翁海松，陳 芳

（1.浙江迪安司法鑒定中心，浙江 杭州310000；2.浙江漢博司法鑒定中心，浙江 杭州310000）

親子鑒定中胚胎融合嵌合體1例

翁海松1，陳 芳2

（1.浙江迪安司法鑒定中心，浙江 杭州310000；2.浙江漢博司法鑒定中心，浙江 杭州310000）

法醫(yī)遺傳學(xué)；親子鑒定；嵌合體

1 案 例

1.1 簡要案情

本中心受理因孩子辦理出生證明需要而進行的親子鑒定1例，征得當事人同意，采取母親、父親及孩子（男孩）血樣，進行STR分型實驗。結(jié)果顯示，孩子與父親之間存在親生血緣關(guān)系，而母親與孩子之間不存在親生血緣關(guān)系，因此進一步采集母親口腔拭子及帶毛囊的毛發(fā)進行STR分型實驗，母親靜脈血進行染色體核型檢測。詢問當事人，均未曾有輸血史，骨髓移植及放療化療史等，母親外觀正常，第二性征明顯。

1.2 檢驗方法

1.2.1 染色體核型檢測

采集母親外周血淋巴細胞進行培養(yǎng)，按常規(guī)方法[1]制備染色體，采用G顯帶，然后在顯微鏡下對染色體進行計數(shù)及核型分析。

1.2.2 DNA提取

按照常規(guī)Chelex-100法[2]分別提取父親、母親及孩子檢材DNA，先后采用Golden e ye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A試劑盒［基點認知技術(shù)（北京）有限公司］、EX22熒光檢測試劑盒（無錫中德美聯(lián)技術(shù)有限公司）對父親、母親及孩子提取的DNA樣本進行常染色體STR基因座分型檢測，隨后采用Golden e ye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20Y試劑盒［基點認知技術(shù)（北京）有限公司］對父親、母親及孩子提取的DNA樣本進行YSTR分型檢測，相應(yīng)的擴增體系和擴增程序參照試劑盒操作手冊。

1.2.3 DNA分型

采用9700型PCR儀（美國AB公司）對父親、母親及孩子提取的DNA樣本進行PCR擴增，隨后使用3100xl基因分析儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）對DNA擴增產(chǎn)物進行電泳分離，最后使用Gene-Mapper?ID v3.2.1軟件（美國Thermo Fisher Scientific公司）對電泳數(shù)據(jù)進行分析處理，實驗過程參照本中心的相關(guān)作業(yè)指導(dǎo)書進行。

1.3 檢驗結(jié)果

1.3.1 染色體核型分析

母親外周血淋巴細胞染色體核型分析檢測結(jié)果為46，XY細胞系（圖1）。

圖1 母親染色體核型

1.3.2 STR基因型分析

在22個常染色體STR分型檢測中，父親及孩子血液樣本常染色體STR基因座的分型結(jié)果見表1。母親的血樣與帶毛囊的毛發(fā)在22個STR基因座分型結(jié)果不一致，且母親的血樣檢材在Amelogenin性別基因座分型為XY，峰高比為1∶1，提示為男性，帶毛囊的毛發(fā)檢材在Amelogenin性別基因座分型為XX，提示為女性?？谇皇米訖z材的STR基因座為4等位基因，其基因分型為血樣和毛發(fā)檢材分型的嵌合（圖2），Amelogenin性別基因座分型為XY，且峰高比為2∶1。上述樣本在22個常染色體STR基因座和Amelogenin基因座的分型結(jié)果見表1。

在20個Y-STR分型檢測中，父親與孩子分型檢測結(jié)果一致，母親口腔拭子和血樣Y-STR分型檢測結(jié)果一致，帶毛囊的毛發(fā)檢材未檢測出Y-STR分型，基因分型結(jié)果見表2。

表1 母親血樣、口腔拭子、帶毛囊的毛發(fā)及父親、孩子（男孩）血樣的常染色體STR分型結(jié)果

圖2 母親口腔拭子常染色體STR分型

表2 母親血樣、口腔拭子及父親、孩子（男孩）血樣Y-STR分型結(jié)果

2 討 論

在生物學(xué)上，嵌合體分同源嵌合體和異源嵌合體。同源嵌合體大部分由自身染色體畸變或基因突變導(dǎo)致，且嵌合成分來自同一受精卵。嵌合成分來自不同的受精卵所產(chǎn)生的嵌合體為異源嵌合體，可分為孿生子異源嵌合體[3]、人造異源嵌合體和四配子異源嵌合體。其中孿生子異源嵌合體主要是由于胎盤的融合或子宮內(nèi)造血干細胞的相互交換而導(dǎo)致的，但僅限于表現(xiàn)為血細胞中有兩種不同來源合子的細胞嵌合；大部分人造異源嵌合體是醫(yī)源性的，是由于輸血、器官移植或異源骨髓移植導(dǎo)致的，也可能由于其他原因?qū)е?；四配子異源嵌合體是由兩個受精卵融合并發(fā)育成為一個個體導(dǎo)致的，這種嵌合個體在遺傳學(xué)上含有兩種獨立的細胞系，如46，XX/46，XY細胞系。人類四配子異源嵌合體目前文獻報道已發(fā)現(xiàn)的有4種形成機制[4]。第一種是由于兩個胚胎融合形成嵌合體現(xiàn)象；第二種是由于母親生殖細胞孤雌分裂，形成兩個相同的配子，最后通過雙受精作用形成嵌合體現(xiàn)象；第三種是由于產(chǎn)雄孤雌生殖而形成嵌合體現(xiàn)象；第四種是由于卵子和第二極體通過雙受精作用形成嵌合體現(xiàn)象。筆者曾在親子鑒定過程中發(fā)現(xiàn)兩種嵌合體現(xiàn)象，分別為兩個胚胎融合和母親生殖細胞孤雌分裂形成兩個相同的配子雙受精[5]形成嵌合體的案例。兩個胚胎融合患者常染色體STR檢測顯示含有父源和母源各兩個不同的等位基因，也就是說四個等位基因分別來源于四個配子，此案例為此情形，也即第一種形成機制導(dǎo)致的。2002年，YU等[6]也報道了1例由胚胎融合導(dǎo)致的嵌合體案例。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)輔助生殖技術(shù)的發(fā)展，體外受精和卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射等技術(shù)在一定程度上增加了胚胎融合的風(fēng)險，使得嵌合體現(xiàn)象更為常見[7]。

本案例中母親口腔拭子STR檢測結(jié)果顯示有四個等位基因，并且為毛發(fā)分型和血樣分型的嵌合，因此證明口腔拭子有兩個細胞群，且核型為46，XX/46，XY，為四配子異源嵌合體。這種情況可解釋為其父親的兩個精子（X精子和Y精子）同時與其母親的兩個卵子結(jié)合，形成兩個受精卵，然后兩個受精卵融合成一個受精卵，從而形成有兩個細胞系的四配子異源嵌合體。其中46，XX細胞群發(fā)育成毛發(fā)，46，XY細胞群發(fā)育成血細胞，兩個細胞群46，XX/46，XY共同發(fā)育為口腔脫落細胞。由兩個受精卵融合后發(fā)育成的個體，兩個細胞群在口腔細胞中表現(xiàn)出來，且血細胞沒有兩個細胞群的這種四配子異源嵌合體案例目前報道較少見[8]。

人類嵌合體現(xiàn)象隨著醫(yī)學(xué)輔助生殖技術(shù)的不斷發(fā)展而越來越常見，在親子鑒定實踐中，值得注意的是，當嵌合體者的血液中只存在1種細胞群的時候，容易給出錯誤的鑒定意見。在親子鑒定或個體識別中，如若遇到多等位基因現(xiàn)象，應(yīng)該引起注意，首先排除實驗室污染導(dǎo)致，可通過反復(fù)實驗，更換不同試劑盒擴增來驗證，若仍為多等位基因現(xiàn)象，分析其發(fā)生機制，判斷為嵌合體再作出定論，以保證鑒定意見的準確性和科學(xué)性。

[1]SEABRIGHT M.A rapid banding technique for human chromosomes[J].Lancet，1971，2（7731）：971-972.

[2]公安部物證鑒定中心.法庭科學(xué)DNA實驗室檢驗規(guī)范：GA/T 383-2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[3]VAN DIJK B A，BOOMSMA D I，DE MAN A J. Blood group chimerism in human multiple births is not rare[J].Am J Med Genet，1996，61（3）：264-268.

[4]MALAN V，VEKEMANS M，TURLEAU C.Chimera and other fertilization errors[J].Clin Genet，2006，70（5）：363-373.

[5]陳芳，陳儉，付穎，等.親子鑒定中四配子異源嵌合體報道1例[J].中國司法鑒定，2014（4）：120-125.

[6]YU N，KRUSKALL M S，YUNIS J J，et al.Disputed maternity leading to identification of tetragametic chimerism[J].N Engl J Med，2002，346（20）：1545-1552.

[7]FRIEDLER S，MASHIACH S，LAUFER N.Births in Israel resulting from in-vitro fertilization/embryo trans-fer，1982-1989：National Registry of the Israeli Association for Fertility Research[J].Hum Reprod，1992，7（8）：1159-1163.

[8]WATKINS W M，YATES A D，GREENWELL P，et al.A human dispermic chimaera first suspected from analyses of the blood group gene-specified glycosyltransferases[J].J Immunogenet，1981，8（2）：113-1288.

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.04.034

1004-5619（2017）04-0448-04

2017-04-26）

（本文編輯：張素華）

翁海松（1985—），男，主要從事法醫(yī)物證學(xué)鑒定；E-mail：wenghs@dazd.cn

陳芳，女，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證學(xué)鑒定；E-mail：chen-fang@zju.edu.cn