廖國(guó)棟，王麗江，俞蔚文，張建設(shè)

·論 著·

新型靶向納米探針在早期上尿路上皮癌動(dòng)物模型中的 成像研究

廖國(guó)棟1，王麗江2，俞蔚文1，張建設(shè)3

（1.浙江省人民醫(yī)院 泌尿外科，浙江 杭州 310014；2.浙江大學(xué) 浙江大學(xué)加州國(guó)際納米技術(shù)研究院， 浙江 杭州 310027；3.溫州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，浙江 溫州 325035）

目的：探討上轉(zhuǎn)換熒光材料（UCP）納米探針的熒光特征及其對(duì)早期上尿路上皮癌移植瘤的靶向性。方法：采用高溫裂解法先合成水溶性UCP，再制備靶向酸性組織插入多肽（pHLIP）偶聯(lián)的UCP納米探針，利用Maestro小動(dòng)物活體多光譜影像系統(tǒng)（CRI）觀察pHLIP-UCP探針對(duì)荷瘤動(dòng)物模型上尿路上皮腫瘤的成像。結(jié)果：合成了分散性好、粒徑小、溶液通透性高的NaYF4:Yb3+，Er3+上轉(zhuǎn)換納米晶體；UCP納米探針對(duì)荷瘤動(dòng)物模型成像的上轉(zhuǎn)換發(fā)光信號(hào)在黑暗環(huán)境下發(fā)光穩(wěn)定、靈敏度高。結(jié)論：體內(nèi)UCP納米粒子能明顯富集在腫瘤組織，在早期上尿路上皮癌活體成像中有較大的應(yīng)用潛力。

上尿路上皮癌；納米探針；上轉(zhuǎn)換成像；動(dòng)物模型

上尿路上皮癌來(lái)源于腎盂、輸尿管的尿路上皮，大多數(shù)在診斷時(shí)已為浸潤(rùn)性癌，導(dǎo)致手術(shù)效果不佳、總體預(yù)后較差[1]，術(shù)后有64.6%出現(xiàn)腫瘤進(jìn)展，35.6%出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移[2]。因此，上尿路上皮癌的早期診斷意義重大。目前，納米科技為腫瘤的早期探測(cè)提供了新的思路，基于納米粒子的早期腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)[3]、基于納米粒子光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)基礎(chǔ)上的顯像治療一體化技術(shù)[4]、納米緩釋藥物與納米藥物遞送器件[5]等基于納米粒子的早期腫瘤標(biāo)志物 檢測(cè)技術(shù)已取得了重大進(jìn)展。本研究合成基于上轉(zhuǎn) 換熒光材料（up-converting phosphor，UCP）的納米 分子影像探針，對(duì)早期上尿路上皮癌進(jìn)行了成像。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑：三氯化鉺（ErCl3）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，三辛基氧化膦（trioctylphosphine oxide，TOPO，90%）、三氟乙酸（trifluoroacetic acid，CF3COOH）購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司。正硅酸乙酯（tetraethyl orthosilicate，TEOS）購(gòu)自天津阿法埃莎化學(xué)有限公司，其他試劑購(gòu)自上海生工生物工程有限公司。所有化學(xué)試劑均為分析純級(jí)別。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：BALB/c小鼠，6～8周齡，SPF級(jí)，來(lái)源于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（浙）2012-0178，由浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。

1.2 方法

1.2．1 聚醚酰亞胺（polyetherimide，PEI）高分子包裹的水溶性UCP納米晶體制備：利用文獻(xiàn)[6]記錄的高溫裂解法制備PEI高分子包裹的水溶性UCP。所有稀土試劑均為5N（99.999%）純度。（CF3COO）3Er的制備需要提前將相應(yīng)的稀土氧化物溶解在CF3COOH中，并在回流溫度下加熱。當(dāng)溶解完全后，在真空條件下除去溶劑。所得的固體真空下室溫過(guò)夜，不需要進(jìn)一步凈化。向已加入10 g TOPO的50 mL三口燒瓶中同時(shí)再加入1.25 mmoL CF3COONa、0.48 mmoL （CF3COO）3Y、0.12 mmoL（CF3COO）3Yb以及制備好的0.00024 mmoL（CF3COO）3Er前體。再將得到的反應(yīng)混合物在100 ℃、真空下放置30 min，完成脫氣過(guò)程。再將該溶液在氬氣下迅速加熱到360 ℃，并保持在這個(gè)溫度1 h，同時(shí)大力磁力攪拌（1 000 r/min）。 接著溶液冷卻至室溫后，加入氯仿和甲醇沉淀納米 粒子。通過(guò)離心（轉(zhuǎn)速12 000 r/min，時(shí)間為15 min） 收集納米粒子，用乙醇洗滌3次。純化的納米粒子顆粒再分散在環(huán)己烷和儲(chǔ)存純化的納米顆粒再加入環(huán)己烷中分散和儲(chǔ)存（室溫）。通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射和透射電子顯微鏡（transmission electron microscope， TEM）（JEOL/JEM-2010F）分析所制備UCP的粒徑，利用熒光光譜儀在外接980 nm光源下測(cè)定所制備粒子的發(fā)光光譜。

1.2.2 將靶向插入微酸組織多肽（pH low insertion peptide，pHLIP）與UCP連接：采用固相合成法合成的pHLIP序列如下：Ala-Cys-Glu-Gln-Asn-Pro-Ile-Tyr-Trp-Ala-Arg-Tyr-Ala-Asp-Trp-Leu-Phe-Thr-Thr-Pro-Leu-Leu-Leu-Leu-Asp-Leu-Ala-Leu-Leu-Val-Asp-Ala-Asp-Glu-Gly-Thr-Gly。多肽與粒子間偶聯(lián)采用的linker是4-（N-馬來(lái)酰亞胺甲基）環(huán)己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽（SMCC）（美國(guó)Pierce 公司），用于連接多肽N末端的Cys巰基與粒子表面氨基。利用SMCC linker連接蛋白與納米粒子的方法是：將50 mg SMCC溶于5 mL N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中配成10 mg/mL SMCC溶液，取純化好的高亮度UCP約0.015 mmol，分散于5 mL磷酸緩沖鹽溶液PBS中，將兩者迅速混合，37 ℃振蕩反應(yīng)30 min，用PBS透析除去多余的SMCC，取1 mL 0.15 moL/L pHLIP多肽溶液與透析好的溶液混合，繼續(xù)37 ℃振蕩反應(yīng)30 min。反應(yīng)結(jié)束后，離心沉淀納米粒子并反復(fù)洗滌，于4 ℃保存。

1.2.3 利用pHLIP-UCP納米探針對(duì)早期上尿路上皮癌腫瘤模型進(jìn)行高靈敏成像：建立裸鼠上尿路上皮 癌皮下荷瘤動(dòng)物模型，在接種后第1天進(jìn)行觀察，研 究pHLIP-UCP探針對(duì)早期腫瘤的顯像靈敏度和特異度。移植瘤模型的建立方法：在體外培養(yǎng)上尿路上皮癌細(xì)胞株T24，細(xì)胞計(jì)數(shù)，制備腫瘤細(xì)胞懸液，將制 備好的腫瘤細(xì)胞懸液吹打均勻，固定好動(dòng)物，乙醇棉球消毒注射部位（下肢）的皮膚，按每只動(dòng)物每個(gè)部位0.1 mL（約0.5×106個(gè)細(xì)胞），將連接完畢的pHLIP-UCP納米探針溶液按每只動(dòng)物1 mL注射入腹腔，1 d后進(jìn)行光學(xué)檢測(cè)。采用Maestro小動(dòng)物活體多光譜影像系統(tǒng)，其光譜檢測(cè)范圍為400～950 nm。激發(fā)源是運(yùn)行在980 nm和安全功率為0.2 W的紅外激光二極管[14]。使用電荷耦合元件（charge-coupled device，CCD）相機(jī)捕獲圖像，使用MaestroTMver 2.4軟件包分析所得到的影像，通過(guò)熒光強(qiáng)度判定探針對(duì)上尿路上皮癌腫瘤細(xì)胞的富集程度和靈敏度。

2 結(jié)果

2.1 TEM分析所制備的UCP粒子 當(dāng)溫度從200 ℃開(kāi)始逐漸升高時(shí)，前體開(kāi)始發(fā)生高溫裂解反應(yīng)，從細(xì)小的晶體逐漸團(tuán)聚成較大的晶體團(tuán)簇，在特定溫度（360 ℃），這些小的晶體簇不斷生長(zhǎng)、熟化，最終成為規(guī)則的納米粒子，見(jiàn)圖1。

圖1 在TOPO溶劑相360 ℃下的納米晶體TEM圖

2.2 熒光光譜儀測(cè)定所制備粒子的發(fā)光光譜 Er3+摻雜的UCP發(fā)光納米晶體，Er3+在不同摻雜濃度下可以發(fā)射綠光和紅光2種光譜。分別通過(guò)綠色和紅色濾光片捕獲相應(yīng)光譜，激發(fā)通道上的發(fā)光均勻通透、強(qiáng)度較高；通過(guò)其光譜測(cè)定Er3+粒子摻雜的UCP晶體最大發(fā)射波長(zhǎng)在550 nm左右，紅光發(fā)射區(qū)域在660 nm左右。在激活粒子摻雜濃度為2%，綠色發(fā)射占主要位置；當(dāng)增大激活離子摻雜比例時(shí)，紅光發(fā)射所占的比例也相應(yīng)提高，見(jiàn)圖2。

圖2 Er3+摻雜的UCP晶體（NaYF4:Yb3+，Er3+）光譜圖（白底）和激光激發(fā)圖（黑底）

2.3 UCP納米探針對(duì)荷瘤動(dòng)物模型的成像 CCD器件對(duì)處于近紅外區(qū)的光線依然敏感，利用普通CCD器件拍攝了荷瘤動(dòng)物的熒光圖像，CCD未進(jìn)行光譜過(guò)濾下的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和CCD未進(jìn)行光譜過(guò)濾下的腫瘤，見(jiàn)圖3A。CCD前進(jìn)行光譜過(guò)濾下的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和CCD前進(jìn)行光譜過(guò)濾下的腫瘤，見(jiàn)圖3B。

圖3 上轉(zhuǎn)換活體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和腫瘤CCD成像圖

2.4 利用Maestro系統(tǒng)的光譜分析技術(shù)對(duì)上轉(zhuǎn)換活體動(dòng)物的光譜分析 自然光下裸鼠的形態(tài)，注射上轉(zhuǎn)換納米粒子后分別掃描650～660 nm和540～550 nm所顯示的腫瘤熒光圖，見(jiàn)圖4。利用光譜分析系統(tǒng)分離540～550 nm激發(fā)區(qū)域的熒光光譜，非腫瘤所在區(qū)域?yàn)榧t色激發(fā)光，腫瘤所在區(qū)域?yàn)榫G色激發(fā)光，540～550 nm光譜峰值為上轉(zhuǎn)換熒光發(fā)光區(qū)域，并進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)量，取得光子信號(hào)計(jì)數(shù)平均值（average counts signal，acs），根據(jù)2種測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度與相應(yīng)區(qū)域作圖比較，見(jiàn)圖5。利用光譜分析系統(tǒng)分離650～660 nm激發(fā)區(qū)域的熒光光譜，腫瘤所在區(qū)域?yàn)榧t色激發(fā)光，非腫瘤所在區(qū)域?yàn)辄S色激發(fā)光，650～660 nm光譜峰值為上轉(zhuǎn)換熒光發(fā)光區(qū)域，并進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)量，取得光子信號(hào)計(jì)數(shù)acs值，根據(jù)2種測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度與相應(yīng)區(qū)域作圖比較，見(jiàn)圖6。左后肢部位650～660 nm上轉(zhuǎn)換發(fā)光熒光與自然光疊加后的圖像，用Maestro系統(tǒng)將兩者轉(zhuǎn)換為強(qiáng)度模式下熒光的強(qiáng)度分布情況，見(jiàn)圖7。右后肢部位540～550 nm上轉(zhuǎn)換發(fā)光熒光與自然光疊加后的圖像，用Maestro系統(tǒng)將兩者轉(zhuǎn)換為強(qiáng)度模式下熒光的強(qiáng)度分布情況，見(jiàn)圖8。650～660 nm和540～550 nm上轉(zhuǎn)換發(fā)光熒光與自然光疊加后的圖像，用Maestro系統(tǒng)將3者轉(zhuǎn)換為強(qiáng)度模式下熒光的強(qiáng)度分布情況，見(jiàn)圖9。

圖4 荷瘤動(dòng)物在自然光及不同波長(zhǎng)下的熒光圖

圖5 活體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤區(qū)域在540～550 nm波長(zhǎng)激發(fā)光下光譜特征及強(qiáng)度

3 討論

上尿路上皮腫瘤的常規(guī)診斷手術(shù)目前有CT尿路成像（computed tomography urography，CTU）、輸尿管鏡檢查、尿細(xì)胞學(xué)檢查等。CTU對(duì)于5～10 mm的病灶具有超過(guò)95%的敏感性和特異性，但在疾病發(fā)生的早期，即鏡下血尿階段的早期上尿路上皮癌的敏感性低下。輸尿管鏡檢查尤其是纖維軟輸尿管鏡可以觀察上尿路的大體形態(tài)并可以到達(dá)腎盂，可以評(píng)估腫瘤的形態(tài)，獲取病理活檢標(biāo)本，但屬于有創(chuàng)操作，且依賴于手術(shù)醫(yī)師的技術(shù)熟練性和腫瘤的大小能否被肉眼可見(jiàn)。尿細(xì)胞學(xué)檢查陽(yáng)性對(duì)于診斷上尿路上皮癌有很強(qiáng)的提示作用，但尿細(xì)胞學(xué)陰性并不能排除惡性腫瘤。因此，發(fā)展新的診斷手段成為提高上尿路上皮癌治療效果的前提條件。

圖6 活體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤區(qū)域在650～660 nm波長(zhǎng)激發(fā)光下光譜特征及強(qiáng)度

圖7 活體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤區(qū)域在650～660 nm上轉(zhuǎn)換熒光與自然光疊加圖及其強(qiáng)度分布示意圖

圖8 活體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤區(qū)域在540～550 nm上轉(zhuǎn)換熒光與自然光疊加圖及其強(qiáng)度分布示意圖

圖9 活體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤區(qū)域在650～660 nm和540～550 nm上轉(zhuǎn)換熒光與自然光疊加圖及其強(qiáng)度分布示意圖

光動(dòng)力診斷（photodynamic therapy，PDT）因?yàn)樯锇踩院?，且不影響化療和放療，成為近幾年研究的熱點(diǎn)[7]。目前，常見(jiàn)的光敏劑有5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）、金絲桃素類化合物、酞菁類化合物。5-ALA在泌尿系統(tǒng)首先被用于早期膀胱癌及轉(zhuǎn)移癌的診斷，但5-ALA的熒光顯示不但可在膀胱移行細(xì)胞癌上，而且增生的膀胱黏膜、鱗狀上皮化生、炎癥或肉芽組織也可出現(xiàn)陽(yáng)性[8]，且生物利用率低，不利于臨床大規(guī)模的推廣[9]。金絲桃素在診斷膀胱癌有較好的特異性和靈敏性[10]，然而，金絲桃素純凈物價(jià)格昂貴，并且目前缺乏合適的溶劑保證其在溶液內(nèi)的溶解度和穩(wěn)定性。

在光學(xué)成像領(lǐng)域中新興的近紅外熒光（nearinfrared fluorescence，NIRF）成像已逐漸受到研究人員的重視[11]。NIRF成像技術(shù)能夠通過(guò)不同的方式降低背景以提高分辨率，但背景自發(fā)熒光依然存在。上轉(zhuǎn)換發(fā)光是一種在紅外光激發(fā)下發(fā)出可見(jiàn)光的發(fā)光現(xiàn)象，研究發(fā)現(xiàn)[12]，基于UCP的分子影像探針具有成像的高靈敏度、產(chǎn)生熒光的高度穩(wěn)定性及生物組織不產(chǎn)生破壞效應(yīng)，因此非常適用于NIRF成像，此外，UCP納米粒子還是一種非常合適的光敏劑輸送載體，它可以連接特異腫瘤靶向分子，在目標(biāo)腫瘤部位結(jié)合富集。CHATTERJEE等[13]首次報(bào)道將聚乙烯亞胺包裹的NaYF4:Yb3+，Er3+納米粒子用于腫瘤細(xì)胞和小動(dòng)物正常組織顯像，結(jié)果表明該納米粒子生物相容性好，對(duì)骨髓干細(xì)胞不產(chǎn)生毒性，腫瘤細(xì)胞成像背景自發(fā)熒光極低；與量子點(diǎn)比較，UCP納米顆粒能穿透更深的組織發(fā)出熒光。本研究以NaYF4為基質(zhì)材料，摻雜20% Yb3+為敏化離子，摻雜2% Er3+作為激活離子。其中敏化離子的作用是吸收激發(fā)光能量，并將其轉(zhuǎn)移給激活離子，作為激活離子的這些稀土元素具有豐富的能級(jí)，在激發(fā)光下產(chǎn)生較強(qiáng)的發(fā)射光譜。對(duì)于上轉(zhuǎn)換發(fā)光成像，由于其原理在于近紅外光源激發(fā)，但對(duì)于CCD器件，其對(duì)處于近紅外區(qū)的光線仍然敏感，因此普通的CCD成像對(duì)于發(fā)射光譜的影響主要在于所照射部位的近紅外反射光，這種反射光在CCD上成像呈現(xiàn)粉白色，見(jiàn)圖3A。通常的錯(cuò)誤認(rèn)識(shí)是認(rèn)為激發(fā)光源不純，出現(xiàn)了其他發(fā)射波長(zhǎng)的光譜，因而影響了CCD的成像，但我們可通過(guò)在CCD前進(jìn)行光譜過(guò)濾，去除激發(fā)光干擾，見(jiàn)圖3B。

先前的光學(xué)成像的靶點(diǎn)大多聚焦在特異性的腫瘤細(xì)胞上，將特異性的生物探針與納米粒子耦合，然后輸入動(dòng)物體內(nèi)，通過(guò)被動(dòng)吸收和主動(dòng)吸收途徑與腫瘤細(xì)胞靶向結(jié)合成像。遺憾的是，這種模式在診斷早期上尿路上皮癌上有著巨大的局限性，可能與腫瘤缺乏足夠的特異性分子標(biāo)記以及分子探針與納米粒子耦合后，改變了探針的生物活性等因素有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)：腫瘤細(xì)胞與鄰近宿主各成分之間相互作用后可形成腫瘤-宿主界面微環(huán)境[14]，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度快，組織代謝活性高，從而導(dǎo)致微環(huán)境低氧和酸性增高[15]。腫瘤的微環(huán)境選擇誘導(dǎo)能在惡性環(huán)境下生存的腫瘤細(xì)胞，并促使其繼續(xù)惡變，尤其是酸性微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生、增殖、轉(zhuǎn)移都有著密切關(guān)系?！吧锛{米針筒”技術(shù)[16]合成了一種能靶向聚集在酸性組織，并能夠嵌入到細(xì)胞膜內(nèi)pHLIP的小片段蛋白質(zhì)，應(yīng)用近紅外熒光染料Cy5.5 與pHLIP結(jié)合構(gòu)建靶向探針，對(duì)鼠乳腺癌模型進(jìn)行近紅外熒光成像。結(jié)果表明，pHLIP插入細(xì)胞膜不會(huì)造成膜損傷，且自身非常穩(wěn)定，在腫瘤酸性微環(huán)境組織中明顯富集。直接插入質(zhì)膜比其他抗體類靶向探針在腫瘤部位富集程度要高得多，所以彌補(bǔ)了腫瘤缺乏足夠的特異性分子標(biāo)記的缺點(diǎn)。我們同樣利用了生物針筒技術(shù)這個(gè)特點(diǎn)，將pHLIP與UCP納米粒子鏈接后，利用上轉(zhuǎn)換發(fā)光檢測(cè)結(jié)合Maestro光譜分析系統(tǒng)可以清晰地識(shí)別富集在表皮不同部位的 UCP納米粒子，并且可以通過(guò)分析得到相關(guān)部位的光譜及強(qiáng)度等數(shù)據(jù)。以此作為模型，驗(yàn)證了上轉(zhuǎn)換發(fā)光的低背景發(fā)射以及高的信噪比等特征。發(fā)現(xiàn)pHLIP-UCP納米粒子在成像時(shí)的背景熒光S/N為107，而熒光區(qū)域的S/N為1346，背景熒光幾乎不存下，這說(shuō)明背景熒光幾乎沒(méi)有存在，在注射較強(qiáng)發(fā)光的上轉(zhuǎn)換納米粒子情況下，腫瘤細(xì)胞富集的區(qū)域可以得到極強(qiáng)的熒光信號(hào)。由于沒(méi)有背景熒光，所以在近紅外激光激發(fā)下幾乎看不到小鼠的形態(tài)，見(jiàn)圖7和圖8。將熒光圖片與自然光圖片進(jìn)行疊加后可清晰地進(jìn)行熒光定位；而轉(zhuǎn)換為強(qiáng)度模式下熒光的強(qiáng)度分布情況，顯示探針在腫瘤接種部位較高的富集程度，見(jiàn)圖7和圖9。因此，提示pHLIP-UCP納米探針對(duì)于診斷早期上尿路上皮癌具有高敏感性與特異性。

利用上轉(zhuǎn)換發(fā)光不會(huì)產(chǎn)生背景熒光的特性，建立上尿路上皮癌上轉(zhuǎn)換活體動(dòng)物成像的納米探針，通過(guò)研究表明此探針具有極高的信噪比，由于UCP納米粒子發(fā)光強(qiáng)度高、不淬滅、組織背景熒光低，因此很適合臨床早期尿路上皮腫瘤的顯像應(yīng)用。

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（本文編輯：吳彬）

Imagination of novel targeted molecular imaging probes in the early diagnosis of upper urinary tract epi-thelial carcinoma model

LIAO Guodong1, WANG Lijiang2, YU Weiwen1, ZHANG Jianshe3.
1.Department of Urology, Zhejiang Provincial People’s Hospital, Hangzhou, 310014; 2.Zhejiang University California International Nanosystems Institute, Zhejiang University, Hangzhou, 310027; 3.School of Basic Medical Science, Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325035

Objective: To investigate the characteristic and tumor targeting of up-converting phosphor (UCP) nano-probe in labeling orthotopic transplantation tumor of early upper urinary tract urothelial carcinoma in vivo. Methods: Water soluble UCP was synthesized by high temperature pyrolysis. Then, UCP was link to the pH (low) insertion peptide (pHLIP). Imaging of urothelial tumors in a tumor bearing animal model by pHLIPUCP probe was proceeded using a small animal in vivo multispectral Maestro imaging system (CRI). Results: NaYF4:Yb3+, Er3+upconversion nanocrystals were synthesized with good dispersibility, small particle size and high solution permeability. The upconversion luminescence signal of the UCP nanoprobe had stable luminescence and high sensitivity in the dark environment. Conclusion: The UCP nanoprobe can specifically bound to orthotopic transplanted tumor of upper urinary tract urothelial cancer in vivo, which shows the potential for in vivo imaging of early upper urinary tract epithelial carcinoma.

upper urinary tract epithelial carcinoma; nanoprobe; upconversion imaging; animal model

R604

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2017.08.001

2017-01-16

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目（30900346）；浙 江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（Y2101402）；浙江省公益性技術(shù)應(yīng) 用研究計(jì)劃項(xiàng)目（2014C33129）。

廖國(guó)棟（1977-），男，湖南衡陽(yáng)人，主治醫(yī)師，博士。