王 蘭，嚴(yán)麗梅

侵襲性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表達(dá)情況及其臨床意義

王 蘭，嚴(yán)麗梅

目的研究侵襲性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表達(dá)情況及其表達(dá)水平在臨床中的意義。方法選取2013年5月至2016年7月于我院婦產(chǎn)科就診的46例侵襲性葡萄胎患者作為治療組，同期45例健康婦女作為對(duì)照組。比較治療組患者化療前后及對(duì)照組患者外周血TNF、DC、NIH、ET-1、leptin水平。結(jié)果治療組化療前血漿TNF、INH、ET-1、leptin水平明顯高于對(duì)照組，血漿DC計(jì)數(shù)明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。化療后,治療組血漿INH、ET-1、leptin水平明顯低于化療前，但仍顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；血漿DC計(jì)數(shù)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。化療后12個(gè)月內(nèi)，有3例患者復(fù)發(fā)，與對(duì)照組比較，未復(fù)發(fā)組患者的TNF水平、DC計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而復(fù)發(fā)組DC計(jì)數(shù)明顯低于未復(fù)發(fā)組(P<0.05)，復(fù)發(fā)組DC計(jì)數(shù)明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。DC、INH、ET-1、leptin水平相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，侵襲性葡萄胎與DC、INH、ET-1、leptin水平呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論侵襲性葡萄胎化療前后血漿DC、INH、ET-1、leptin水平的檢測(cè)對(duì)患者病情的評(píng)估、預(yù)后預(yù)測(cè)等有重要意義。

侵襲性葡萄胎；化療；腫瘤壞死因子；樹突狀細(xì)胞；抑制素；瘦素；內(nèi)皮素-1

0 引言

侵襲性葡萄胎是指子宮以外或子宮肌層內(nèi)出現(xiàn)葡萄胎組織。主要在葡萄胎清除后6個(gè)月內(nèi)發(fā)生，不規(guī)則陰道出血是其主要的臨床表現(xiàn)。約1%～5%的部分性葡萄胎和18%～29%的完全性葡萄胎會(huì)進(jìn)展為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤(Gestational trophoblastic neoplasia,GTN)。作為一種多肽細(xì)胞因子，腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor，TNF)是由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的，在多種疾病的病理生理過(guò)程中均發(fā)揮重要的作用。樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是體內(nèi)已知的專職免疫抗原提呈細(xì)胞。抑制素(Inhibin，NIH)與滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)、分化和增殖、胎盤細(xì)胞增生密切相關(guān)。內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)是內(nèi)源性物質(zhì)中血管收縮功能最強(qiáng)的一種，是一種縮血管多肽，其由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌[1-2]。瘦素(Leptin)是螺旋細(xì)胞因子家族的成員，是脂肪細(xì)胞肥胖基因的產(chǎn)物，是最早發(fā)現(xiàn)的脂肪因子。研究表明，TNF、DC、NIH、ET-1、leptin與腫瘤療效、預(yù)后密切相關(guān)[3-5]。本研究對(duì)侵襲性葡萄胎患者進(jìn)行血清TNF、DC、NIH及血漿ET-1、leptin檢測(cè)，并分析其表達(dá)情況與臨床療效、預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究選取2013年5月至2016年7月于我院婦產(chǎn)科就診的46例侵襲性葡萄胎確診患者作為治療組。所有患者均經(jīng)病史詢問(wèn)，X線、B超、β-HCG等檢查確診。所有患者均為低危型。同時(shí)選擇45例同期健康婦女作為對(duì)照組。并排除慢性免疫性疾病、重要臟器(心、肺、肝、腎等)疾患和合并其他腫瘤患者。所有患者血常規(guī)及肝、腎功能正常。兩組患者的年齡、產(chǎn)次、身高、體重等指標(biāo)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 化療方案 46例侵襲性葡萄胎患者化療方案主要采用單藥化療為主，放線菌素D，500 μg/d，1個(gè)療程為5 d，療程間隔為9 d；或氟尿嘧啶28～30 mg/(kg·d),1個(gè)療程為8～10 d，療程間隔為12～14 d。如骨髓抑制出現(xiàn)Ⅱ度以上時(shí)，則皮下注射3～5 μg/kg的粒細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte colony stimulating factor，G-CSF)直至WBC≥10×109/L，患者血清HCG<2.9 U/L則繼續(xù)鞏固治療1～3個(gè)療程后停止化療。如單藥化療出現(xiàn)耐藥者，則給予聯(lián)合方案化療或更換另一種單藥方案。

1.2.2 檢測(cè)方法和測(cè)定時(shí)間 測(cè)定時(shí)間：研究者均在化療前和化療全部療程后進(jìn)行測(cè)定，復(fù)發(fā)患者在復(fù)發(fā)時(shí)測(cè)定。TNF測(cè)定：采用放射免疫分析法進(jìn)行TNF測(cè)定。外周血DC計(jì)數(shù)：采空腹清晨靜脈外周血3 mL分離DC，加3 mL Ficoll液入每份血標(biāo)本，第2層血細(xì)胞的收集在血標(biāo)本2 000 r/min離心后，加DHK液入血標(biāo)本后反復(fù)離心10 min，速度1 000 r/min，WBC純化后，標(biāo)本加入RPMI-1640液至2 mL，再將不同梯度濃度的Percoll液離心25 min，離心速度1 700 r/min，取35%～45%之間層，用DHK反復(fù)稀釋、離心，將細(xì)胞濃度調(diào)整為2×106/mL，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h后，收集細(xì)胞，細(xì)胞沉淀物中加入人IgG 10 mg/mL，用PBS沖洗，沖洗后的非黏附細(xì)胞即為DC，將DC經(jīng)Panning數(shù)次純化后，鏡下計(jì)數(shù)DC數(shù)目，進(jìn)一步計(jì)算血DC計(jì)數(shù)。血清NIH測(cè)定：采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，由深圳晶美生物技術(shù)有限公司提供試劑，按說(shuō)明書操作。血漿ET-1、leptin測(cè)定：采用放射免疫法進(jìn)行檢測(cè)，由北方免疫試劑研究所提供試劑，按說(shuō)明書操作。隨訪情況:對(duì)所有患者采用電話及門診隨訪的方式隨訪至2016年12月。

2 結(jié)果

2.1 治療結(jié)果 46例侵襲性葡萄胎患者中有41例患者單藥治療有效，5例患者更換另一種單藥化療有效，3例患者復(fù)發(fā)。

2.2 兩組患者化療前后血清各項(xiàng)指標(biāo)比較 化療前治療組血清TNF、INH及血漿ET-1、leptin水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；血漿DC計(jì)數(shù)明顯低于對(duì)照組(P<0.05)?；熀驣NH、ET-1、leptin水平明顯低于化療前，但仍顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，化療后血漿DC計(jì)數(shù)低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 化療后6個(gè)月TNF水平和DC計(jì)數(shù)比較 化療后6個(gè)月，有3例患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)，與對(duì)照組比較，未復(fù)發(fā)組患者的TNF水平、DC計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。復(fù)發(fā)組DC計(jì)數(shù)明顯低于未復(fù)發(fā)組和對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表1 兩組一般資料比較

表2 兩組化療前后血清TNF、DC、INH，血漿ET-1和leptin水平比較

注：*與對(duì)照組比較，P<0.05，#與化療前比較，P<0.05

表3 化療后6個(gè)月TNF水平和DC計(jì)數(shù)比較

2.4 相關(guān)性分析 侵襲性葡萄胎患者化療前后進(jìn)行DC、INH、ET-1、leptin水平相關(guān)性分析，結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.568 1、0.685 5、0.623 8，P<0.05)。

3 討論

抗腫瘤中細(xì)胞免疫起了非常重要的作用，腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞免疫應(yīng)答觸發(fā)階段低下有關(guān)[3]。有效的抗腫瘤免疫主要通過(guò)誘導(dǎo)T輔助細(xì)胞(Th1)的反應(yīng)進(jìn)行。DCs是體內(nèi)最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞，與腫瘤的關(guān)系密切。人體腫瘤微環(huán)境中，DCs的數(shù)量、功能與腫瘤的預(yù)后呈正相關(guān)，可刺激特定的腫瘤相關(guān)抗原的免疫反應(yīng)[4]。本研究結(jié)果表明，侵襲性葡萄胎患者化療前及復(fù)發(fā)后血中DC水平低于對(duì)照組，提示侵襲性葡萄胎患者體內(nèi)監(jiān)控腫瘤的免疫功能低下[5]，且此類患者易出現(xiàn)化療耐受或腫瘤復(fù)發(fā)[6]。本研究結(jié)果顯示，化療后血DC計(jì)數(shù)較化療前增多，說(shuō)明化療可恢復(fù)一定的機(jī)體監(jiān)控免疫功能，且能殺滅腫瘤細(xì)胞。

TNF是一種抗腫瘤壞死因子，參與機(jī)體免疫病理?yè)p傷。本研究發(fā)現(xiàn)，患者血清TNF水平化療前升高，化療后降低，表明TNF參與了滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的發(fā)生發(fā)展，而化療清除和殺滅腫瘤細(xì)胞，使腫瘤因素刺激體內(nèi)血清中的單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的TNF明顯下降，保持整個(gè)化療期間的低水平狀態(tài)[7]。

本研究結(jié)果表明，侵襲性葡萄胎患者血清INH水平在化療前明顯高于對(duì)照組，化療后明顯降低，但高于對(duì)照組。這可能是因?yàn)镮NH主要由滋養(yǎng)層中的滋養(yǎng)細(xì)胞合成，滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤中滋養(yǎng)細(xì)胞過(guò)度增生，從而使INH合成明顯增加。正常人體內(nèi)INH是由卵巢顆粒細(xì)胞產(chǎn)生。多項(xiàng)研究提示INH與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，INH是監(jiān)測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的良好指標(biāo)。 本研究發(fā)現(xiàn)，化療前后侵襲性葡萄胎患者血清ET-1水平明顯高于對(duì)照組，且化療后血清ET-1水平明顯低于化療前。這可能與ET-1病理狀態(tài)下大量產(chǎn)生釋放有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，ET-1蛋白水平在多種惡性腫瘤中升高，其具有促進(jìn)血管生成及細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)的作用。一項(xiàng)關(guān)于卵巢癌的研究顯示，ET-1可以增強(qiáng)卵巢癌的侵襲性和轉(zhuǎn)移[8]?；熐盎颊哐錏T-1升高符合滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤是一種具有豐富血管及強(qiáng)侵襲性的腫瘤的特點(diǎn)，ET-1在其侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中可能發(fā)揮了重要的作用。而治療結(jié)束后ET-1水平明顯降低，也與腫瘤受到控制相關(guān)，說(shuō)明血清ET-1水平可作為病情監(jiān)控的指標(biāo)[9]。而治療后ET-1水平仍明顯高于正常人，可能是由于患者治療結(jié)束后，體內(nèi)病灶仍未完全消失所致。

leptin在生物體中具有廣泛的生物學(xué)功能，除了在動(dòng)物體肥胖與消瘦過(guò)程中起作用外，還與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，血漿leptin水平在化療前的侵襲性葡萄胎患者中顯著高于對(duì)照組。這可能與其在腫瘤組織中促進(jìn)細(xì)胞增殖與分化、增加細(xì)胞侵襲性、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)及促進(jìn)血管形成等功能密切相關(guān)。leptin在乳腺癌和胃癌患者血漿內(nèi)水平升高[10-11]。本研究結(jié)果表明，化療后leptin雖然顯著降低，但仍高于對(duì)照組。這可能是由于治療結(jié)束時(shí)患者體內(nèi)病灶未完全消失及免疫功能未完全恢復(fù)。leptin可能與滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。動(dòng)態(tài)觀察侵襲性葡萄胎患者血漿leptin水平，可監(jiān)控疾病的變化及轉(zhuǎn)歸，具有較高的臨床價(jià)值。

本研究中相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，侵襲性葡萄胎患者血漿DC、INH、ET-1、leptin水平呈顯著正相關(guān)?？赡艿脑蚴悄[瘤患者免疫功能低下，體內(nèi)INH、ET-1、leptin水平均對(duì)免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用。因此，體內(nèi)多種因素改變并影響免疫系統(tǒng)正常工作可能是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因。

綜上所述，協(xié)同監(jiān)測(cè)侵襲性葡萄胎患者血漿DC、INH、ET-1、TNF和leptin水平，有助于對(duì)病情進(jìn)行評(píng)估及預(yù)后預(yù)測(cè)。

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ExpressionofTNF,DC,NIH,ET-1andleptininperipheralbloodofpatientswithinvasivehydatidiformmoleanditsclinicalsignificance

WANG Lan,YAN Li-mei

(Department of Gynecology & Obstetrics,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

ObjectiveTo study the expression of TNF,DC,NIH,ET-1 and leptin in the peripheral blood of invasive hydatidiform mole patients and its clinical significance.MethodsForty-six patients with invasive hydatidiform mole treated in our hospital from May 2013 to July 2016 were selected as the treatment group,and forty-five healthy women of the same period as control group.The levels of TNF,DC,NIH,ET-1 and leptin in peripheral blood of patients before and after chemotherapy were compared between the two groups.ResultsBefore treatment,the serum levels of TNF,INH,plasma ET-1 and leptin in treatment group were significantly higher than those in control group (P<0.05),and the plasma DC count was significantly lower than that of control group,the difference being statistically significant (P<0.05).Plasma INH,ET-1 and leptin levels were significantly lower after chemotherapy than before chemotherapy,but still significantly higher than control group,and the difference was statistically significant (P<0.05);plasma DC counts after chemotherapy were still lower than that of control group,and the difference was statistically significant (P<0.05).Within 12 months after chemotherapy,3 patients relapsed.Compared with control group,TNF level and DC count of no-relapse patients showed no significant difference (P>0.05),and the count of DC of recurrence group was significantly lower than that of non-recurrence group (P<0.05),DC count of the recurrence group significantly lower than control group (P<0.05).The correlation analysis of DC,INH,ET-1 and leptin showed that invasive hydatidiform mole was positively related to DC,INH,ET-1 and leptin levels (P<0.05).ConclusionDetection of plasma DC,INH,ET-1 and leptin levels in invasive hydatidiform mole before and after chemotherapy is important for the evaluation of disease and prognosis.

Invasive hydatidiform mole;Chemotherapy;Tumor necrosis factor;Dendritic cells;Statin; Leptin;Endothelin-1

2017-03-24

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽(yáng) 110004

國(guó)家自然科學(xué)基金(81602304)

10.14053/j.cnki.ppcr.201709009