劉建

江蘇省如東縣第四人民醫(yī)院 江蘇 如東 226400

養(yǎng)胃顆粒對(duì)大鼠慢性萎縮性胃炎的藥效學(xué)研究

劉建

江蘇省如東縣第四人民醫(yī)院 江蘇 如東 226400

目的：探討?zhàn)B胃顆粒對(duì)慢性萎縮性胃炎(CAG)胃液pH值和胃壁厚度及大鼠白細(xì)胞介素-β(IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響及機(jī)制。方法：將健康Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，即正常組，CAG組，養(yǎng)顆粒低、中、高劑量組，酶維素組。MNNG灌胃綜合法建CAG模型，正常組予蒸餾水灌胃。造模成功后開(kāi)始給予藥物治療，養(yǎng)胃顆粒按1.5、3.0、4.5g/kg的劑量連續(xù)60天灌服，取材后檢測(cè)胃液pH值和胃壁厚度，采用放射免疫法測(cè)定血清IL-1β和TNF-α的含量。結(jié)果：與正常組比較，CAG組胃液pH值升高(P＜0.01)，胃壁厚度明顯減少(P＜0.01)、IL-1β和TNF-α水平顯著升高(P＜0.0l)；與CAG組比較，養(yǎng)胃顆粒(高劑量)組胃液pH值顯著降低(P＜0.01)，養(yǎng)胃顆粒(高、中劑量)組胃壁厚度明顯增厚(P＜0.01)，(高、中劑量)組IL-1β和TNF-α水平顯著降低（P＜0.01）；與酶維素組比較，養(yǎng)胃顆粒高劑量組均有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論：養(yǎng)胃顆粒對(duì)CAG模型有較好的治療作用，促進(jìn)胃酸分泌，提高胃酸水平，保護(hù)胃粘膜并使病變明顯改善、抑制IL-1β和TNF-α等細(xì)胞因子可能是其部分作用機(jī)制。

慢性萎縮性胃炎 養(yǎng)胃顆粒 胃液pH值 胃壁厚度 白細(xì)胞介素-β 腫瘤壞死因子-α

慢性萎縮性胃炎(CAG)是以胃粘膜局灶性或廣泛性上皮和固有腺體萎縮，粘膜變薄，粘膜肌層增厚，伴有腸上皮化生和異型增生為特征的慢性疾病，阻止和逆轉(zhuǎn)慢性萎縮性胃炎向胃癌發(fā)展，對(duì)減少胃癌發(fā)生率有重要意義，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)CAG缺乏有效治療手段，中醫(yī)藥對(duì)其治療顯示出優(yōu)越性[1]。筆者根據(jù)CAG的發(fā)病特點(diǎn)，觀察養(yǎng)胃顆粒對(duì)大鼠慢性萎縮性胃炎模型的治療作用，以期探討其防治CAG的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康Wistar大鼠78只，重量180～230g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，按清潔級(jí)要求飼養(yǎng)［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SYXK(浙2008-0115）］。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物：N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍(MNNG) (日本TCI公司)；75%無(wú)水乙醇(北京化工廠)；鹽酸雷尼替丁膠囊(石家莊中諾藥業(yè)有限公司)；養(yǎng)胃顆粒［正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1605007，每袋裝5g(無(wú)糖型)，臨床用量3次/天，1次1袋］，維酶素片(新鄉(xiāng)恒久遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20150814)，上述藥物臨用時(shí)以蒸餾水配成所需濃度混懸液。IL-1β和TNF-α試劑盒，由北京華英生物技術(shù)研究所提供。

1.3 儀器：高速離心機(jī)HHR21型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；電熱恒溫水浴箱HWS-20型，江蘇太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；SN-682型放射免疫γ計(jì)數(shù)器，上海核福光電儀器有限公司生產(chǎn)；美國(guó)BS-200S分析天平，北京賽多利斯天平有限公司。

1.4 方法：分述如下。

1.4.1 動(dòng)物模型的建立：空白組的大鼠自由飲食飲水，同時(shí)每天灌胃去離子水10ml/kg；模型組采用以MNNG為主的綜合造模方法，具體如下：用去離子水配制成濃度為lg/L的母液，存放于4℃冰箱備用，每周制備1次，使用時(shí)將其稀釋成150μg/ml的溶液，置于黑色飲水瓶中，自由飲用，每天更換，同時(shí)每日灌胃雷尼替丁溶液(0.03g/kg)，期間不予其他食物，配以饑飽失常的方式，即雙日飽食，單日禁食，單日禁食時(shí)，大鼠給予45%的乙醇(1ml/只)灌胃，連續(xù)造模l6周。注意MNNG溶液飲用時(shí)置入黑膠布包裹的避光飲水瓶?jī)?nèi)供大鼠飲用。

1.4.2 分組和給藥：Wistar大鼠78只，隨機(jī)分為兩組，正常對(duì)照（空白）組14只。模型組64只，按上述方法進(jìn)行造模，實(shí)驗(yàn)第12、16周末各組隨機(jī)抽檢2只大鼠，檢查造模情況，第16周末單純?cè)霤AG模成功，將60只模型組大鼠隨機(jī)分為空白模型組，養(yǎng)胃顆粒低、中、高劑量組，酶維素組，每組12只，在繼續(xù)造模的基礎(chǔ)上分別給予養(yǎng)胃顆粒低、中、高劑量組給藥劑量分別為1.5、3.0、4.5g/ kg體重，維酶素組按0.5g/kg給藥，蒸餾水每日1次，給藥體積為l0ml/kg體重，連續(xù)給藥60天。

1.4.3 檢測(cè)指標(biāo)[2]：大鼠腹腔注射350mg/kg(10ml/kg)水合氯醛麻醉，經(jīng)腹主靜脈采血，3500r/min離心10min，分離血清于-70℃下保存。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，采用放射免疫法測(cè)定血清IL-1β和TNF-α的含量。大鼠仰臥位固定于手術(shù)板上，沿腹正中線剪開(kāi)，結(jié)扎賁門和幽門，在賁門標(biāo)記上方和幽門標(biāo)記下方剪開(kāi)分離胃組織，沿大彎側(cè)剪開(kāi)胃組織，放入30ml去離子水中沖洗，將沖洗液放入50ml離心管中用1500r/min離心10min，用pH儀測(cè)量胃液pH值。收集胃酸后用去離子水將胃組織沖洗干凈，每個(gè)胃隨機(jī)選取5個(gè)點(diǎn)以游標(biāo)卡尺測(cè)量厚度，取平均值作為其胃壁厚度。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)均采用±s表示,組間比較方差齊采用單因素方差分析以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組胃酸值pH及胃壁平均膜厚度比較：見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠胃酸ph值、胃壁平均厚度的比較（±s）

表1 各組大鼠胃酸ph值、胃壁平均厚度的比較（±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與CAG組比較，##P＜0.01；#P＜0.05；與酶維素組比較，&&P＜0.01。

pH值4.56±0.89 6.78±0.56**6.23±0.81 5.67±0.5##4.83±0.74##&&5.88±0.63#組別正常組CAG組養(yǎng)胃顆粒低劑量組養(yǎng)胃顆粒中劑量組養(yǎng)胃顆粒高劑量組酶維素組例數(shù)10 10 11 11 12 11胃壁平均厚度（μm）670±28 417±22**470±33 513±42##594±26##&&467±32

2.2 各組大鼠血清IL-1β和TNF-α：見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清IL-1β和TNF-α含量比較(±s)

表2 各組大鼠血清IL-1β和TNF-α含量比較(±s)

注：與正常組比較，&&P＜0.01；與CAG組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與酶維素組比較，##P＜0.01。

組別正常組CAG組養(yǎng)胃顆粒低劑量組養(yǎng)胃顆粒中劑量組養(yǎng)胃顆粒高劑量組酶維素組TNF-α(μg/L) 27.89±7.83 52.47±9.75&&42.25±8.77**36.33±6.54**##30.67±9.34**##40.27±9.28**例數(shù)10 10 11 11 12 11 IL-1β(μg/L) 63.39±16.87 105.81±17.94&&97.66±18.12*79.43±17.79**##68.81±17.94**##95.03±16.89*

3 討論

CAG可歸屬于中醫(yī)學(xué)“胃脘痛”“痞滿”等范疇。養(yǎng)胃顆粒由黃芪、黨參、白芍、山藥、烏梅、陳皮、香附和甘草8味藥材組成，具有養(yǎng)胃健脾、理氣止痛及和中生津之功效，用于胃脘脹滿、氣滯作痛、食欲不振、消化不良等癥，對(duì)臨床上急慢性胃炎、萎縮性胃炎均有較好的療效?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)[3]，養(yǎng)胃顆粒對(duì)冰醋酸所致大鼠潰瘍具有明顯的治療作用，能顯著減小潰瘍面積，提高潰瘍愈合百分率；其作用機(jī)制可能與其升高血清SOD活性，降低血清MDA含量，從而提高機(jī)體抵抗脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的能力有關(guān)。同時(shí)養(yǎng)胃顆粒還能夠明顯促進(jìn)CAG大鼠血清GAS、SS以及PGE的分泌,從而增強(qiáng)胃粘膜的防御機(jī)能。

CAG的發(fā)生發(fā)展是由多種因素誘發(fā)，其中胃酸的分泌水平，尤其是壁細(xì)胞的泌酸功能在萎縮性胃炎發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用[4]。IL-1β是一種前炎癥因子炎性活細(xì)胞素，主要由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等在攝取抗原抗體復(fù)合物或抗原遞呈過(guò)程中產(chǎn)生。在正常生理?xiàng)l件下，IL-1β可以調(diào)節(jié)全部類型的胃粘膜上皮細(xì)胞的功能，抑制胃酸分泌，由于其抑制作用強(qiáng)烈，故可導(dǎo)致胃粘膜萎縮，甚至發(fā)生胃癌[5]，TNF-α主要由T細(xì)胞單核細(xì)胞分泌，TNF-a在胃粘膜組織炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，可能是胃粘膜炎癥形成初始階段重要細(xì)胞因子之一[6]。因此，本研究采用長(zhǎng)期飲用MNNG復(fù)制大鼠慢性萎縮性胃炎模型，觀察養(yǎng)胃顆粒對(duì)慢性萎縮性胃炎的治療作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CAG大鼠胃酸pH值較正常組明顯增高，且胃壁平均厚度較正常大鼠胃壁厚度明顯變薄(P＜0.01)；養(yǎng)胃顆粒的治療作用較模型組和霉維素組有顯著性差異（P＜0.01），提示養(yǎng)胃顆粒可明顯提高CAG的胃酸分平，降低胃酸pH值，進(jìn)而保護(hù)胃粘膜并使病變逐漸改善。同時(shí)，CAG模型大鼠血清IL-1β和TNF-a水平顯著升高（P＜0.01）。而養(yǎng)胃顆粒組尤其是高劑量組大鼠血清IL-1β和TNF-α的含量明顯降低，提示養(yǎng)胃顆粒治療CAG的機(jī)制可能與其抑制IL-1β、TNF-α等細(xì)胞因子活性有關(guān)。

綜上所述，養(yǎng)胃顆粒對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠有明顯的治療作用，明顯促進(jìn)胃液分泌，對(duì)胃泌素分泌具有調(diào)節(jié)作用，切斷炎癥因素對(duì)胃粘膜的損傷，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

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2017-03-20