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        烏藥不同提取物對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠腸推進(jìn)率的影響*

        2017-09-20 11:22:37季夢(mèng)漂譚明明王軍偉丁慧珍樓招歡
        浙江中醫(yī)雜志 2017年9期
        關(guān)鍵詞:烏藥內(nèi)毒素酒精性

        季夢(mèng)漂 譚明明 王軍偉 丁慧珍 樓招歡

        1 浙江省天臺(tái)縣人民醫(yī)院 浙江 天臺(tái) 317200 2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

        中藥研究

        烏藥不同提取物對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠腸推進(jìn)率的影響*

        季夢(mèng)漂1譚明明1王軍偉1丁慧珍1樓招歡2#

        1 浙江省天臺(tái)縣人民醫(yī)院 浙江 天臺(tái) 317200 2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

        烏藥 急性酒精性肝損傷 腸推進(jìn)率 小鼠隨著飲酒人群的逐年增加,急性酒精性肝損傷的發(fā)病率持續(xù)上升。目前,酒精引起急性肝損傷伴腸道粘膜受損、屏障功能障礙等方面多有探討[1-2],而造成腸道動(dòng)力障礙的卻鮮有研究。殊不知腸道動(dòng)力障礙導(dǎo)致酒精代謝物停留小腸時(shí)間增長(zhǎng),給毒物的吸收提供機(jī)會(huì),而內(nèi)毒素吸收入血,刺激炎性細(xì)胞因子大量釋放,將導(dǎo)致肝臟遭遇“二次攻擊”。因此增強(qiáng)胃腸動(dòng)力,加快腸源性?xún)?nèi)毒素排泄,是治療急性酒精性肝損傷的重要途徑。本課題組前期的研究表明烏藥可通過(guò)抑制抗氧化損傷[3]、減輕炎癥反應(yīng)[4]等作用保護(hù)肝組織,故本實(shí)驗(yàn)以小腸推進(jìn)率為研究要點(diǎn),探討酒精對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)的作用以及烏藥不同提取物干預(yù)后的影響。

        1 材料

        1.1 藥物與試劑:①烏藥,由浙江省天臺(tái)山烏藥生物工程有限公司提供,2013年8月采自浙江省天臺(tái)縣三州鄉(xiāng),經(jīng)該公司陳方標(biāo)藥師鑒定為樟科(Lauraceae)山胡椒屬(Lindera)植物烏藥Lindera aggregate(Sims)

        Kosterm的干燥塊根。②陽(yáng)性對(duì)照藥:思密達(dá)[博福-益普生(天津)制藥有限公司,批號(hào):K030407],規(guī)格3g× 10袋,用蒸餾水配制成濃度為0.18g/ml的混懸液備用。③白酒:紅星二鍋頭酒(酒精度52%),2.0L/瓶,北京紅星股份有限公司。與雙蒸水按一定體積比例稀釋?zhuān)凭w積分?jǐn)?shù)為50%。

        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明小鼠64只,雌雄各半,體重18~22g(購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司,動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):0198894、0197965)。

        2 方法

        2.1 烏藥提取物制備:烏藥水提取物制備:取烏藥適量,加入12BV水提取1.5h,濾取藥液,藥渣繼用10BV水提取1h,濾取藥液,合并2次藥液,減壓回收并適當(dāng)濃縮,即得烏藥水提取物(WYSTW)。烏藥醇提取物制備:取烏藥適量,加入12BV 75%乙醇提取1.5h,濾取藥液,藥渣繼用10BV乙醇提取1h,濾取藥液,合并兩次藥液,減壓回收乙醇,并適當(dāng)濃縮,即得烏藥醇提取物(WYCTW)。烏藥醇提取物各萃取物:取烏藥醇提取物適量依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇,分次萃取至色淡,分取并合并各萃取層,減壓回收溶劑,分別得烏藥醇提取物石油醚萃取物(WYCTC1)、烏藥醇提取物乙酸乙酯萃取物(WYCTC2)、烏藥醇提取物正丁醇萃取物(WYCTC3)。取烏藥醇提取物各萃取物,用適量吐溫-80研磨后,加水置磁力攪拌器上混勻,加純水稀釋?zhuān)姑亢辽幰合喈?dāng)于1g生藥,即得各萃取物溶液。上述各溶液,臨用前用適量純水稀釋?zhuān)姑亢辽幰合喈?dāng)于0.5g生藥。

        2.2 動(dòng)物處理:選取昆明小鼠64只,隨機(jī)分為8組,每組8只,雌雄各半,即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、烏藥水提物(8g/kg)組、烏藥醇提物(8g/kg)組、烏藥醇提石油醚萃取物(8g/kg)組、烏藥醇提乙酸乙酯萃取物(8g/kg)組、烏藥醇提正丁醇萃取物(8g/kg)組,所有小鼠均給予基礎(chǔ)飼料,自由采食飲水。除正常對(duì)照組(以等體積的蒸餾水灌胃)外,其余各組小鼠均給予酒精體積濃度50%的白酒灌胃造模,每日1次,灌胃容積0.12ml/10g,連續(xù)14天造模結(jié)束。自造模第1天起,除正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服蒸餾水外,其余各給藥組分別給予相應(yīng)的藥物灌胃,每日1次,灌胃容積為0.1ml/ 10g體重,連續(xù)15天。

        2.3 指標(biāo)檢測(cè):小腸推進(jìn)率:給藥14天后,禁食16h,末次給藥后2h,每只小鼠灌服墨汁0.4ml,15min后脫頸椎處死,迅速取小腸,計(jì)算腸推進(jìn)率。小腸推進(jìn)率(%)=墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離/小腸全長(zhǎng)×100%。

        3 結(jié)果

        與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組小鼠小腸推進(jìn)率顯著減少(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、WYSTW、WYCTW、WYCTC1及WYCTC3組小鼠小腸推進(jìn)率明顯提高(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表1。

        表1 烏藥不同提取物對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠小腸推進(jìn)率的影響(±s)

        表1 烏藥不同提取物對(duì)急性酒精性肝損傷模型小鼠小腸推進(jìn)率的影響(±s)

        注:與正常對(duì)照組比較,△△P<0.01;與模型對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        小腸推進(jìn)率(%)60.00± 7.71 42.85± 9.41ΔΔ60.41±12.50**60.20±10.64**58.61± 8.81**54.48± 9.32*47.02± 6.16 54.40± 7.07*組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組WYSTW組WYCTW組WYCTC1組WYCTC2組WYCTC3組劑量(g/kg)——1.8 8 8 8 8 8

        4 討論

        烏藥具有理氣止痛、溫腎散寒之功效[5]?,F(xiàn)代研究表明,烏藥對(duì)胃腸平滑肌有雙向調(diào)節(jié)作用,既能促進(jìn)腸蠕動(dòng),又能緩解胃腸平滑肌痙攣。在單藥方面,李氏等[6]研究表明,烏藥提取物在動(dòng)物體內(nèi)、體外作用表現(xiàn)出的藥理效應(yīng)不同,對(duì)小鼠的體內(nèi)作用表現(xiàn)為促進(jìn)胃腸收縮,提高小腸炭末推進(jìn)率;對(duì)家兔的體外作用表現(xiàn)為抑制效應(yīng)。龔氏等[7-8]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)烏藥不同提取物對(duì)新斯的明所致小鼠小腸推進(jìn)功能亢進(jìn)有一定抑制作用,對(duì)阿托品所致小腸推進(jìn)功能抑制有一定促進(jìn)作用。在方藥協(xié)同方面,發(fā)現(xiàn)以烏藥為君的四磨湯有調(diào)理腸胃機(jī)能的作用。另有研究[9]顯示,四磨湯能加快小鼠胃排空和腸推進(jìn)。劉氏等[10]也發(fā)現(xiàn)四磨湯四味組成藥物均能影響胃腸運(yùn)動(dòng),促進(jìn)慢性應(yīng)激小鼠腸推進(jìn)。酒精引起急性酒精性肝損傷的機(jī)制非常復(fù)雜,腸滲漏和腸道內(nèi)毒素是目前研究熱點(diǎn)。然而正常的腸道屏障有阻止內(nèi)毒素等大分子毒性物質(zhì)入血的柵欄作用[11]。研究表明,乙醇攝入腸道,其與代謝產(chǎn)物積聚釋放大量炎性因子,破壞腸粘膜上皮細(xì)胞的緊密連接,導(dǎo)致腸粘膜損傷及通透性增加[12],同時(shí)造成腸道蠕動(dòng)減慢,胃腸傳輸時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)菌過(guò)度繁殖,產(chǎn)生大量?jī)?nèi)毒素,基于“腸-肝循環(huán)”理論,從而造成肝臟二次損傷。目前腸道屏障功能障礙的致病機(jī)制已較明晰,因此本實(shí)驗(yàn)側(cè)重于腸道動(dòng)力方面的研究。

        在本研究中,急性酒精性肝損傷模型組小鼠與正常對(duì)照組相比,小腸推進(jìn)率明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說(shuō)明酒精抑制了小腸正常運(yùn)動(dòng)。根據(jù)藥效結(jié)果顯示,與模型對(duì)照組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、烏藥水提取物、醇提取物、烏藥醇提石油醚萃取物及烏藥醇提正丁醇萃取物組均能不同程度地提高模型小鼠小腸推進(jìn)率(P<0.05或P<0.01),提示藥物干預(yù)后小腸運(yùn)動(dòng)較損傷后活躍,各給藥組對(duì)模型小鼠小腸運(yùn)動(dòng)功能具有一定的改善作用。藥效作用對(duì)比,發(fā)現(xiàn)烏藥醇提取物、水提取物與陽(yáng)性對(duì)照組作用相當(dāng);醇提取物三個(gè)萃取部位中,烏藥醇提石油醚萃取物和醇提正丁醇萃取物效果較優(yōu)。綜上所述,烏藥不同提取物對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠具有一定保護(hù)作用,其機(jī)制可能與改善酒精損傷后小鼠的小腸運(yùn)動(dòng)功能,加快內(nèi)毒素排泄有關(guān)。

        [1]聶嬌,李鑫,崔培林,等.IGF-1在酒精性肝病伴發(fā)腸粘膜損傷中的作用探討[J].實(shí)用肝臟病雜志,2012,15(4):305-308.

        [2]方志紅,胡義揚(yáng),崔劍巍,等.大鼠酒精性肝損傷與腸內(nèi)毒素滲漏的關(guān)系及健脾理氣活血方的干預(yù)作用[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,26(9):813-817.

        [3]陳卓亮,王軍偉,譚明明,等.烏藥水提物與醇提物對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠抗氧化作用的比較研究[J].浙江中醫(yī)雜志,2015,50(6):414-415.

        [4]王軍偉,胡培陽(yáng),陳昕昳,等.烏藥對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠炎性因子的影響[J].中華災(zāi)害救援醫(yī)學(xué),2014,2(7):373-376.

        [5]高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:12.

        [6]好桂新,李慶林,王崢濤,等.烏藥提取物對(duì)消化系統(tǒng)的作用[J].中國(guó)野生植物資源,1999,18(3):54-55,59.

        [7]龔明,龔建平,糜亞男.烏藥不同提取物對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2015,21(1):62-63.

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        2017-02-26

        國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目基于“腸-肝軸”的烏藥抗慢性酒精性肝損傷的作用機(jī)制研究,編號(hào):81503328;浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目烏藥不同提取物對(duì)慢性酒精性肝損傷模型大鼠腸源性?xún)?nèi)毒素血癥的干預(yù)作用,編號(hào):2015DTA021;浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目烏藥抗酒精性肝損傷有效部位研究,編號(hào):2016C33184;臺(tái)州市科技計(jì)劃項(xiàng)目烏藥對(duì)急性酒精性肝損傷模型大鼠腸源性?xún)?nèi)毒素血癥的干預(yù)作用,編號(hào):2014A33339

        # 通訊作者:樓招歡,E-mail:lou_jasmine@163.com

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