王 華

·藥學研究·

HPLC波長切換法同時測定消痰益康(糖漿)中6種成分的含量

王 華

目的建立同時測定消痰益康(糖漿)中多成分的定量分析方法。方法采用HPLC波長切換法同時測定原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量。色譜柱為Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-0.04%冰醋酸溶液為流動相，按規(guī)定進行梯度洗脫；流速0.9 mL/min；檢測波長分別為280 nm(原兒茶醛、兒茶素和表兒茶素)、360 nm(金絲桃苷和槲皮素)和299 nm(杜鵑素)；柱溫30 ℃。結(jié)果原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素分別在7.290～145.8、2.550～51.00、13.76～275.2、6.470～129.4、2.660～53.20、3.880～77.60 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率及相應的RSD分別為98.68%(1.35%)、99.27%(1.17%)、97.05%(0.58%)、99.84%(1.19%)、97.89%(0.95%)、98.78%(1.13%)。結(jié)論該方法可用于消痰益康(糖漿)的含量測定及質(zhì)量控制。

消痰益康(糖漿)；原兒茶醛；兒茶素；表兒茶素；金絲桃苷；槲皮素；杜鵑素；波長切換法；中成藥；多成分測定

0 引言

消痰益康(糖漿)收載于《衛(wèi)生部頒藥品標準》中藥成方制劑第九冊，是由枸杞子、滿山紅、人參葉、黃芪炙等4味中藥材加工而成，具有祛痰、止咳平喘、補陽益氣的功效，臨床應用于久咳及慢性氣管炎、肺心病的治療，臨床需求量大。消痰益康(糖漿)標準僅規(guī)定了性狀、理化鑒別、乙醇量及相對密度的測定，對處方中4味中藥材的任何成分均未進行定量測定[1]。王輝等[2]采用分光光度法對該制劑中總黃酮含量進行了測定。目前，尚未檢索到對該制劑多成分進行定量測定的文獻報道，而單一成分難以控制復方制劑的質(zhì)量。為更好地控制消痰益康(糖漿)的質(zhì)量，筆者采用HPLC梯度洗脫法同時測定消痰益康(糖漿)主要藥味枸杞子中的原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素，以及滿山紅[3]中的金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素，對質(zhì)量標準的完善提供了實驗依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200系列四元梯度泵高效液相色譜儀(在線真空脫氣裝置、四元梯度泵、自動進樣器、柱恒溫箱、可變波長檢測器，美國安捷倫公司)；METTLER TOLEDO分析電子天平(瑞士METTLER TOLEDO公司，十萬分之一)。

1.2 試藥與試劑 消痰益康(糖漿)(規(guī)格：每瓶裝100 mL，批號：201509002、201602001、201603004)來源于葵花藥業(yè)集團(佳木斯)有限公司；原兒茶醛對照品(批號：110810-201608，含量：99.3%)、兒茶素對照品(批號：110877-201604，含量：99.2%)、表兒茶素對照品(批號：110878-200102，含量：100.0%)、金絲桃苷對照品(批號：111521-201507，含量：94.3%)、槲皮素對照品(批號：100081-201610，含量：98.6%)和杜鵑素對照品(批號：110850-201605，含量：100.0%)來源于中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取各對照品適量，用甲醇分別制成原兒茶醛1.458 mg/mL、兒茶素0.510 mg/mL、表兒茶素2.752 mg/mL、金絲桃苷1.294 mg/mL、槲皮素0.532 mg/mL、杜鵑素0.776 mg/mL單一成分對照品儲備溶液。再分別量取各對照品儲備液適量，用甲醇制成含原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素質(zhì)量濃度分別為0.072 9、0.010 2、0.137 6、0.064 7、0.026 6、0.038 8 mg/mL的混合對照品溶液，作為消痰益康(糖漿)對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取消痰益康(糖漿)4.0 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，振搖均勻，過濾，取續(xù)濾液作為消痰益康(糖漿)供試品溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備 根據(jù)消痰益康(糖漿)質(zhì)量標準中載明的處方和制備工藝，分別制備缺枸杞子陰性樣品和缺滿山紅陰性樣品，再按消痰益康(糖漿)供試品溶液制備方法制成枸杞子陰性樣品溶液和滿山紅陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件 采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；以甲醇-0.04%冰醋酸溶液為流動相，按表1的比例梯度洗脫；0～28 min時在280 nm[4]波長下檢測原兒茶醛、兒茶素和表兒茶素，28～40 min時在360 nm[5-6]波長下檢測金絲桃苷和槲皮素，40～55 min時在299 nm[5-7]波長下檢測杜鵑素；流速：0.9 mL/min；柱溫：30 ℃。

表1 梯度洗脫程序

2.3 系統(tǒng)適用性與專屬性試驗 精密吸取“2.1.1”、“2.1.2”和“2.1.3”項下的溶液各適量，按照“2.2”項下色譜條件依法檢測，結(jié)果在與原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素對照品色譜圖相應的保留時間處，供試品溶液色譜圖中有原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的吸收峰，而陰性樣品色譜圖中未顯示對應的吸收峰，說明陰性無干擾，且各峰之間分離度>1.5。色譜圖見圖1。

2.4 標準曲線的制備 分別精密吸取對照品儲備溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，將其置于6個20 mL量瓶中并用甲醇稀釋至刻度，制成6個系列濃度的混合對照品溶液，依法進行測定，采用原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素質(zhì)量濃度x作為橫坐標，測得的峰面積y作為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程見表2。

圖1 消痰益康(糖漿)色譜圖

注：A.對照品溶液，B.樣品溶液，C.枸杞子陰性樣品溶液，D.滿山紅陰性樣品溶液；1.原兒茶醛，2.兒茶素，3.表兒茶素，4.金絲桃苷，5.槲皮素，6.杜鵑素

2.5 混合對照品精密度試驗 取“2.1.1”項下的混合對照品溶液，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，結(jié)果原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素峰面積的RSD(n=6)分別為1.13%、0.75%、1.02%、0.97%、1.35%、0.82%。

2.6 重復性試驗 取批號為201509002的消痰益康(糖漿)6份，按“2.1.2”項方法制備供試品溶液，依法測定，分別計算原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量，并計算所測6個組分含量的RSD，結(jié)果所測組分的RSD依次為1.42%、0.95%、1.13%、0.77%、0.39%、1.45%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取批號為201509002的消痰益康(糖漿)供試品溶液，按照上述方法和條件進行分析，分別在0、2、4、6、8、10、12 h測定樣品中原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的峰面積值，結(jié)果顯示,消痰益康(糖漿)供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為0.98%、1.53%、0.85%、1.27%、1.46%、1.33%。

2.8 加樣回收率試驗 取批號為201509002的消痰益康(糖漿)9份，各精密量取2.0 mL，分別置不同的25 mL量瓶中，依次精密加入對照品溶液(原兒茶醛0.514 mg/mL、兒茶素0.115 mg/mL、表兒茶素0.892 mg/mL、金絲桃苷0.483 mg/mL、槲皮素0.289 mg/mL、杜鵑素0.471 mg/mL)各適量，使對照品加入量與所取供試品中待測定成分之比控制在0.5∶1、1∶1、1.5∶1(各3份)，再按“2.1.2”項方法制備消痰益康(糖漿)加樣回收樣品溶液，依法測定，計算這6個組分的回收率及RSD，結(jié)果見表3。

2.9 樣品測定 取3批消痰益康(糖漿)，按“2.1.2”項方法制備消痰益康(糖漿)供試品溶液，依法測定原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 流動相的選擇 分別考察了甲醇-水流動相體系[3]、乙腈-水流動相體系，結(jié)果顯示,甲醇-水系統(tǒng)優(yōu)于乙腈-水系統(tǒng)，但個別組分的分離效果欠佳，在此基礎(chǔ)上又分別考察了甲醇-0.2%磷酸溶液流動相體系[5,7]、甲醇-0.04%冰醋酸溶液流動相體系[4]，最終采用甲醇-0.04%冰醋酸溶液作為流動相,按照表1規(guī)定的程序進行洗脫，此時色譜圖基線平穩(wěn)，所測6個成分原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素均能達到有效分離，峰形對稱。

表3 原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素回收率

表4 含量測定結(jié)果(mg/mL)

3.2 波長的確定 通過對原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素對照品儲備液的紫外光譜全波長掃描，選擇了各自的最大吸收波長作為高效液相的檢測波長，在280 nm波長下檢測原兒茶醛、兒茶素和表兒茶素，在360 nm波長下檢測金絲桃苷和槲皮素，在299 nm波長下檢測杜鵑素，同時采用波長切換方法，能夠很好地達到實驗目的。

本文建立了HPLC波長切換聯(lián)合梯度洗脫法同時測定消痰益康(糖漿)中原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素6個成分的含量，方法操作簡單，重現(xiàn)性好，可以作為控制和評價消痰益康(糖漿)質(zhì)量的方法。

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ZX09J13109-03B)

SimultaneousdeterminationofsixcomponentsinXiaotanYikangsyrupbyHPLCswitchingwavelengthmethod

WANG Hua

(Department of Pharmacy,the People′s Liberation Army Tianjin Sanatorium,Tianjin 300191,China)

ObjectiveTo establish a method for the simultaneous determination of the multiple components in Xiaotan Yikang syrup.MethodsThe contents of protocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin,hyperoside,quercetin and farrerol were determined by HPLC gradient elution method.The Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) chromatographic column was adopted;the mobile phase consisted of A (methanol) and B (0.04% glacial acetic acid solution) with the column temperature being 30 ℃ and gradient elution;UV detection wavelength was set at 280 nm [protocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin],360 nm(hyperoside,quercetin) and 299 nm(farrerol) with the flow rate of 0.9 mL/min.ResultsProtocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin,hyperoside,quercetin and farrerol,within the scope of 7.290～145.8,2.550～51.00,13.76～275.2,6.470～129.4,2.660～53.20 and 3.880～77.60 μg/mL,had a good linear relationship,respectively.The average recoveries and the correspondingRSDwere 98.68%(1.35%),99.27%(1.17%),97.05%(0.58%),99.84%(1.19%),97.89%(0.95%) and 98.78%(1.13%),respectively.ConclusionThis method can be used for content determination and quality control of Xiaotan Yikang syrup.

Xiaotan Yikang Syrup;Protocatechuic aldehyde;(+)-catechin;Epicatechin;Hyperoside;Quercetin;Farrerol;Wavelength switching method;Chinese patent drug;Multicomponent determination

2017-03-15

解放軍天津療養(yǎng)院藥劑科,天津 300191

10.14053/j.cnki.ppcr.201709021

收稿日期：2016-12-28

作者單位：沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽 110016

提高寒區(qū)軍事作業(yè)能力-抗寒外用制劑的研制(2013-