李小龍，王明山，王薇薇，王賽芳，謝海嘯，呂建新

HST-N302血液分析流水線23條復(fù)檢規(guī)則修訂及應(yīng)用

李小龍1，王明山2，王薇薇2，王賽芳2，謝海嘯2，呂建新1

（1.溫州醫(yī)科大學(xué) 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江 溫州 325035；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 醫(yī)學(xué) 檢驗(yàn)中心，浙江 溫州 325015）

目的：采用HST-N302血液分析流水線評估XE-2100血細(xì)胞分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組制定的復(fù)檢規(guī)則，并建立適合該流水線的復(fù)檢規(guī)則。方法：利用HST-N302管理軟件labman4.2預(yù)先輸入23條規(guī)則，檢測25 097份門診全血標(biāo)本。陽性標(biāo)本啟動(dòng)自動(dòng)推片模式推片，陰性標(biāo)本則用手工模式推片，由2名主管技師對所有推片進(jìn)行手工鏡檢比較。評估使用兩套方案：方案1直接利用原23條復(fù)檢規(guī)則全自動(dòng)審核判斷推片；方案2利用修改后23條復(fù)檢規(guī)則并結(jié)合人工審核散點(diǎn)圖、直方圖和LIS系統(tǒng)歷史記錄后再推片。結(jié)果：方案1真陰性率、假陰性率、真陽性率、假陽性率、復(fù)檢率分別為70.10%、1.33%、4.15%、24.42%、28.57%；方案2真陰性率、假陰性率、真陽性率、假陽性率、復(fù)檢率分別為89.89%、1.22%、2.32%、6.58%、8.90%。結(jié)論：按方案2制定的HST-N302血液分析流水線復(fù)檢規(guī)則可降低復(fù)檢率，提高工作效率。

血細(xì)胞計(jì)數(shù)；血液分析儀；顯微鏡檢查

2002年春，BEREND HOUWEN等邀請了6個(gè)國家共20位專家討論并制定了83條復(fù)檢規(guī)則，隨后用這些規(guī)則在15家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證了13 298份血標(biāo)本，并于2005年由BAMES等[1]撰文公開發(fā)表了血涂片復(fù)審41條國際規(guī)則。中國也于2008年由XE-2100血液分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)助組[2]和貝克曼-庫爾特系列血液分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)助組[3]制定了兩套復(fù)檢規(guī)則，其中XE-2100血液分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)有23條規(guī)則，這些規(guī)則在流水線上應(yīng)用報(bào)道的文獻(xiàn)尚少，本研究利用HST-N302血液分析流水線，對該23條血涂片復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行了評估。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本：實(shí)驗(yàn)用全血標(biāo)本（EDTA-K2抗凝）均來自于溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，共25 097份（初診患者24 550份，復(fù)診患者547份）。所有標(biāo)本按本室（已通過ISO15189認(rèn)可）的SOP文件要求，采血后30 min至2 h內(nèi)檢測并涂片染色鏡檢。

1.1.2 儀器與試劑：測定用HST-N302血液分析流水線、質(zhì)控物、校準(zhǔn)物和試劑均為日本Sysmex公司產(chǎn)品。人工鏡檢用OLYMPUS BX41顯微鏡。

1.2 方法

1.2.1 人員培訓(xùn)：HST-N302儀器操作崗位人員和血液涂片鏡檢人員均需通過本室ISO15189相關(guān)培訓(xùn)和資格評估。

1.2.2 儀器的校準(zhǔn)和調(diào)試：XE-2100血液分析儀使用前，先由指定工程師用該機(jī)原廠專用校準(zhǔn)品SCS-1000進(jìn)行校準(zhǔn)，每日標(biāo)本檢測前用原廠質(zhì)控品e.check做至少1次室內(nèi)質(zhì)控，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

1.2.3 系統(tǒng)報(bào)警（IP信息）靈敏度設(shè)置：參照標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組[1]建議，本研究也將流水線上2臺(tái)XE-2100血液分析儀14個(gè)可疑報(bào)警信號（Q．flag）的臨界值設(shè)在100。

1.2.4 檢測方法：先用流水線上推片機(jī)SP-1000i自 動(dòng)涂片和染色，然后按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[4]和《白細(xì)胞計(jì)數(shù)參考方法》[5]的方法進(jìn)行白細(xì)胞分類。

1.2.5 評估方法：使用兩套方案。方案1：直接在HST-N302血液分析流水線labman4.2管理軟件中輸入原23條復(fù)檢規(guī)則，并使用自動(dòng)推片審核模式進(jìn)行鏡檢評估，同時(shí)未觸犯規(guī)則的陰性標(biāo)本也手動(dòng)推片染色鏡檢評估。方案2：將修改后的23條復(fù)檢規(guī)則（見表1）輸入HST-N302自動(dòng)血液分析流水線管理軟件labman4.2中，然后對觸犯規(guī)則的陽性標(biāo)本利用LIS系統(tǒng)歷史記錄和血液分析儀上的散點(diǎn)圖和直方圖進(jìn)行人工判斷后再推片鏡檢評估，而陰性標(biāo)本也同時(shí)推片染色鏡檢評估。

1.2.6 鏡檢陽性判斷：參照專家建議[6-7]，簡述如下：①紅細(xì)胞形態(tài)≥2+，或發(fā)現(xiàn)瘧原蟲，或中空淡染紅細(xì)胞30%，或紅細(xì)胞大小明顯不等；②血小板聚集，或巨大血小板＞15%；③杜勒氏小體粒細(xì)胞＞10%，或中毒顆粒中性粒細(xì)胞＞10%，或空泡變性粒細(xì)胞＞10%；④原始細(xì)胞≥1%，或早幼粒和中幼粒細(xì)胞≥1%，或晚幼粒細(xì)胞＞2%；⑤異形淋巴細(xì)胞＞5%；⑥有核紅細(xì)胞（NRBC)≥1%；⑦漿細(xì)胞≥1%。

1.2.7 觀察指標(biāo)：真陰性率、假陰性率、真陽性率、假陽性率、復(fù)檢率（復(fù)檢率=真陽性率+假陽性率），比對時(shí)均以鏡檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 2種方案復(fù)檢規(guī)則應(yīng)用評估 由表2可見，HSTN302血液分析流水線使用2種方案復(fù)檢規(guī)則對全血標(biāo)本檢測的真陽性率、假陽性率、真陰性率、復(fù)檢率存在一定差異，其中方案2的復(fù)檢率（為8.90%）明顯低于方案1的復(fù)檢率（為28.57%）。

2.2 2種方案觸犯規(guī)則復(fù)檢率比較 方案2比方案1觸犯規(guī)則復(fù)檢率明顯降低的有：規(guī)則17（IG）由13%降到7%，規(guī)則4（PLT）由19%降到7%，規(guī)則19（異型淋巴）由20%降到7%。而升高的主要有：NEUT（規(guī)則11）由4%升到10%；HGb（規(guī)則5）由7%升到17%；WBC（規(guī)則3）由10%升到24%。詳見表3。

3 討論

本研究2種方案復(fù)檢規(guī)則臨床應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)，25 097 份標(biāo)本中，按方案1復(fù)檢方法得到的假陽性率（為24.42%）比23條規(guī)則國內(nèi)制定協(xié)作組提供的驗(yàn)證試驗(yàn)假陽性率（為29.16%）低，比國際復(fù)檢專家組的結(jié)果假陽性率（為18.6%）高，真陽性率、假陰性率、復(fù)檢率均低于國內(nèi)協(xié)作組驗(yàn)證結(jié)果，但真陰性率明顯高于國內(nèi)協(xié)作組提供的數(shù)據(jù)，與唐玉鳳等[8]的研究數(shù)據(jù)（為70.6%）接近。方案2同方案1比較，其特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、同鏡檢分類比較的一致率明顯升高，而假陽性率、假陰性率卻減低，與國內(nèi)高勝海等[9]報(bào)道的復(fù)檢率20.57%，石玉玲等[10]報(bào)道的復(fù)檢率20.51%比較，本修訂規(guī)則后的復(fù)檢率（為8.90%）也明顯降低。從表3可以觀察到，采用方案2時(shí)，相對于方案1觸犯規(guī)則4（PLT）、規(guī)則19（異型淋巴細(xì)胞）、規(guī)則17（IG）、規(guī)則20（原始細(xì)胞）的復(fù)檢率明顯降低。分析原因認(rèn)為，方案1直接在HST-N302自動(dòng)血液分析流水線labman4.2管理軟件中輸入復(fù)檢規(guī)則，然后啟動(dòng)自動(dòng)審核程序進(jìn)行推片鏡檢，其缺點(diǎn)在于自動(dòng)化儀器無法對LIS系統(tǒng)中存在的患者臨床診斷、檢驗(yàn)結(jié)果歷史記錄、檢驗(yàn)結(jié)果歷史回顧進(jìn)行縱向比較分析，而方案2則在方案1的基礎(chǔ)上增加了人的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)審核過程，除能充分利用LIS系統(tǒng)醫(yī)療信息外，還對檢驗(yàn)結(jié)果散點(diǎn)圖、直方圖進(jìn)行更詳細(xì)的審核判斷，因此其假陽性率明顯降低，復(fù)檢率明顯下降。

通過對假陽性和假陰性標(biāo)本的分析發(fā)現(xiàn)，方案1主要的假陽性標(biāo)本依次是規(guī)則19（Abn Lymph/L-Blasts）、規(guī)則4（PLT＜100×109/L，PLTclumps）、規(guī)則17（IG Present或Imm Glan）、規(guī)則3（WBC＜4.0×109/L或＞30.0×109/L）報(bào)警，其對應(yīng)的復(fù)檢率也較高，為10%～20%，但同國內(nèi)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)助組提供的數(shù)據(jù)相似。方案2主要的假陽性標(biāo)本依次是規(guī)則3[首次＜3.0×109/L或＞30.0×109/L，WBC首次分類比率：NE%＞85，LY%＞50（成人）/60（＜12歲），MO%＞12，EO%＞10，BA%＞2]、規(guī)則19（異常淋巴細(xì)胞或原始細(xì)胞Abn Lymph/L-Blasts）、規(guī)則4（首次＜80×109/L或＞1 000×109/L，PLT聚集，PLT除聚集外報(bào)警）、規(guī)則17（IG Present或Imm Glan） 報(bào)警，其復(fù)檢率為7%左右，比方案1低，主要原因是對于規(guī)則4血小板報(bào)警的標(biāo)本筆者采用光學(xué)血小板檢測的模式過篩后再鏡檢，因此復(fù)檢率會(huì)降低。25 097份標(biāo)本中，方案1假陰性有335份（占1.33%），方案2假陰性有305份（占1.22%），均低于國內(nèi)血液學(xué)專家組確定的＜5%可接受限，也低于國內(nèi)協(xié)作組驗(yàn)證數(shù)據(jù)（為2.26%）。兩種方案應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)，假陰性標(biāo)本主要是由于核左移、PLT聚集、不典型淋巴、巨大血小板所致，而血液病細(xì)胞無陽性漏檢。鑒于假陰性是制定復(fù)檢規(guī)則的關(guān)鍵參數(shù)，國內(nèi)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組專家建議：①制定復(fù)檢規(guī)則時(shí)應(yīng)根據(jù)儀器對細(xì)胞形態(tài)識(shí)別的靈敏度來決定篩選標(biāo)準(zhǔn)的寬嚴(yán)度；②假陰性率應(yīng)＜5%，但重要參數(shù)不能出現(xiàn)假陰性，在低假陰性率前提下，調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)降低假陽性率；③白血病患者（不管初診還是復(fù)診）不能漏篩；④不同型號儀器，或同一型號儀器但實(shí)驗(yàn)室不同，篩選標(biāo)準(zhǔn)亦不同。據(jù)此，筆者依據(jù)專家建議并結(jié)合驗(yàn)證結(jié)果，修定了適合HST-N302血液分析流水線的23條復(fù)檢規(guī)則（即方案2復(fù)檢規(guī)則）并應(yīng)用于臨床。

表1 修改前后HST-N302流水線血細(xì)胞計(jì)數(shù)與白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則

表2 2種方案診斷性能指標(biāo)比較（%）

表3 2種方案觸犯規(guī)則復(fù)檢率比較

綜上所述，在23條復(fù)檢規(guī)則基礎(chǔ)上，建立起來的適合HST-N302血液分析流水線的復(fù)檢規(guī)則具有比原復(fù)檢規(guī)則更高的工作效率。

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（本文編輯：丁敏嬌）

Applicated studies of 23 items revise of review criteria in Sysmex Hematology sampler transport HST-N302

LI Xiaolong1, WANG Mingshan2, WANG Weiwei2, WANG Saifang2, XIE Haixiao2, LYU Jianxin1.
1.School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325035; 2.Department of Laboratory Medicine, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Midical University, Wenzhou, 325015

blood cell count; hematology analyzer; microscopic slide review

R446.11

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2017.08.010Abstract: Objective: To evaluate the XE-2100 hematology review criteria suggested by internal consensus group with Sysmex Hematology sampler transport HST-N302. And to perfect review criteria of our clinical laboratory. Methods: The total 25 097 patients’ blood samples were respectively detected and stained seminal smear randomly with the methods of Automated Hematology Analysis on Sysmex HST-N302 base on hematology review criteria suggested by internal consensus group (review criteria 1 in short), hematology review criteria suggested by internal consensus group and LIS history record and scatter diagram (review criteria 2 in short), at the same time, differential leukocyte on the smear included positive and negative sample were counted with the microscope by two docimaster. Calculated true positive (TP), false positive (FP), true negative (TN), false negative (FN) and the ratio of review quantity, then studied out optimal program. Results: According to review criteria 1: TN, FN, TP, FP and review rate respectively were 70.10%, 1.33%, 4.15%, 24.42%, 28.57%. According to review criteria 2: The TN, FN, TP, FP and review rate respectively were 89.89%, 1.22%, 2.32%, 6.58%, 8.90%. Conclusion: It can enhance work efficiency and reduce unnecessary labor work to utilize new review criteria.

2016-10-08

李小龍（1969-），男，重慶人，講師，碩士。

呂建新，教授，博士生導(dǎo)師，Email：jxlu313@163. com。