鄒德志，楊丹，王建華，韓華銳，白小榮，張春紅，李旻輝，5*

(1.包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)特色藥用植物培育與保護(hù)工程技術(shù)研究中心，內(nèi)蒙古 包頭 014060；3.內(nèi)蒙古自治區(qū)特色道地藥材資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 包頭 014060；4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；5.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)藥研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

·基礎(chǔ)研究·

新疆假龍膽的化學(xué)成分研究與含量測(cè)定△

鄒德志1，2，3，楊丹1，王建華4，韓華銳1，2，3，白小榮1，2，3，張春紅，李旻輝1，2，3，5*

(1.包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)特色藥用植物培育與保護(hù)工程技術(shù)研究中心，內(nèi)蒙古 包頭 014060；3.內(nèi)蒙古自治區(qū)特色道地藥材資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 包頭 014060；4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；5.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)藥研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

目的：對(duì)新疆假龍膽全草進(jìn)行化學(xué)成分初步研究，并對(duì)分離得到酮類化類物進(jìn)行定量分析。方法：采用75%乙醇回流法對(duì)新疆假龍膽全草進(jìn)行提取，粗提物經(jīng)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次梯度萃取制備不同極性部分，將石油醚部分和乙酸乙酯部分浸膏分別用硅膠柱層析和葡聚糖凝膠LH-20柱層析分離純化，所得單體化合物經(jīng)EI-MS、1H-NMR、13C-NMR等光譜法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；建立高效液相測(cè)定方法測(cè)定新疆假龍膽中3個(gè)酮類化合物的含量。結(jié)果：從新疆假龍膽中分離得到6個(gè)化合物，分別為1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮(1)、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮(2)、1-羥基-3，5-二甲氧基酮(3)、木犀草素(4)、胡蘿卜素(5)和β-谷甾醇(6)；含量測(cè)定方法學(xué)結(jié)果表明1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮和1-羥基-3，5-二甲氧基酮3個(gè)酮化合物分離度較好，分別在35.7～713.4、32～1280、34.3～686 ng時(shí)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，精密度試驗(yàn)RSD分別為 0.31%、0.27%、0.25%，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的RSD分別為 1.05%、1.33%、1.58%，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的RSD分別為 2.48%、0.82%、2.63%，加樣回收率分別為 103.1%(RSD=1.25%)、100.02%(RSD=0.93%)，95.10%(RSD=2.62%)；1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮等3個(gè)化合物的含量范圍分別為 0.21%～0.28%、0.65%～0.77%、0.19%～0.15%。結(jié)論：新疆假龍膽含有黃酮類、酮類和甾醇類化合物；經(jīng)方法學(xué)考察，本研究建立的高效液相測(cè)定方法適合新疆假龍膽中1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮等3個(gè)化合物的測(cè)定；新疆假龍膽中1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮等3個(gè)化合物的含量較高。

新疆假龍膽；化學(xué)成分；黃酮；酮；含量測(cè)定

新疆假龍膽，又稱新疆阿帕斯，為龍膽科假龍膽屬植物新疆假龍膽GentianellaTurkestanorum(Gand.) Holub一年或兩年生草本植物，全草入藥，主要分布于新疆、內(nèi)蒙古等地，前蘇聯(lián)、蒙古等地也有分布[1]。新疆假龍膽是維醫(yī)常用藥材，具有清熱解毒、利濕消腫等功效，常用于關(guān)節(jié)炎的治療，民間用其全草泡茶治療感冒、發(fā)熱等癥。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和走訪調(diào)查，假龍膽屬植物全世界約有125種，我國(guó)有9種，主要分布于東北、西北、及西南部地區(qū)，其中有5種作為藥用，除了新疆假龍膽另外4種分別為：尖葉假龍膽，全草入蒙藥，味苦、性涼，具有清熱、利濕的功效；黑邊假龍膽，全草入藏藥，具有清熱解毒、去除肝膽之火的功效；紫紅假龍膽，全草入藥，味苦性寒，具有清熱利濕、解毒消腫等功效；矮假龍膽，全草入藏藥，具有清熱解毒、舒肝利膽的功效[2-4]。

目前對(duì)新疆假龍膽的研究較少，僅有對(duì)新疆假龍膽中龍膽苦苷、芒果苷、獐牙菜苦苷等環(huán)烯醚萜類化合物進(jìn)行了含量測(cè)定[5-7]，本文采用現(xiàn)代科學(xué)的提取、分離純化、鑒定及含量測(cè)定手段對(duì)新疆假龍膽干燥全草進(jìn)行了化學(xué)成分的初步研究，為闡明新疆假龍膽的化學(xué)組成，合理利用資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 儀器

UltiMate 3000 高效液相色譜儀(Thermo Fisher Scientific)；TSQ Quantum液質(zhì)聯(lián)用色譜儀(Thermo Fisher)；Labofuge 400R 離心機(jī)(Thermo Fisher Scientific)；冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；MSA224S-100-DU電子精密天平(德國(guó)賽多利斯)；KQ 300V超聲波清洗機(jī)(上海綠宇精密儀器)；RE-2000E旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮公司)；電熱恒溫水浴鍋(北京市電熱恒溫水浴鍋)；SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵(天津華鑫儀器廠)；HC.TP11B5 架盤藥物天平(量程 0～500 g，北京市宣武區(qū)天平廠)；BSZ-100餾分收集器(上海滬西儀器有限公司)。

1.2 材料

藥材：新疆假龍膽藥材于2013年購(gòu)自新疆藥材公司，經(jīng)包頭醫(yī)學(xué)院李旻輝教授鑒定為新疆假龍膽干燥全草。

試劑：石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、無(wú)水乙醇及甲醇 (分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠)；甲醇(色譜純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑三廠)；純凈水(娃哈哈純凈水)；薄層層析硅膠板(GF254，青島海洋化工廠)；柱層析硅膠(100-200、200-300目，青島海洋化工廠理化分廠)；葡聚糖凝膠(SephadexTMLH-20，GE Healthcare)，碘(分析純，成都麥卡希化工有限公司)。

2 方法

2.1 提取、分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定

2.1.1 提取、分離純化 稱取新疆假龍膽藥材粗粉2.0 kg，加70%乙醇12 L，熱回流提取2 h，過濾，殘?jiān)貜?fù)提取4次(每次加70%乙醇12 L，提取2 h)，合并濾液，減壓濃縮近干，即為70%乙醇提取浸膏。將浸膏用3倍體積水40 ℃超聲溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行梯度萃取，將各萃取液及剩余水層濃縮并冷凍干燥，分別得到石油醚部分浸膏(35 g)、乙酸乙酯部分浸膏(53 g)、正丁醇部分浸膏(82 g)和水部分浸膏(185 g)。

稱取硅膠(200～300 目，300 g)干法裝柱，將石油醚部分浸膏(30 g)溶于少量甲醇，加入硅膠(100～200目，30 g)攪拌并揮去溶劑，上樣，以流動(dòng)相石油醚-乙酸乙酯(15∶1～3∶1)為洗脫劑梯度洗脫，洗脫液用自動(dòng)部分收集器分段收集(每管15 mL)，并用薄層層析法點(diǎn)板跟蹤(薄層板：GF254；展開劑：石油醚-乙酸乙酯=7∶1；顯色：碘顯色)，將得到的組分A(20～70管合并濃縮)按上述方法重復(fù)進(jìn)行柱層析分離純化，合并20～45瓶和56～77瓶，濃縮，得到化合物1(黃色針晶，51 mg)和化合物2(黃色粉末，44 mg)。

稱取硅膠(200～300目，210 g)干法裝柱，取乙酸乙酯部分(25 g)溶于少量甲醇中，加入硅膠(100～200目，30 g)拌樣，揮去甲醇后上樣，以石油醚-乙酸乙酯(5∶1～1∶3)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液用自動(dòng)部分收集器分段收集(每管15 mL)，并用薄層層析法點(diǎn)板跟蹤(薄層板：GF254；展開劑：石油醚-乙酸乙酯=7∶1；顯色：碘顯色)，分別合并10～84、115～178管，得到組分B和C。將組分B上葡聚糖凝膠LH-20柱(取100 g，濕法裝柱)，用80%甲醇洗脫，按硅膠柱層析方法收集洗脫液，并用薄層層析法點(diǎn)板跟蹤(薄層板：GF 254；展開劑：石油醚-乙酸乙酯=3∶1；顯色：碘顯色)，合并并減壓濃縮11～33和75～94管，得到化合物3(淡黃色結(jié)晶，35 mg)和化合物4(白色粉末，15 mg)；將組分C按上述硅膠柱層析法上樣，合并35～87管，經(jīng)葡聚糖凝膠柱洗脫純化，其中3～26管減壓濃縮得到化合物5(白色粉末，8 mg)，31～54管合并得到化合物6(灰白色的粉末，10 mg)。

2.1.2 新疆假龍膽化合物結(jié)構(gòu)鑒定 化合物1：黃色針狀結(jié)晶 mp 186～187 ℃(丙酮)。IR (KBr) υmax：3200～2800、1670、1640、1608、1582、1490 cm-1。EI-MSm/z：288[M]+。1H-NMR (400 MHz，CDCl3) δ：11.98 (1H，s，C1-OH)，11.39 (1H，s，C8-OH)，7.24 (1H，d，J=8.5Hz，C6-H)，6.72 (1H，d，J=8.5 Hz，C7-H)，6.55 (1H，d，J=2.10 Hz，C4-H)，6.36 (1H，d，J=2.1 Hz，C2-H)，3.96 (3H，s，OCH3)，3.90 (3H，s，OCH3)。13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6) δ：162.9 (C-1)，97.3 (C-2)，167.5 (C-3)，93.1 (C-4)，139.9 (C-5)，120.4 (C-6)，109.3 (C-7)，154.3 (C-8)，184.6 (C-9)，157.9 (C-4a)，145.5 (C-4b)，108.2 (C-8a)，102.8 (C-8b)，57.4 (C3-OCH3)，56.2 (C7-OCH3)。數(shù)據(jù)經(jīng)鑒定與1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮數(shù)據(jù)基本符合[8]，故鑒定為1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮。

化合物2：mp 206～207 ℃(MeOH)。IR (KBr) υmax：3100～2600、1660、1610、1576、1485 cm-1。EI-MSm/z：302[M]+。1H-NMR (400 MHz，CDCl3) δ：13.9 (1H，s，C1-OH)，7.17 (1H，d，J=9.00 Hz，C6-H)，6.70 (1H，d，J=9.00 Hz，C7-H)，6.49 (1H，d，J= 2.40 Hz，C4-H)，6.32 (1H，d，J=2.40 Hz，C2-H)，3.98 (3H，s，C8-OCH3)，3.97 (3H，s，C3-OCH3)，3.87 (3H，s，C5-OCH3)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3) δ：163.6 (C-1)，97.6(C-2)，166.5 (C-3)，92.3 (C-4)，142.1 (C-5)，116.9 (C-6)，104.5 (C-7)，156.9 (C-8)，181.5 (C-9)，153.7 (C-4a)，147.6 (C-4b)，111.9 (C-8a)，104.4 (C-8b)，57.0 (C8-OCH3)，56.5 (C7-OCH3)，55.9 (C3-OCH3)。數(shù)據(jù)與1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮數(shù)據(jù)基本一致[8]，鑒定為1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮。

化合物3：黃色針狀結(jié)晶，EI-MSm/z：272.25[M]+。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)：12.83 (1H，s，1-OH)，7.82 (1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-8)，7.31 (1H，t，J=8.0 Hz，H-7)，7.24 (1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6)，6.56 (1H，d，J=2.2 Hz，H-4)，6.37 (1H，d，J=2.2 Hz，H-2)，4.04 (3H，s，OCH3)，3.90 (3H，s，OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CDCl3)：180.8 (C=0)，166.7 (C-3)，163.3 (C-l)，157.6 (C-4a)，148.3(C-5)，146.3 (C-4b)，123.6 (C-7)，121.5 (C-8a)，116.7 (C-8)，115.6 (C-6)，103.9 (C-4b)，97.5 (C-2)，92.8 (C-4)。數(shù)據(jù)與1-羥基-3，5-二甲氧基酮數(shù)據(jù)基本一致[9]，故鑒定為1-羥基-3，5-二甲氧基酮。

化合物4：白色粉末，mp 328～330 ℃(乙醇)。EI-MSm/z：286[M]+。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ：12.98 (1H，s，C5-OH)，10.79 (1H，s，C7-OH)，9.88 (1H，s，C3′-OH)，9.38 (1H，s，C4′-OH)，7.43 (1H，dd，J= 8.2，2.2 Hz，C6′-H)，7.41 (1H，d，J= 2.22 Hz，C2′-H)，6.92 (1H，d，J=8.16 Hz，C5′-H)，6.67 (1H，s，C8-H)，6.46 (1H，d，J=2.01 Hz，C3-H)，6.20 (1H，d，J=2.01 Hz，C6-H).13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：164.3 (C-2)，103.3 (C-3)，181.8 (C-4)，157.6 (C-5)，99.2 (C-6)，164.4 (C-7)，94.2 (C-8)，161.6 (C-9)，104.0 (C-10)，119.4 (C-1′)，113.5 (C-2′)，150.0 (C-3′)，146.1 (C-4′)，116.4 (C-5′)，121.6 (C-6′)。數(shù)據(jù)與木犀草素基本數(shù)據(jù)一致[8]，故化合物4鑒定為木犀草素。

化合物5：無(wú)色顆粒狀結(jié)晶，mp 300～302 ℃。該化合物硫酸-乙醇顯色顯紫紅色，長(zhǎng)時(shí)間放置變成灰綠色，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)該化合物為甾體苷類化合物。EI-MSm/z：576[M]+。1H-NMR (400 MHz，CDCl3) δ：5.33 (1H，H-6)，4.42 (1H，t，H-3)，4.22 (1H，d，H-1′)；13C-NMR (100 MHz，CDCl3) δ：38.8 (C-1)，29.7 (C-2)，77.2 (C-3)，40.6 (C-4)，140.9 (C-5)，121.7 (C-6)，33.8 (C-7)，31.9 (C-8)，50.1 (C-9)，25.9 (C-10)，21.1 (C-11)，28.3 (C-12)，42.3 (C-13)，56.7 (C-14)，24.3 (C-15)，42.3 (C-16)，55.9 (C-17)，12.1(C-18)，19.6 (C-19)，36.7 (C-20)，19.4 (C-21)，36.0 (C-22)，37.3 (C-23)，45.6 (C-24)，29.2 (C-25)，19.1 (C-26)，20.2 (C-27)，23.1 (C-28)，12.3 (C-29)，101.3 (C-1′)，73.9 (C-2′)，77.4 (C-3′)，70.6 (C-4′)，77.3 (C-5′)，61.6 (C-6′)。數(shù)據(jù)與胡蘿卜苷數(shù)據(jù)對(duì)照基本一致[10]，故確定化合物5為胡蘿卜苷。

化合物6：白色針狀結(jié)晶，mp 119～121 ℃。10% 硫酸乙醇溶液顯色呈紫紅色斑點(diǎn)。EI-MSm/z：414 (M+)。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ：5.32 (1H，6-H)，4.42 (1H，t，3-H)，4.21 (1H，d，1′-H)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6) δ：38.3 (C-1)，29.3 (C-2)，76.8 (C-3)，40.3 (C-4)，140.4 (C-5)，121.2 (C-6)，33.3 (C-7)，31.4 (C-8)，49.6 (C-9)，25.5 (C-10)，20.6 (C-11)，27.8 (C-12)，41.8 (C-13)，56.2 (C-14)，23.9 (C-15)，41.7 (C-16)，55.4 (C-17)，11.7 (C-18)，19.1 (C-19)，36.4 (C-20)，19.0 (C-21)，35.4 (C-22)，36.8 (C-23)，45.1 (C-24)，28.8 (C-25)，18.9 (C-26)，19.7 (C-27)，22.6 (C-28)，11.8 (C-29)，102.5 (C-1′)，73.4 (C-2′)，76.9 (C-3′)，70.0 (C-4′)，76.7 (C-5′)，61.0 (C-6′)。數(shù)據(jù)與β-谷甾醇數(shù)據(jù)基本一致[11]，故鑒定為β-谷甾醇。

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C8(4.6 mm×150 mm，5 μm)柱；流動(dòng)相：甲醇-0.05%磷酸水 (65∶35)；流速：1.0 mL· min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：室溫。理論板數(shù)不低于3000。

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按以上色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。從圖1、圖2可以看出，1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮等3個(gè)酮化合物的分離度較好。

注：1.1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮;2.1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮;3.1-羥基-3，5-二甲氧基酮。圖1 對(duì)照品的液相色譜圖

注：1.1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮;2.1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮;3.1-羥基-3，5-二甲氧基酮。圖2 供試品的液相色譜圖

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮1.07 mg、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮0.96 mg和1-羥基-3，5-二甲氧基酮1.03 mg標(biāo)準(zhǔn)品置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，配制成濃度分別為0.107、0.096、0.103 mg·mL-1，并等體積混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取新疆假龍膽0.1 g(粉碎，過80目篩)，放入具塞試管中，精密加入甲醇10 mL，精密稱定，浸漬過夜，超聲45 min(功率為260 W，頻率為40 KHz)，放冷，取出補(bǔ)重，微孔濾膜濾過(0.45 μm)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 取2.2.2 項(xiàng)下制備的1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮和1-羥基-3，5-二甲氧基酮混合對(duì)照品溶液1、2、5、10、20 μL，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮為Y=48 303X-0.043(r=0.999 7)，1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮為Y=68 848X-0.09(r=0.999 7)，1-羥基-3，5-二甲氧基酮為Y=63 397X-0.069(r=0.999 8)。結(jié)果表明：1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮的進(jìn)樣量在35.7～713.4 ng；1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮進(jìn)樣量在32～1280 ng；1-羥基-3，5-二甲氧基酮進(jìn)樣量在34.3～6860 ng時(shí)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2.3 項(xiàng)下供試品溶液20 μL，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮和1-羥基-3，5-二甲氧基酮峰面積的RSD(n=6)分別為0.31%、0.27%、0.25%。表明該方法精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液10 μL，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件下，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測(cè)得1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮、1-羥基-3，5-二甲氧基酮的RSD分別為1.05%、1.33%、1.58%，表明供試液中3種成分在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，精密稱定，按2.2.3 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，測(cè)得1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮和1-羥基-3，5-二甲氧基酮峰面積的RSD(n=6)分別為2.48%、0.82%、2.63%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性較好。

2.2.8 加樣回收率 精密稱取已知含量的假龍膽樣品粉末6份，精密稱定，分別精密加入混合對(duì)照品溶液各2 mL，按2.2.3 項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL 測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮和1-羥基-3，5-二甲氧基酮的平均回收率(n=6)分別為103.10%、100.02%、95.10%，RSD 分別為1.25%、0.93%、2.62%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。具體數(shù)據(jù)見表1～3。

2.2.9 樣品測(cè)定 取5批樣品粉末，精密稱定，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1 項(xiàng)下述色譜條件進(jìn)樣10 μL，用外標(biāo)法計(jì)算1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮、1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮和1-羥基-3，5-二甲氧基酮的含量，結(jié)果見表4。

表1 1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 1-羥基-3，5，8-三甲氧基酮加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

樣品樣品含量/mg加入對(duì)照品量/mg實(shí)測(cè)總量/mg回收率(%)平均回收率(%)RSD1007048006912013954999110002093%2007153006912013957984430070060069120139891010340070060069120139731007950070270069120139611003260070830069120139689961

表3 1-羥基-3，5-二甲氧基酮加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 1-羥基-3，5-二甲氧基酮加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

樣品樣品含量/mg加入對(duì)照品量/mg實(shí)測(cè)總量/mg回收率(%)平均回收率(%)RSD100114300117700222692019510262%200116000117700230897543001137001177002282972840011370011770022729643500114001177002261952460011490011770022339209

表4 新疆假龍膽中3種酮類成分含量 %

3 討論

本文將新疆假龍膽醇提物用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行梯度萃取，得到石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分，但本文只對(duì)其中的石油醚和乙酸乙酯極性部分進(jìn)行了分離純化，在接下來的實(shí)驗(yàn)中我們將利用現(xiàn)代先進(jìn)的分離純化及鑒定手段對(duì)正丁醇部分和水部分進(jìn)行系統(tǒng)研究，全面闡明新疆假龍膽的化學(xué)組成，為進(jìn)一步探索新疆假龍膽中藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供化學(xué)材料，這對(duì)于開發(fā)新疆假龍膽藥用植物資源具有重要意義。

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StudyonChemicalCompositionandXanthonesContentDeterminationofGentianellaturkestanorum(Gand.)Holub

ZOUDezhi1,2,3，YANGDan1，WANGJianhua4，HANHuarui1，2,3，BAIXiaorong1,2,3，ZHANGChunhong1,2,3*，LIMinhui1,2,3,5*

(1.BaotouMedicalCollege，InnerMongolia，Baotou014060，China; 2.InnerMongoliaResearchCenterofCharacteristicMedicinalPlantsCultivationandProtectionEngineeringTechnology，Baotou014060，China; 3.InnerMongoliaKeyLaboratoryofCharactersticGeoherbsResourcesProtectionandUtilization，Baotou014060，China; 4.SchoolofPharmacy，InnerMongoliaMedicalUniversity，Hohhot010110，China; 5.InnerMongoliaInstituteofTraditionalChineseMedicine，Hohhot010020，China)

Objective：To preliminarily study on the chemical constituents ofGentianellaturkestanorum(Gand.) Holub and analyze the content of xanthones by HPLC for quantitative analysis.Methods：The herbal material ofG.turkestanorumwas reflux-extracted by 75% ethanol，the crude extracts were fractionated with petroleum ether，ethyl acetate，andn-BuOH，respectively.The petroleum ethert and ethyl acetate part were extracted by silica gel column chromatography and Sephadex LH-20 column chromatography gradually to obtain the purified compounds，which were identified by spectral data EI-MS，1H-NMR and13C-NMR.An HPLC method for the content determination of Xanthones compounds1-3was established.Results：Six compounds were isolated and identified fromG.turkestanorum.，respectively，swerchirin (1)，1-hydroxy-3，5，8-trimethoxyxanthone (2)，1-hydroxy-3，5- demethoxyxanthone (3)，luteolin (4)，daucosterol (5) andβ- sitosterol (6).The results showed that the conditions of the experiment exhibited better performance of separation for compounds1-3.Compounds1-3formed a good linear relationship at 35.7～713.4，32～1280，34.3～686 ng，respectively.Precision RSD were 0.31%，0.27%，0.25% and the stability experiments of RSD were 1.05%，1.33%，1.58%，respectively.Repeated experiments RSD were 2.48%，0.82% and 2.63%.Meanwhile，the recovery rat were 103.1%(RSD=1.25%)，100.02%(RSD=0.93%)，95.10%(RSD=2.62%)，respectively.The content of compounds1-3were 0.21%～0.28%，0.65%～0.77%，0.19%～0.15%，respectively.Conclusion：The chemical compositions ofG.Turkestanorumwere mainly flavonoids，xanthones and sterols.The established HPLC method is suitable for the determination of compounds1-3isolated fromG.turkestanorum.Moreover，the contents of compounds1-3were shown in the higher level.

Gentianellaturkestanorum；chemical composition；flavonoids；xanthones；determination

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAI28B02)；國(guó)家自然基金項(xiàng)目(81060372)；內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(蒙藥資源保護(hù)與開發(fā)利用科研創(chuàng)新平臺(tái))

] 張春紅，教授，研究方向：中蒙藥活性成分分析，E-mail：zchlhh@126.com；李旻輝，教授，研究方向：蒙藥資源保護(hù)與利用，E-mail：li_minhui@aliyun.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.6.005

2016-01-05)

*[