張娟，張振凌，孟冉，夏云嶺

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046；2.呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450046)

·中藥農(nóng)業(yè)·

茜草飲片趁鮮切制工藝及與傳統(tǒng)切制比較△

張娟1，2，張振凌1*，孟冉1，夏云嶺1

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046；2.呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450046)

目的：優(yōu)選茜草飲片趁鮮切制工藝并與傳統(tǒng)切制飲片進(jìn)行比較，為茜草產(chǎn)地加工炮制一體化研究提供理論依據(jù)和參考。方法：以大葉茜草素、茜草素的含量為指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)考察含水量、切片厚度、干燥溫度對(duì)茜草趁鮮切制飲片的影響，并與傳統(tǒng)切制飲片進(jìn)行大葉茜草素和茜草素的含量對(duì)比。結(jié)果：優(yōu)選出茜草飲片趁鮮切制工藝為干燥至含水量為25%、切5 mm段、70 ℃烘干；趁鮮切制飲片大葉茜草素的含量是傳統(tǒng)切制飲片的1.4倍左右，茜草素含量是傳統(tǒng)切制飲片的1.2倍左右。結(jié)論：優(yōu)選出來的趁鮮切制工藝簡(jiǎn)單、可行，趁鮮切制飲片質(zhì)量高于傳統(tǒng)炮制飲片。

茜草；趁鮮切制；傳統(tǒng)切制；大葉茜草素；茜草素

中藥茜草為茜草科植物茜草RubiaCordifoliaL.的干燥根及根莖，性寒，味苦，歸肝經(jīng)，為臨床常用中藥[1]。茜草資源分布廣泛，大多為野生資源，隨著人們對(duì)茜草資源認(rèn)識(shí)的提高，使其價(jià)值和市場(chǎng)需求也隨之增大，致使其野生資源日趨減少，近幾年河南、陜西等地不斷開展對(duì)茜草的人工栽培[2]。茜草的炮制始載于《雷公炮炙論》中“凡使茜根，用銅刀于槐砧上挫，日干，勿犯鐵并鉛”[3]。經(jīng)過歷代發(fā)展，現(xiàn)行的加工炮制過程是采集茜草根及根莖曬干后作為藥材，飲片生產(chǎn)企業(yè)再將干燥的茜草藥材“除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)透，切厚片或段，干燥”[1]，這種加工炮制方法存在“二次加工”，不僅增加成本，加大勞動(dòng)量，而且茜草黏附泥土沙石干燥后很難洗掉，長(zhǎng)時(shí)間浸泡造成茜草中蒽醌及其苷類化合物、萘醌類等易溶于水的有效成分流失，降低飲片的質(zhì)量[4]。本實(shí)驗(yàn)在建立方法并多次預(yù)試的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以大葉茜草素、茜草素的含量為指標(biāo)，考察不同的含水量、切片厚度、干燥溫度對(duì)茜草飲片質(zhì)量的影響，確定趁鮮切制茜草飲片的主要工藝參數(shù)，并與傳統(tǒng)的加工炮制方法進(jìn)行比較，為茜草產(chǎn)地加工炮制一體化提供可行性依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

QRZG-300往復(fù)式切藥機(jī)(杭春制藥設(shè)備有限公司)；DHG-9076A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；BSA224S-CW、BT25S電子天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán)科學(xué)儀器北京有限公司)；Waters 1525高效液相色譜儀、Waters2489紫外檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司)。

1.2 試劑

甲醇、乙腈為色譜純；超純水(自制)；甲醇、95%乙醇、磷酸、三乙胺、鹽酸均為分析純；大葉茜草素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110884-200604，供含量測(cè)定用)；茜草素對(duì)照品(Sigma-Aldrich Co.USA，批號(hào)：122777，純度：≥97%)。

1.3 藥材

茜草于2016年5月采集于河南嵩縣，并由河南中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)科陳隨清教授鑒定為茜草科植物茜草RubiacordifoliaL.的干燥根和根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 茜草趁鮮切制工藝及樣品制備

2.1.1 正交表選擇及因素水平設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選取含水量、切片厚度、干燥溫度為茜草趁鮮切制工藝的主要影響因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，選用L9(34)正交試驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)，見表1。

表1 茜草趁鮮切制正交試驗(yàn)因素水平表

2.1.2 趁鮮切制工藝樣品制備 鮮茜草除去泥沙和地上部分并進(jìn)行分檔，取直徑為0.5～0.8 cm的茜草根，槍水淋洗干凈，稱取9份樣品，每份50 g，按 L9(34)正交試驗(yàn)表工藝進(jìn)行切片，放入烘箱中進(jìn)行干燥，飲片編號(hào)為 1～9。

2.1.3 傳統(tǒng)切制樣品制備 參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015版一部茜草的炮制方法：除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)透，切5 mm段，70 ℃干燥。

2.2 大葉茜草素、茜素含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(25∶50∶25)；流速：1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；柱溫：30 ℃。該色譜條件使各主要成分達(dá)到較好的分離，周圍沒有雜峰干擾且出峰時(shí)間較早。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定大葉茜草素對(duì)照品3.50 mg、茜草素對(duì)照品0.27 mg分別置10 mL容量瓶中，加甲醇分別制成濃度為0.35 mg·mL-1、0.027 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取精密稱定茜草樣品粉末(過二號(hào)篩)0.5g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状?25%鹽酸(4∶1)混合溶液20 mL溶解，置水浴中加熱水解30 min，立即冷卻，加入三乙胺3 mL，混勻，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取大葉茜草素、茜草素對(duì)照品溶液1、3、5、7、9 μL分別進(jìn)樣，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品含量(μg)為橫坐標(biāo)，對(duì)峰面積積分值回歸計(jì)算，得大葉茜草素對(duì)照品的線性回歸方程為Y=5 000 000X-224 514.9，r=0.999 95；茜草素對(duì)照品的線性回歸方程為Y=265 032X-763 33，r=0.999 70。結(jié)果表明大葉茜草素對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量與峰面積積分值在0.35～3.15 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好、茜草素對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量與峰面積積分值在0.027～0.243 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液20 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定大葉茜草素、茜草素峰面積的RSD值分別為1.97%、1.56%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液20 μL，在上述色譜條件下分別在0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，測(cè)定大葉茜草素、茜草素峰面積RSD值分別為1.42%、1.22%，表明該樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一茜草粉末5份，按照“2.2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液20 μL，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣，測(cè)定大葉茜草素、茜草素峰面積RSD值分別為1.28%、0.95%，表明實(shí)驗(yàn)儀器重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取趁鮮加工炮制粗根的已知大葉茜草素和茜草素含量樣品6份，每份0.5 g，分別向6份樣品中加入大葉茜草素對(duì)照品2.49 mg和茜草素對(duì)照品0.44 mg，采用“2.2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備”制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液20 μL，在上述色譜條件下進(jìn)樣，得出峰面積積分值，計(jì)算其回收率。計(jì)算得大葉茜草素平均回收率為98.65%，RSD值為1.11%；茜草素平均回收率為98.79%，RSD值為1.60%。結(jié)果見表2。

表2 大葉茜草素、茜草素加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.2.9 茜草趁鮮切制工藝不同樣品中大葉茜草素、茜草素含量測(cè)定 取上述9份樣品按“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備，供試品溶液分別進(jìn)樣20 μL，按“2.2.1” 項(xiàng)下條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表 3，高效液相色譜圖見圖1。

表3 茜草趁鮮切制工藝樣品中大葉茜草素、茜草素含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

2.2.10 茜草趁鮮切制工藝正交試驗(yàn)結(jié)果 從表3中各樣品含量測(cè)定結(jié)果可以看出，大葉茜草素和茜草素的含量相差較大，為了計(jì)算方便及數(shù)據(jù)具有可比性和準(zhǔn)確性，因此將正交試驗(yàn)中茜草素含量放大為實(shí)測(cè)值的10倍，大葉茜草素含量為實(shí)測(cè)值，計(jì)算結(jié)果見表4。由茜草趁鮮切制工藝正交試驗(yàn)結(jié)果可知：ⅢA>ⅡA>ⅠA，Ⅲ為A因素的最優(yōu)水平，表明因素A取A3時(shí)大葉茜草素和茜草素含量最高，用同樣的方法比較其他二個(gè)因素水平的好壞，得出B2C2，又有極差RA>RC>RB，可知因素A為影響含量的主要因素。由表5方差分析可知因素A具有顯著性，優(yōu)選結(jié)果與因素水平的分析結(jié)果一致。綜上分析優(yōu)選出茜草趁鮮切制化工藝為A3B2C2，即含水量為25%，切成5 mm段，70 ℃溫度干燥。

注：A.趁鮮切制樣品圖；B.傳統(tǒng)切制樣品圖；C.對(duì)照品圖；1.茜草素；2.大葉茜草素。圖1 高效液相色譜圖

試驗(yàn)號(hào)因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果ABCⅠⅡ含水量(%)切制厚度/mm干燥溫度/℃大葉茜草素含量(%)茜草素含量(×10%)1354600.67320.7122355700.68380.7423356800.66990.7034304700.72810.8215305800.70220.8026306600.71330.7987254800.71010.7928255600.74020.8409256700.73220.829KⅠ12.032.112.13KⅠ22.142.132.14KⅠ32.182.122.08RⅠ13.46613.45313.455KⅡ12.162.332.35KⅡ22.422.382.39KⅡ32.462.332.30RⅡ16.5716.5116.52

表5 方差分析表

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

取同批次相同規(guī)格的茜草鮮藥材，按優(yōu)選出的茜草趁鮮切制工藝制備4份樣品，按傳統(tǒng)炮制茜草飲片制備4份樣品。按“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備，供試品溶液分別進(jìn)樣20 uL，按“2.2.1” 項(xiàng)下條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果趁鮮切制飲片中大葉茜草素、茜素的含量均高于傳統(tǒng)炮制飲片。結(jié)果見表6。

表6 茜草趁鮮切制飲片和傳統(tǒng)切制飲片中大葉茜草素、茜草素含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

3 討論

由于新鮮茜草含水量較高直接切制成飲片時(shí)皮部易脫離且斷面不平整，所以本實(shí)驗(yàn)考察了不同含水量對(duì)茜草切片的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)含水量高于35%時(shí)切片皮部易脫離、飲片斷面不平整，含水量低于12%時(shí)切片較困難，含水量在25%左右時(shí)飲片斷面平整且皮部不脫落，這和文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致。又考察了干燥方式對(duì)切片的影響，發(fā)現(xiàn)自然晾曬和低溫烘制對(duì)其有效成分含量影響差別不大，所以當(dāng)采收期遇到陰雨天氣時(shí)產(chǎn)地趁鮮切制前干燥可采用烘箱低溫烘制方式。

大葉茜草素為茜草中萘醌類化合物的主要有效成分之一，茜草素為茜草中蒽醌類化合物主要有效成分之一[6]。藥理實(shí)驗(yàn)研究證明茜草中蒽醌和萘醌類化合物均具有較好的抗腫瘤、抗炎免疫、解熱鎮(zhèn)痛、抗血小板凝聚等藥理作用[7-9]。本文以大葉茜草素、茜草素的含量為指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)考察含水量、切片厚度、干燥溫度對(duì)茜草趁鮮切制飲片的影響，并與傳統(tǒng)切片工藝進(jìn)行比較，結(jié)果趁鮮切制的茜草飲片中大葉茜草素和茜素的含量均高于傳統(tǒng)切制的茜草飲片，分析其原因可能是傳統(tǒng)炮制軟化過程中有效成分隨水流失，造成了有效成分的損失。此外茜草在產(chǎn)地趁鮮加工成飲片還可以減少藥材儲(chǔ)存、運(yùn)輸?shù)戎虚g環(huán)節(jié)，縮短生產(chǎn)周期，降低成本。因此建議中藥飲片生產(chǎn)企業(yè)可以開展茜草由產(chǎn)地直接加工成飲片，以保證茜草飲片的質(zhì)量。

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ComparativeStudyonFresh-cutProcessandTraditional-cutProcessforRubiacordifoliaL.

ZHANGJuan1，2，ZHANGZhenling1*，MENGRan1，XIAYunlin1

(1.HeNanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Zhengzhou450046，China；2.CollaborativeInnovationCenterforRespiratoryDiseaseDiagnosisandTreatmentChineseMedicineDevelopmentofHeNanProvince，Zhengzhou450046，China)

Objective：To optimize the fresh-cutting technology ofRubiacordifoliaL.and compare it with the traditional-cutting technology，with the purpose of providing the theoretical basis and reference for the research on the habitat processing integration.Methods：The content ofrubimaillinandalizarinasindex，an orthogonal test was applied to investigate water content dying temperature and slice thickness influenced on the fresh cutting process of madder and compared with the traditional slice.Results：Optimized the process of madder fresh cutting was follows：drying to water content 25%，cutting to 5 mm，drying with 70 degrees.The content of rubimaillin of fresh-cutting slice was about 1.4 times of traditional-cutting slice and the content ofalizarinof fresh-cutting slice was about 1.2 times of traditional-cutting slice.Conclusion：It is simple and feasible to take advantage of the fresh cut process and the quality of the fresh-cut madder pieces is better than that of the traditional processing of madder pieces.

RubiacordifoliaL.；fresh-cutting process；traditional-cutting process；rubimaillin；alizarin

科技基礎(chǔ)性工作專項(xiàng)分項(xiàng)目(2014FY111100-7)；呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心研究生科研創(chuàng)新基金項(xiàng)目(教科技[2013]638號(hào))

] 張振凌，教授，研究方向：中藥炮制學(xué)教學(xué)與研究；.E-mail：zhangzl6758@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.4.016

2016-09-20)

*[