新型煙酰胺類殺菌劑，其作用機理是線粒體呼吸鏈中琥珀酸輔酶Ｑ還原酶抑制劑，與其他殺菌劑無交互抗性。藥效試驗證明：將二者混合制成的26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑，保護性能好，持效期長，尤其是對葡萄、韭菜、辣椒、草莓、花卉等多種作物的灰霉病具有優(yōu)異的防效，同時對油菜、萵苣、馬鈴薯、辣椒、番茄、花生等作物的菌核病、早疫病、白粉病、炭疽病、葉霉病等均有很好的預防和治療效果，應用前景廣泛[1-5]。但有關(guān)嘧菌環(huán)胺?啶酰菌胺懸浮劑的高效液相色譜分析方法，目前尚未見公開報道。

該試驗使用ZORBAX SB C18柱和紫外可變波長檢測器，以乙腈-水(磷酸調(diào)制弱酸性液體)溶液為流動相，用外標法對有效成分進行分析和定量。該方法同時適用于嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)原藥及制劑的分析，具有簡便、快速、準確、分離效果好的特點，適用于產(chǎn)品生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀，具有紫外檢測器和自動進樣器；Agilent色譜工作站；島津UV-1800紫外可見分光光度計；乙腈為色譜純；水為新蒸二次蒸餾水；嘧菌環(huán)胺標樣(質(zhì)量分數(shù)98.0%)、啶酰菌胺標樣(質(zhì)量分數(shù)99.0%)，中國農(nóng)業(yè)大學理學院；26%嘧菌環(huán)胺?啶酰菌胺懸浮劑試樣。

1.2 色譜條件

Agilent ZORBAX SB C18不銹鋼柱：150 mm′4.6 mm(i.d.)；檢測波長210 nm；流動相：乙腈-水(0.05%磷酸水溶液，體積比55︰45)；流速1.0 mL/min；進樣量5 μL；柱溫25 ℃。嘧菌環(huán)胺的保留時間約為4.5 min，啶酰菌胺的保留時間約為7.1 min。典型液相色譜分離圖見圖1、2。

圖1 嘧菌環(huán)胺、啶酰菌胺標樣液相色譜圖

圖2 26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑液相色譜圖

1.3 分析步驟

1.3.1標樣溶液的配制

準確稱取嘧菌環(huán)胺標樣約0.006 g和啶酰菌胺標樣約0.020 g(精確至0.0002 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容，搖勻后備用。

1.3.2試樣溶液的配制

準確稱取試樣約0.1 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容，用0.22 μm有機濾膜過濾后備用。

1.3.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，計算各針相對響應值，直至相鄰2針嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的響應值相對變化小于1.2%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.3.4 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中的嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)峰面積分別進行平均。試樣中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的質(zhì)量分數(shù)(%)按下式計算：

式中：A為標樣溶液中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)峰面積平均值，A為試樣溶液中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)峰面積平均值，m為標樣溶液中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的質(zhì)量(g)，m為試樣的質(zhì)量(g)，為標樣中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的質(zhì)量分數(shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

對嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺標樣溶液分別進行紫外掃描，得到其相應的吸收波長與響應值的紫外吸收光譜圖。當選用210 nm作為檢測波長時，嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺均有較強吸收峰，同時雜質(zhì)響應值小，流動相無吸收。因此，為兼顧兩者均有較好的吸收，將檢測波長選為210 nm。

2.1.2 流動相的選擇

根據(jù)嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的特點，分別試用不同比例的甲醇、水，乙腈、水作為流動相對試樣進行分離檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動相較理想。當流速控制在1.0 mL/min時，有效成分能很好地分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，保留時間短。綜合以上因素，最終選定乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動相，體積比為55︰45。

2.2 線性相關(guān)性測定

配制一系列不同質(zhì)量分數(shù)的嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)標樣溶液，按上述色譜操作條件，測定相應的響應值，并以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得到嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。嘧菌環(huán)胺線性方程為=24.476 5+18.171 4，=0.999 3；啶酰菌胺線性方程為=32.017 7－33.013 2，=0.999 5。

2.3 方法精密度測定

對同一26%嘧菌環(huán)胺?啶酰菌胺懸浮劑平行測定5次，在上述色譜操作條件下進行分析。測得嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的標準偏差分別為0.16和0.21，變異系數(shù)分別為2.52%和1.03%(表1)。由此可知該法精密度較高，可行。

表1 26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑精密度測定

2.4 方法準確度測定

采用標準品添加法，在已知含量的26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑中加入一定量的嘧菌環(huán)胺、啶酰菌胺的標準品，按上述色譜操作條件分析，計算回收率。測得嘧菌環(huán)胺添加回收率為98.60%~ 100.66%，平均回收率為99.34%；啶酰菌胺添加回收率為98.38%~101.05%，平均回收率為99.51%(表2)。由此可知該法準確度較高，可準確定量。

表2 26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑回收率測定

3 結(jié) 論

綜上所述，試驗建立的26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑中有效成分質(zhì)量分數(shù)的高效液相色譜分析方法，具有較高的準確度和精密度，線性關(guān)系良好，分離效果好，并且操作簡便，快速，適用于產(chǎn)品生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。

[1] 劉長令. 世界農(nóng)藥大全(殺菌劑卷)[M]. 北京: 化學工業(yè)出版社, 2006: 234-235, 237－238.

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[5] 潘冬, 楊紅, 劉賢進. 葡萄中嘧菌環(huán)胺的氣相色譜分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學報, 2009, 25(5): 1199－1200.

Analysis of Cyprodinil·Boscalid 26% SC by HPLC

XU Yan1, LIU Xiping2, PAN Jing1, DONG Qin1, GAO Jingyu1, LIU Runfeng1

(1.Beijing Mindleader Agroscience Co., Ltd, Beijing 102206, China;2. Jiangxi Vegcides Biotechnology Co., Ltd，Jiangxi Nanchang 331700, China)

The HPLCmethod for the determination of active ingredient content in cyprodinil? boscalid 26% SC was established. The simultaneous determination of cyprodinil and boscalid in the samples was conducted with ZORBAX SB C18column and UV-absobance detector, while the mixture solution of acetonitrile-water was used as the mobile phase acidified by phosphoric acid. The results showed that the standard deviations for cyprodinil and boscalid were 0.16 and 0.21, variation coefficient were 2.52% and 1.03%, and average recovery were 99.34% and 99.51%, respectively. The method has the advantages of simple, convenient, good separating effect, high precision and accuracy, which can be used for the simultaneous determination of cyprodinil and boscalid.

cyprodinil; boscalid; HPLC; analysis

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2017.02.11

TQ450.7

A

1009-6485(2017)02-0049-03

徐妍(1975—)，女，遼寧昌圖人，高級工程師，博士，主要從事農(nóng)藥劑型加工及使用技術(shù)研究。Tel：010-56071484，E-mail：xuayn@mdldagro.com。

2016-12-21。