楊 欽，田倩倩，孫順利，劉向云，楊亞兵，王秋靈，孫向東，李 娜，劉 微，王 茹

YANG Qin，TIAN Qian-qian，SUN Shun-li，LIU Xiang-yun，YANG Ya-bing，WANG Qiu-ling，SUN Xiang-dong，LI Na，LIU Wei，WANG Ru

高脂膳食對超重和肥胖小鼠血清和脂肪組織內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)的影響

楊 欽，田倩倩，孫順利，劉向云，楊亞兵，王秋靈，孫向東，李 娜，劉 微，王 茹

YANG Qin，TIAN Qian-qian，SUN Shun-li，LIU Xiang-yun，YANG Ya-bing，WANG Qiu-ling，SUN Xiang-dong，LI Na，LIU Wei，WANG Ru

目的：探討高脂膳食誘導下，不同肥胖程度小鼠血清內(nèi)源性大麻素（endocannabinoids，EC）、脂肪組織大麻素受體、合成酶和降解酶的變化趨勢及其機制。方法：6周齡C57BL/6J雄性小鼠隨機分為對照組（n=25，喂食普通飼料）和高脂誘導組（n=205，喂食D12492高脂飼料，脂肪提供熱量占60%），誘導時間10周。對照組隨機挑選10只平均體重記為X（g）；高脂誘導組按體重分類標準分4組（每組隨機挑選10只）：抵抗組（X×0.9＜體重≤X×1.1）、超重組（X×1.1＜體重≤X×1.2）、肥胖組（X×1.2＜體重≤X ×1.5）和嚴重肥胖組（體重＞X×1.5）。采用高效液相色譜法檢測血清大麻素含量，熒光定量PCR檢測脂肪組織大麻素受體、合成酶和降解酶表達變化。結果：1） 從對照組、超重組、肥胖組到嚴重肥胖組，血清大麻素平均水平依次升高，但只有嚴重肥胖組血清2-AG、AEA和OEA與對照組相比顯著升高（P＜0.01，P＜0.05和P＜0.05）。2）（超重+肥胖+嚴重肥胖組）VS對照組，脂肪組織大麻素受體CB1，CB2 mNRA表達下降（P＜0.05和P＜0.05），2-AG合成酶DAGLβ表達上升（P＜0.01）。3）將超重、肥胖和嚴重肥胖組小鼠綜合起來分析發(fā)現(xiàn)，血清2-AG與體重（P=0.004，r=0.586）和內(nèi)臟脂肪量（P=0.001，r=0.647）均呈中度正相關，而血清AEA僅與內(nèi)臟脂肪量呈正相關（P=0.034，r=0.453）。4）內(nèi)臟脂肪量與脂肪組織2-AG合成酶ABHD4（P=0.022，r=－0.466）、DAGLβ（P=0.019，r=－0.475）、降解酶ABHD6（P=0.000，r=－0.738）、MAGL（P=0.012，r=－0.505）、AEA和OEA的共同降解酶NAAA（P=0.003，r=－0.586）mRNA表達呈負相關。結論：高脂誘導下，超重、肥胖和嚴重肥胖組小鼠血清循環(huán)大麻素水平依次升高，脂肪組織大麻素受體CB1表達依次下降，大麻素合成酶與降解酶與內(nèi)臟脂肪量均呈負相關。因此我們推測：對于相同誘導時間下的不同肥胖程度小鼠，大麻素合成酶表達下調(diào)的速度低于降解酶和CB1受體的下調(diào)速度，使得循環(huán)大麻素水平升高，這些因素共同促成了肥胖相關的外周ECS活化。

高脂膳食；內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)；2-AG；AEA；OEA；肥胖

前言

內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)（The Endocannabinoid System，ECS）是一種廣泛存在于細胞間的信號傳導系統(tǒng)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護、獎賞系統(tǒng)激活、攝食促進、能量平衡調(diào)節(jié)、體重維持及鎮(zhèn)痛方面起重要作用［3，12］。

第一代大麻素受體亞型I（Cannabinoid Receptor 1，CB1）抑制劑利莫那班（Rimonabant）可顯著改善超重、肥胖和II型糖尿病患者糖脂代謝紊亂的實驗提示［4，17］：抑制CB1對治療這些疾病有效，但ECS是一個復雜的系統(tǒng)，其與肥胖的因果關系并不清楚。比較一致的研究認為，肥胖者外周血循環(huán)大麻素水平是升高的［2，6］，但CB1表達尚無定論［2，6，15，23］。大麻素底物合成增加、大麻素受體和合成酶表達上調(diào)、降解酶表達下調(diào)均可以促成ECS的活化。研究發(fā)現(xiàn)，肥胖者ECS活化與脂肪量變化密切相關，其脂肪組織大麻素降解酶脂肪酸酰胺水解酶（Fatty Acid Amide Hydrolase，F(xiàn)AAH）表達下降，并且與外周血循環(huán)大麻素水平呈現(xiàn)顯著的負相關關系［6］。此外，大麻素合成酶N-?；字窪（N-acylphosphatidylethanolamine phospholipase D，NAPE-PLD）對脂肪形成過程有顯著影響［9］。這些結果表明，作為重要的能量存儲器官，肥胖者脂肪組織與ECS活化密切相關。那么，相同的高脂誘導時間下，處于超重、肥胖和嚴重肥胖狀態(tài)的小鼠脂肪組織ECS表達如何變化？目前有關研究甚少。

鑒于此，本研究首先探討高脂膳食引起的體重增長過程中，主要的3種大麻素2-花生四烯酸甘油酯（2-Arachidonoylglycerol，2-AG）、花生四烯酸乙醇胺（Anandamide，AEA）和油酰乙醇胺（N-Oleylethanolamine，OEA）在外周循環(huán)血的變化；然后分析脂肪組織大麻素受體、合成酶和降解酶的表達變化，并探討ECS與體重、體脂之間的相關性。結合ECS隨體重增長所發(fā)生的變化來分析其活化機制。

1 材料和方法

1.1 建立高脂誘導的肥胖小鼠模型

首先構建高脂飲食誘導肥胖小鼠模型。6周齡C57BL/6J雄性小鼠（體重20.26±1.38g）由上海第二軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，普通飼料適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為對照組（n=25，喂食普通飼料）和高脂誘導組（n=205，喂食D12492高脂飼料，脂肪提供熱量占60%，Research Diet公司），自由飲水飲食，誘導時間10周。對照組隨機挑選10只平均體重記為X；高脂誘導組按體重變化分4組（每組隨機挑選10只）：高脂誘導-抵抗組（n=10，X×0.9＜體重≤X×1.1）、高脂誘導-超重組（n=10，X ×1.1＜體重≤X×1.2）、高脂誘導-肥胖組（n=10，X×1.2＜體重≤X ×1.5）和高脂誘導-嚴重肥胖組（n=10，體重＞X×1.5），體重分組參照人類體重評判標準［20，21］。各組小鼠摘眼球取血后，頸椎脫臼法處死取材，脂肪組織（包括雙側(cè)腎周和附睪脂肪）一部分存放于4%多聚甲醛溶液，另一部分－80℃保存。計算體脂率［體脂率=（左右腎周脂肪+左右附睪脂肪）/體重×100%］。

1.2 血清EC測定

血清大麻素送至第二軍醫(yī)大學藥學院實驗室測定（質(zhì)譜儀：AB Sciex Triple Quad 6500+，液相：Eksigent microLC 200 plus）。色譜柱：HaLO TM C18（2.7 μm，90A，0.5×50 mm）；流動相：A-水溶液，B-乙腈溶液；液相條件：20%A～80%B洗脫10 min，流速為40 μl/min；進樣量2 μl，柱溫為35℃。質(zhì)譜條件：CUR 35V， IS +5 500V， CAD 10V，TEM 550℃， Gas1 55V， Gas2 55V；MRM：2-AG 定量離子對為379.3/287.3，CE為20V，DP為 104V；AEA定量離子對為348.3/62.0，CE為35V，DP為130V；OEA定量離子對為300.1/62.0，CE為18，DP為112V。

1.3 血糖血脂測定

采用ELISA試劑盒測定小鼠空腹血糖含量（Fasting Blood-Glucose，F(xiàn)BG，Catalog：CK-E00592M，R&D公司）。采用微孔板分光光度儀（BioTek Instructents公司）測定甘油三酯（Triglycerides，TG，Catalog：K622-100，BioVision公司）、高/低密度脂蛋白膽固醇（High/Low Density Lipoprotein Cholesterol，H/LDL-C，Catalog：MAK045，Sigma公司）含量。

1.4 Real Time PCR

冰上取脂肪組織約50mg，加入1ml Trizol（Lot：117206，invitrogen公司），先用75%酒精處理剪刀，再用DEPC （Diethyl Pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯）處理水浸泡后剪碎組織，機械勻漿打碎，按說明書方法提取組織總RNA。采用微孔板分光光度儀（BioTek Instructents）測定RNA濃度和OD260/280的值。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒（catalog：K1622，Thermo Scientific公司）和熒光定量試劑盒（Lot：16385700，Roche公司）說明書進行逆轉(zhuǎn)錄和PCR上機操作（ABI StepOne Plus，Applied Biosystems公司），引物序列見表1，以GAPDH作為內(nèi)參引物。

表1 RT-PCR引物序列Table 1 Primer Sequences Used for Real-time PCR

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

各檢測數(shù)據(jù)錄入Excel 2013，結果以平均數(shù)±標準差（±SD）表示。組間兩兩比較采用SPSS19.0軟件進行獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）；采用Pearson積差相關分析探討變量之間相關性。

2 結果

2.1 高脂誘導下小鼠形態(tài)學指標與血糖、血脂變化

從誘導第4周起，高脂膳食小鼠體重與對照組出現(xiàn)顯著性差異（P＜0.01）；到第10周結束時，共有148只小鼠體重大于對照組平均值的20%，誘導肥胖成功率為72.20%（圖1A）。圖1B顯示了不同肥胖程度小鼠的體重變化過程。進一步的分析表明（圖1C），高脂誘導下小鼠體重增加主要表現(xiàn)在體脂率的增加。此外，HE染色顯示，抵抗組小鼠附睪脂肪組織細胞大小與對照組差別不大，而超重、肥胖、嚴重肥胖小鼠脂肪細胞則較大（圖1D）。表2顯示，高脂引起小鼠空腹血糖（P＜0.05）、高密度脂蛋白膽固醇（P＜0.01）和低密度脂蛋白膽固醇（P＜0～0.05）顯著升高。這表明，高脂誘導引起的體重增長過程中，小鼠出現(xiàn)肥胖相關的糖、脂代謝紊亂。

由于高脂誘導-抵抗組小鼠體重并未顯著增加，其內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄表達亦與超重、肥胖和嚴重肥胖組表達趨勢有所不同。因此，本研究在分析高脂誘導的體重增加過程中ECS表達變化時，并未納入抵抗組小鼠，選取超重、肥胖、嚴重肥胖組小鼠綜合起來作為高脂誘導組，對照組仍不變。

2.2 肥胖小鼠血清EC含量比較

圖2顯示，高脂誘導組與對照組相比，小鼠血清大麻素平均水平呈現(xiàn)升高趨勢，但未達到統(tǒng)計學意義（圖2A）。當小鼠處于嚴重肥胖狀態(tài)時，3種主要的大麻素2-AG、AEA和OEA水平均比對照組顯著升高（圖2 B，P＜0.01，P＜0.05和P＜0.05）。ANOVA分析顯示，嚴重肥胖組2-AG水平比超重組和肥胖組都高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對于高脂誘導組，小鼠血清2-AG含量與體重和內(nèi)臟脂肪量均呈正相關（P＜0.01）；而AEA僅與內(nèi)臟脂肪量呈正相關（P＜0.05）。這種相關關系提示，循環(huán)大麻素水平與內(nèi)臟脂肪量存在密切聯(lián)系，同時脂肪組織也是ECS活化的重要部位，因此，我們接下來分析了脂肪組織EC相關受體、合成酶及降解酶的表達趨勢。

圖1 高脂誘導下小鼠形態(tài)學指標變化示意圖Figure 1. Morphological Changes of Mice Fed on High Fat Diet

圖2 不同肥胖程度小鼠血清大麻素比較及其與體重體脂的相關性分析示意圖Figure 2. Comparison of Serum Endocannabinoid Levels and Their Relation with Body Weight and Visceral Adipose Mass among Varying Degrees of Obese Mice

2.3 高脂誘導下小鼠脂肪組織EC受體、合成酶和降解酶轉(zhuǎn)錄表達

本研究分析的脂肪組織ECS包括：1）大麻素受體及其類似物：CB1、CB2、GPR18（G Protein-Coupled Receptor 18）、GPR55、GPR119、TRPV1（Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily V Member 1）、PPARδ/β （Peroxisome Proliferator Activated Receptors δ/β）；2）大麻素合成酶：DAGLα/β（Diacylglycerol Lipase α/β）、NAPE-PLD和ABHD4（α/ β-Hydrolase 4）；3）大麻素降解酶：ABHD6、ABHD12、MAGL（Monoacylglycerol Lipase）、FAAH和NAAA（N-Acylethanolamine Acid Amidase）。這些基因在脂肪組織的表達趨勢并不相同，部分表達無變化，或者表達豐度的基因未列出。圖3（A）顯示，與對照組相比，高脂誘導組CB1、CB2表達顯著下調(diào)，而2-AG的合成酶DAGLβ顯著上調(diào)。圖3（B）顯示，隨著體脂含量增加（即從超重到嚴重肥胖的遞增過程中），CB1、PPARδ、ABHD6表達呈下調(diào)趨勢；DAGLβ、MAGL、NAAA則是先上調(diào)后下調(diào)；而CB2表達則是先下調(diào)后趨于正常；FAAH表達盡管趨勢不一，但在超重組和嚴重肥胖組均表現(xiàn)出顯著下調(diào)趨勢。這提示ECS各成分，在肥胖的不同形成階段，其表達變化亦各有特點。

2.4 高脂誘導小鼠脂肪組織EC受體、合成酶、降解酶表達與脂肪量的相關性分析

圖3 不同肥胖程度小鼠腎周脂肪組織EC受體、合成酶及降解酶表達分析柱狀圖Figure 3. Expression of Endogenous Cannabinoid Receptors，Synthetic Enzyme and Degrading Enzyme among Varying Degrees of Obese Mice

圖4（A）顯示，在高脂誘導引起的體重增加過程中，CB2 mRNA相對表達水平與內(nèi)臟脂肪量呈正相關（P＜0.01）；而ABHD4、DAGLβ、ABHD6、MAGL、NAAA mRNA相對表達水平分別與內(nèi)臟脂肪量呈負相關（P＜0.05，圖4B～F）。結果提示，隨肥胖加重，脂肪組織CB2介導的炎癥過程可能加重；而EC合成酶，降解酶下調(diào)提示，大麻素合成能力與降解能力均下降。

3 分析與討論

本研究首次觀察了高脂誘導下，不同體脂的小鼠內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在外周血和脂肪組織的表達情況。結果發(fā)現(xiàn)，1）隨高脂誘導的體重增加，血清大麻素2-AG、AEA和OEA水平均出現(xiàn)升高趨勢，且2-AG、AEA與小鼠體脂呈正相關關系，而對照組不存在這種關系；2）對于超重、肥胖和嚴重肥胖小鼠，脂肪組織大麻素受體CB1、CB2表達下調(diào)，2-AG合成酶DAGLβ表達上調(diào)；隨肥胖程度加重，大麻素受體CB1、PPARδ和降解酶ABHD6表達不斷下調(diào)； 3）大麻素受體CB2表達與內(nèi)臟脂肪量呈正相關，而合成酶ABHD4、DAGLβ、降解酶ABHD6、MAGL、NAAA表達與脂肪量均呈負相關。這些結果提示，在肥胖形成過程中，機體ECS各成分變化并不相同，盡管CB1表達不斷下調(diào)，2-AG合成酶DAGLβ的整體上調(diào)和降解酶ABHD6的持續(xù)下調(diào)，可能是促成肥胖ECS活化的重要原因，而嚴重肥胖組外周血3種大麻素的顯著升高，則是ECS合成酶與降解酶表達紊亂的綜合結果。

研究認為，肥胖者體內(nèi)中樞和外周ECS均處于活化狀態(tài)，這種活化與循環(huán)大麻素水平、大麻素受體、合成酶和降解酶表達變化均有相關［6，12］。盡管肥胖者血清循環(huán)大麻素水平升高已被驗證，但隨肥胖加重，不同種類的血清大麻素如何變化及其原因并無研究。機體肝臟、脂肪組織、骨骼肌、胰腺均存在一套完整的ECS系統(tǒng)［18］，這些組織的器官大麻素水平可能對血清循環(huán)大麻素含量產(chǎn)生影響，而大麻素合成酶與降解酶表達異常，可能是大麻素升高的直接原因。在高脂膳食引起的肝臟ECS活化過程中，F(xiàn)AAH表達下降，被認為是肝臟AEA增多的重要原因［16］。鑒于循環(huán)大麻素含量與內(nèi)臟脂肪量存在的顯著相關關系，我們推測，脂肪組織可能是循環(huán)大麻素的來源之一，脂肪組織大麻素合成酶與降解酶的表達變化，同樣可能與脂肪量存在相關關系。

肥胖者外周循環(huán)2-AG和AEA均有升高［6，14］，這兩者是研究最為廣泛的大麻素，2-AG與CB1親和力不如AEA，但2-AG含量比AEA高很多，因此，被認為是ECS發(fā)揮正常生理功能的主要大麻素。AEA可促進脂肪細胞分化，引起PPARγ和CB1表達上調(diào)［11］，并促進脂形成；OEA與PPARα和CB2的結合，一方面促進白色脂肪棕色化和產(chǎn)熱，另一方面，可減弱TNF-α誘導的炎癥［10.19.22］。由此可見，OEA的生理功能與2-AG和AEA是相反的。盡管高脂誘導下，3種主要的大麻素均有升高趨勢，這可能是外周ECS活化的重要表現(xiàn)。但僅有2-AG在不同組別間有顯著性差異，這提示，隨肥胖加重，2-AG的變化趨勢更為明顯，其合成酶DAGLβ在整個高脂誘導過程中的上調(diào)，則與循環(huán)2-AG上升對應。2-AG與體重和體脂的正相關關系與前人研究一致，同一份研究還發(fā)現(xiàn)，2-AG與肥胖者胰島素水平呈正相關，與葡萄糖輸注率呈負相關［2］，這些結果暗示，在肥胖不斷加重的過程中，2-AG與脂肪量增加和胰島素抵抗的形成有著密切關系。

圖4 EC相關酶與內(nèi)臟脂肪量的相關性分析示意圖Figure 4. Correlation Analysis of the Endocannabinoid System Related Enzyme and Visceral Adipose Mass

CB1是研究最多的大麻素受體，但CB1在脂肪組織表達卻無定論，認為表達升高、不變、降低的結果均存在［2］。盡管CB1受體抑制劑利莫那班可減少肥胖者攝食、增加能量消耗、減輕體重［4］，但最新研究提示，CB1受體的持續(xù)活化狀態(tài)并不會引起肥胖或糖尿病［13］。這說明，CB1受體活化不是導致肥胖的主因，同時提示，ECS是伴隨著肥胖形成而被激活的。綜合血清循環(huán)大麻素水平變化，我們推測，在肥胖形成并不斷加重的過程中，外周循環(huán)大麻素的升高速度強于CB1受體的下調(diào)強度，導致了外周ECS的活化。

CB2受體表達在超重組下降最多，隨后趨于正常，并且CB2表達與內(nèi)臟脂肪量呈顯著正相關，這提示，CB2介導的炎癥和胰島素抵抗［5］，伴隨著肥胖進程而不斷加重。在高脂誘導肥胖過程中，CB2抑制可改善高脂膳食引起的胰島素抵抗［1］，本研究超重階段的CB1表達下調(diào)，很可能也是機體通過CB2下調(diào)來改善胰島素抵抗的適應性調(diào)節(jié)，隨肥胖加重，這種適應性調(diào)節(jié)被打破，CB2表達又呈現(xiàn)上調(diào)趨勢。PPARδ活化可誘導脂肪酸分解代謝和適應性產(chǎn)熱所需的基因表達［7］，隨肥胖進展，PPARδ表達不斷下調(diào)，但OEA含量卻不斷增多，因此，OEA-PPARδ信號的促脂肪分解功能是否受到抑制仍需進一步實驗證實。

隨后，我們分析了脂肪組織大麻素相關合成酶與降解酶表達變化。2-AG的合成酶包括ABHD4和DAGL-α/β，降解酶有ABH6和MAGL；AEA和OEA的合成酶包括NAPEPLD，降解酶包括ABHD12、FAAH和NAAA［8］。DAGLβ表達上升提示，2-AG合成增多；但ABHD4和DAGLβ均與內(nèi)臟脂肪量呈負相關，這從另一方面提示，隨肥胖程度加重，2-AG合成增加的速度減慢。這同樣可能是體重增加過程中，機體對DAGLβ表達過高的一種應激性調(diào)節(jié)。ABHD6、MAGL、FAAH、NAAA均是大麻素降解相關酶［8］，但其表達并不一致。MAGL與NAAA表達均是先上升后下降，提示，兩者對高脂誘導的敏感性較高，在超重時期即顯著上調(diào)；ABHD6則是持續(xù)下調(diào)，并且ABHD6、MAGL和NAAA均與內(nèi)臟脂肪量呈顯著負相關，這些結果提示，高脂誘導對脂肪組織EC合成酶與降解酶的影響并不一致；脂肪量越多，脂肪組織的大麻素降解功能越呈現(xiàn)下降趨勢，而這些酶的表達失衡，可能是促成脂肪組織ECS活化的原因之一。

綜上所述，本研究認為，在高脂誘導引起的體重增加過程中，ECS系統(tǒng)的活化程度與脂肪量存在密切關聯(lián)。本研究結果提示，脂肪組織ECS活化是伴隨著肥胖而發(fā)生的，是肥胖相關代謝紊亂引起的連帶效應，而不是先于肥胖發(fā)生。根據(jù)以上結果，我們認為，肥胖者ECS活化主要表現(xiàn)在循環(huán)大麻素水平的升高，而這種異常與脂肪組織大麻素合成酶和降解酶表達失衡相關。盡管兩種酶都與脂肪量負相關，大麻素合成酶下調(diào)速度低于降解酶的下調(diào)速率，促成了大麻素水平的升高。該研究將有助于深層次理解肥胖者脂肪組織ECS活化機制，為尋找以ECS為靶點的減控體重方法提供科學依據(jù)。

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Effects of High Fat Diet on Endocannabinoid System in Serum and Adipose Tissue of Overweight and Obese Mice

Objective：To explore the changes of endocannabinoids，related receptor，synthetic enzyme and degrading enzyme in mice of different obese status via high fat diet. Methods：C57BL/6J male mice were randomly divided into control group （n=25，fed normal diet） and high fat diet group（n=205，fed D12492，60% fat）. For further experiments，10 mice were randomly selected from control group and recorded average body weight（BW） as X（g）；for mice fed on high fat diet，four groups were divided：resistant group （X×0.9＜BW≤X×1.1）；overweight group （X×1.1＜BW≤X×1.2）；obese group （X×1.2＜BW≤X×1.5）；severe obese group （BW＞X×1.5）. High performance liquid chromatography （HPLC） and RT-PCR were used to detect endocannabinoids levels and expression of related endogenous cannabinoid receptors，synthetic enzyme and degrading enzyme，respectively. Results：1） from control group to severe obese group，serum endocannabinoids increased successively，however，only 2-AG，AEA and OEA in severe group were signif i cantly higher than control group （P＜0.01，P＜0.05 andP＜0.05）. 2） for overweight，obese and severe group mice，adipose CB1，CB2 mRNA level were lower than control group（P＜0.05 andP＜0.05），while 2-AG synthetic enzyme DAGLβ mRNA level were higher than control group （P＜0.01）. For overweight，obese and severe group mice，3） serum2-AG showed moderate positive correlation with BW （P=0.004，r=0.586） and visceral adipose mass （P=0.001，r=0.647）；while serum AEA were positively correlated with visceral adipose mass （P=0.034，r=0.453） only. 4） visceral adipose masswere negatively correlated with synthetic enzyme ABHD4（P=0.022，r=－0.466），DAGLβ（P=0.019，r=－0.475），degrading enzyme ABHD6（P=0.000，r=－0.738），MAGL （P=0.012，r=－0.505） and NAAA （P=0.003，r=－0.586） mRNA level. Conclusion：serum endocannabinoids increased successively as body weight increased during high fat diet induced obesity，while adipose tissue CB1 mRNA level showed a downward trend. Moreover，both endocannabinoid synthase and degrading enzymes showed negatively correlation with visceral adipose mass. Therefore，we conclude that for mice of different obese degrees under the same HFD induction time，descending rate of cannabinoid synthase is lower than descending rate of degrading enzymes and adipose CB1 expression level，which contributes to the rise of circulating endocannabinoids and fi nally activates the peripheral ECS.

high fat diet；endocannabinoid system；2-AG；AEA；OEA；obesity

G804.7

A

1002-9826（2017）05-117-08

10. 16470/j. csst. 201705014

2016-10-17；

2017-05-20

國家自然科學基金面上資助項目（81472148） 。

楊欽，男，在讀博士研究生，主要研究方向為低氧、運動營養(yǎng)與健康促進，Email：yangqinsus@163.com。

王茹，女，副教授，博士，博士研究生導師，主要研究方向為運動免疫學、運動營養(yǎng)學、低氧與健康促進，Email：wangru0612@163.com。

上海體育學院，上海 200438 Shanghai University of Sport，Shanghai 200438，China.