史東杰++梁擁軍++許金華+孫硯勝+張欣

摘要：在基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量為0、0.005%、0.01%、0.02%、0.04%微生態(tài)制劑干粉，研究微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉生長(zhǎng)、腸道消化酶活性、表觀消化率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同濃度微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉的生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用，其中002%添加組的增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率最高，較對(duì)照組分別顯著增加62.29%、50.00%，但飼料系數(shù)顯著降低1667%。在20、30、40 d時(shí)，各微生態(tài)制劑添加組的腸胰蛋白酶活性、干物質(zhì)表觀消化率較對(duì)照組均顯著提高，其中20 d時(shí)Ⅳ組的胰蛋白酶活性、干物質(zhì)表觀消化率顯著高于其他試驗(yàn)組。10、20、30、40 d時(shí)，各微生態(tài)制劑添加組的腸脂肪酶活性較對(duì)照組均有所提高，其中30、40 d時(shí)各添加組的腸脂肪酶活性顯著增加。各微生態(tài)制劑添加量對(duì)試驗(yàn)魚腸淀粉酶活性無(wú)顯著性影響。說(shuō)明飼料中添加微生態(tài)制劑能顯著提高錦鯉生長(zhǎng)性能，增強(qiáng)腸道消化酶活性，并在一定程度上提高錦鯉對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，適宜的添加量為0.02%，適宜持續(xù)投喂時(shí)間為20 d。

關(guān)鍵詞：微生態(tài)制劑；錦鯉；生長(zhǎng)性能；消化酶；表觀消化率

中圖分類號(hào)： S965.812文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A[HK]

文章編號(hào)：1002-1302（2017）13-0136-03[HS）][HT9.SS]

收稿日期：2015-12-28

基金項(xiàng)目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（編號(hào)：GSY20160201）；北京淡水魚種質(zhì)資源保存項(xiàng)目（編號(hào)：KJCX20140112）；北京市農(nóng)林科學(xué)院觀賞魚與熱水性名優(yōu)魚類創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào)：BJRKYGSYTD2016）。

作者簡(jiǎn)介：史東杰（1985—），女，北京人，碩士，工程師，主要從事觀賞魚繁育及養(yǎng)殖技術(shù)研究。E-mail：sdj19850104@163.com。

[ZK）]

微生態(tài)制劑是從天然環(huán)境中篩選分離出來(lái)的多種有益微生物的復(fù)合物，富含蛋白質(zhì)、脂肪及其他生理活性物質(zhì)，具有無(wú)殘留、無(wú)抗藥性、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖[1-3]。已有研究表明，微生態(tài)制劑可平衡或改善魚類消化系統(tǒng)有益菌群、提高魚類血清免疫力、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)微生態(tài)制劑可有效分解養(yǎng)殖水環(huán)境中的氨氮、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，改善養(yǎng)殖環(huán)境，提高魚類生長(zhǎng)性能和抗病力[4-6]。近年來(lái)，有關(guān)微生態(tài)制劑應(yīng)用于魚類生長(zhǎng)及消化酶活性的研究較多，是水產(chǎn)動(dòng)物飼料添加劑的應(yīng)用熱點(diǎn)，但關(guān)于微生態(tài)制劑調(diào)節(jié)錦鯉生長(zhǎng)、消化酶活性及表觀消化率的研究尚少。本試驗(yàn)通過(guò)在錦鯉飼料中添加微生態(tài)制劑粉劑，研究其對(duì)錦鯉生長(zhǎng)、腸道消化酶活性及表觀消化率的影響，為錦鯉健康養(yǎng)殖提供技術(shù)參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)魚來(lái)自北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所小湯山良種繁育中心自行繁育的紅白錦鯉。試驗(yàn)用基礎(chǔ)飼料不含微生態(tài)制劑（表1），微生態(tài)制劑購(gòu)自康源綠洲生物科技（北京）有限公司，含有枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）、蛋白酶、玉米蛋白粉、藻類營(yíng)養(yǎng)素、光合催化劑、活性酶、免疫因子劑及代謝產(chǎn)物等多種物質(zhì)，有效活菌數(shù)≥2 000億/g，按分組配比加入基礎(chǔ)飼料的預(yù)混料中。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

選取體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊的錦鯉225尾，初始體質(zhì)量為（183.76±5.48） g，隨機(jī)分配15個(gè)小型循環(huán)水養(yǎng)殖缸（1.5 m×1.5 m×1.5 m）內(nèi)進(jìn)行養(yǎng)殖，每缸15尾，實(shí)際養(yǎng)殖水容積為2.5～2.8 m3。試驗(yàn)分為5組，1個(gè)對(duì)照組（Ⅰ組）、4個(gè)試驗(yàn)組（Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組），每組設(shè)3個(gè)平行，Ⅰ組投喂基礎(chǔ)飼料，其他試驗(yàn)組分別添加微生態(tài)制劑干粉質(zhì)量為0005%（Ⅱ組）、0.01%（Ⅲ組）、0.02%（Ⅳ組）、0.04%（Ⅴ組）。試驗(yàn)魚試養(yǎng)7 d后開始正式試驗(yàn)，分別投喂對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)飼料，試驗(yàn)周期為40 d。試驗(yàn)期和試養(yǎng)期飼養(yǎng)條件相同，養(yǎng)殖用水為地下井水，水溫為（18±1） ℃，pH值為7.4，溶氧量≥5 mg/L，光照為自然光源。每日投喂2次（09：30、17：00），投喂量為魚體質(zhì)量的3%～3.5%，根據(jù)魚體的攝食情況作適當(dāng)調(diào)整。[JP]

1.3生長(zhǎng)性能指標(biāo)的測(cè)定

[JP2]養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食24 h，測(cè)量每缸試驗(yàn)魚體質(zhì)量。選用增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)、成活率作為主要生長(zhǎng)性能指標(biāo)。增質(zhì)量率（WGR，%）=（終末體質(zhì)量-初始體質(zhì)量）/初始體質(zhì)量×100%；特定生長(zhǎng)率（SGR，%/d）=（ln終末魚體質(zhì)量-ln初始魚體質(zhì)量）/飼養(yǎng)時(shí)間（d）×100%；飼料系數(shù)（FCR）=總投喂量/（終末體質(zhì)量+死魚質(zhì)量-初始體質(zhì)量）；成活率（SR，%）=試驗(yàn)?zāi)~尾數(shù)/試驗(yàn)初魚尾數(shù)×100%。[JP]

1.4消化酶活性的測(cè)定

在試驗(yàn)10、20、30、40 d時(shí)取樣，每次取樣前禁食24 h。每缸隨機(jī)選取試驗(yàn)魚6尾，在冰盤上迅速解剖，分離出整個(gè)腸道，雙蒸水沖洗，迅速用液氮冷凍2 min，放入-80 ℃超低溫冰箱保存，備測(cè)胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等消化酶的活性。胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的測(cè)定采用北京澳聯(lián)雅實(shí)驗(yàn)設(shè)備中心的試劑盒進(jìn)行，具體測(cè)定方法參照試劑盒說(shuō)明書。

[HTK]1.5表觀消化率的測(cè)定[HT]

在試驗(yàn)后10、20、30、40 d取樣，每次取樣時(shí)，在1次投喂后3 h將試驗(yàn)魚撈起，解剖取出腸道，擠出腸道后1/3的糞便，用清水洗去腸道黏液。試驗(yàn)連續(xù)重復(fù)多次，待收集到足夠的糞便樣品后于75 ℃下烘干至恒質(zhì)量，備測(cè)干物質(zhì)表觀消化率。Cr2O3采用Frukawa等的酸消化比色法[7]測(cè)定。每個(gè)樣品測(cè)定3個(gè)平行樣。

干物質(zhì)表觀消化率（ADC，%）=100%-100%×飼料中的Cr2O3含量/糞便中的Cr2O3含量。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析endprint

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析，用多重比較法進(jìn)行組間差異顯著性分析，顯著水平為0.05。

2結(jié)果與分析

2.1飼料中添加微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉生長(zhǎng)性能的影響

不同濃度微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉的生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用（表2）。與對(duì)照組Ⅰ相比，Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組的增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率均顯著增加，增質(zhì)量率分別提高8.93%、37.02%、62.30%，特定生長(zhǎng)率分別提高14.29%、28.57%、50.00%，但其飼料系數(shù)顯著降低8.97%、8.97%、16.67%。試驗(yàn)組Ⅴ與對(duì)照組相比，增質(zhì)量率提高7.06%，特定生長(zhǎng)率提高429%，飼料系數(shù)降低1.28%，且均無(wú)顯著性差異。不同添加組對(duì)成活率無(wú)顯著影響。結(jié)果表明，飼料添加0.02%微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉促生長(zhǎng)效果最佳。

2.2飼料中添加微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉消化酶活性的影響

與對(duì)照組相比，20、30、40 d時(shí)各微生態(tài)制劑添加組的腸胰蛋白酶活性均顯著提高，且20 d時(shí)Ⅳ組的胰蛋白酶活性顯著高于其他試驗(yàn)組（表3）。與對(duì)照組相比，10、20、30、40 d時(shí)各微生態(tài)制劑添加組的腸脂肪酶活性均有所提高，10、20 d時(shí)各添加組的腸脂肪酶活性增加不顯著，30、40 d時(shí)各添加組的腸脂肪酶活性顯著增加。與對(duì)照組相比，10、20、30、40 d時(shí)，各微生態(tài)制劑添加量對(duì)試驗(yàn)魚腸淀粉酶活性均無(wú)顯著性影響。說(shuō)明微生態(tài)制劑的適量添加能夠提高錦鯉腸道內(nèi)胰蛋白酶活性、脂肪酶活性，但對(duì)淀粉酶活性無(wú)顯著影響，適宜的添加量為0.02%，適宜持續(xù)投喂時(shí)間為20 d。

[HTK]2.3飼料中添加微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉干物質(zhì)表觀消化率的影響[HT]

飼料中添加微生態(tài)制劑可以提高飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的表觀消化率，并在一定程度上提高錦鯉對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率（表4）。與對(duì)照組相比，20、30、40 d時(shí)各微生態(tài)制劑添加組的干物質(zhì)表觀消化率均顯著提高，20 d時(shí)Ⅳ組的干物質(zhì)表觀消化率顯著高于其他試驗(yàn)組，為98.46%±1.15%。說(shuō)明以干物質(zhì)表觀消化率為指標(biāo)，添加量為0.02%，持續(xù)投喂20 d時(shí)效果最好。

3討論

大量研究表明，在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中添加微生態(tài)制劑可以促進(jìn)供試動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，提高飼料利用率[7-9]。如付鑫等對(duì)幼刺參[10]、仇明等對(duì)斑點(diǎn)叉尾[XCZ11.tif，JZ][11]、白利丹等對(duì)錦鯉[12]、艾炎軍等對(duì)大鱗副泥鰍[13]、劉曉勇等對(duì)雜交鱘幼魚[14]的研究均表明，適當(dāng)添加微生態(tài)制劑可促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，加強(qiáng)魚體消化能力，調(diào)節(jié)代謝，改善生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中，不同濃度微生態(tài)制劑對(duì)錦鯉的生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用，其中0.02%添加組的增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率最高，較對(duì)照組分別顯著增加62.29%、50.00%，但飼料系數(shù)顯著降低 16.67%。這表明本試驗(yàn)與上述研究一致，微生態(tài)制劑的添加均對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)生了積極的作用。在本試驗(yàn)中，0.04%添加組對(duì)增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)的影響與其他添加組較對(duì)照組相比有所下降，說(shuō)明過(guò)量添加微生態(tài)制劑可能會(huì)有不利的影響。例如，丁麗等研究表明，增質(zhì)量率和特定生長(zhǎng)率隨著酵母菌和乳酸菌添加量的增加呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)[15]，隨著芽孢桿菌添加量的增加反而降低，這說(shuō)明過(guò)多或過(guò)少的益生菌對(duì)動(dòng)物都會(huì)有不利的影響。

在本試驗(yàn)中，20、30、40 d時(shí)各微生態(tài)制劑添加組的腸胰蛋白酶活性較對(duì)照組均顯著提高，10、20、30、40 d時(shí)各微生態(tài)制劑添加組的腸脂肪酶活性均有所提高，說(shuō)明微生態(tài)制劑通過(guò)作用于錦鯉腸道，提高了其胰蛋白酶、脂肪酶的活性，從而增強(qiáng)了錦鯉對(duì)飼料的利用率。但本試驗(yàn)還顯示，20 d時(shí)002%添加組的胰蛋白酶活性才顯著高于其他試驗(yàn)組，30、40 d 時(shí)各添加組的腸脂肪酶活性才顯著增加?？赡苁怯捎谝鹊鞍酌?、脂肪酶的中心生成器官是肝胰臟，這2種酶由肝胰臟分泌后再轉(zhuǎn)移至腸道時(shí)需要一個(gè)生理過(guò)程。牟洪生等研究微生態(tài)制劑A對(duì)羅非魚生長(zhǎng)及消化酶活性的影響，結(jié)果顯示由芽孢桿菌和光合細(xì)菌為主要成分組成的復(fù)合微生態(tài)制劑A能夠提高羅非魚的淀粉酶活性[16]。徐文彥等研究枯草芽孢桿菌對(duì)黃河鯉生產(chǎn)性能及消化酶活性的影響，結(jié)果顯示枯草芽孢桿菌的添加對(duì)黃河鯉中腸組織淀粉酶活性無(wú)顯著性影響[17]。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比10、20、30、40 d時(shí)各微生態(tài)制劑添加量對(duì)試驗(yàn)魚的腸淀粉酶活性無(wú)顯著性影響?？赡芘c微生態(tài)制劑的種類、劑量、添加量、試驗(yàn)魚品種、規(guī)格及腸道pH值差別、基礎(chǔ)飼料等有關(guān)，這還有待對(duì)淀粉酶主要分泌器官肝胰臟中該酶的活性進(jìn)行測(cè)定，可能會(huì)有一些新的結(jié)論。

研究發(fā)現(xiàn)，微生態(tài)制劑對(duì)動(dòng)物腸道吸收功能有一定的促進(jìn)作用[15，18]。在本試驗(yàn)中，20、30、40 d時(shí)各微生態(tài)制劑添加組的干物質(zhì)表觀消化率較對(duì)照組均顯著提高，說(shuō)明飼料中添加微生態(tài)制劑可以提高飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的表觀消化率，并在一定程度上提高錦鯉對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。這與付鑫等對(duì)幼刺參[10]、仇明等對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰[11]、丁麗等對(duì)異育銀鯽[15]的研究結(jié)論一致。劉克林等在研究益生菌對(duì)鯉魚免疫功能影響時(shí)觀察到，試驗(yàn)組腸道黏膜皺褶增多、隱窩增深、微絨毛長(zhǎng)而密集，腸道吸收面積增加，同時(shí)益生菌降低了腸道內(nèi)環(huán)境pH值，有利于刺激腸道消化腺的代謝分泌活動(dòng)，從而提高腸道消化酶活力，繼而提高了魚類對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力[19]。在本試驗(yàn)中，雖未對(duì)各微生態(tài)制劑添加組的試驗(yàn)魚腸道的表觀及pH值進(jìn)行詳細(xì)研究，但通過(guò)測(cè)定干物質(zhì)表觀消化率也間接反映了本試驗(yàn)的研究結(jié)論與劉克林等的研究結(jié)論[19]相同，即微生態(tài)制劑增強(qiáng)了魚類對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的吸收，有關(guān)微生態(tài)制劑促進(jìn)魚類飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收利用的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

綜上所述，飼料中添加微生態(tài)制劑顯著提高了錦鯉生長(zhǎng)性能，增強(qiáng)了腸道消化酶活性，并在一定程度上提高了錦鯉對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，適宜的添加量為0.02%，適宜持續(xù)投喂時(shí)間為20 d。endprint

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