□ 周 霞 陳萬勤 傅紅雪 羅金文 浙江省食品藥品檢驗研究院

國內(nèi)食品中磺胺類藥物殘留檢測技術(shù)研究進(jìn)展

□ 周 霞 陳萬勤 傅紅雪 羅金文 浙江省食品藥品檢驗研究院

目前，磺胺類藥物的殘留問題是國內(nèi)重要的食品安全問題之一，檢測食品中的磺胺類藥殘留對人類的健康具有重要意義。檢測食品中痕量藥物的殘留關(guān)鍵是開發(fā)有效的前處理方法和使用精密的分析儀器。隨著人們對食品樣品復(fù)雜體系的分離分析要求不斷提高，開發(fā)能提高檢測效率、降低檢測的成本、準(zhǔn)確可靠、靈敏度高的磺胺類藥物殘留分析方法具有重要意義。本文論述了國內(nèi)磺胺類藥物殘留檢測的研究背景及現(xiàn)狀，綜述食品中磺胺類藥物殘留的前處理方法和檢測方法，以期為食品中磺胺類藥物的殘留檢測提供技術(shù)支持和文獻(xiàn)參考。

磺胺類藥物；食品安全；檢測技術(shù)

目前，食品安全成為了影響廣泛、深遠(yuǎn)的社會問題，已經(jīng)引起了全社會普遍的關(guān)注，雖然食品安全監(jiān)管的力度一直在加大，但是食品安全事件仍然時有發(fā)生。食品安全不僅是保障人類健康、促進(jìn)我國食品行業(yè)可持續(xù)發(fā)展以及我國對外貿(mào)易[1]的發(fā)展需要，也是各行各業(yè)增收增產(chǎn)以及國家社會、經(jīng)濟(jì)、政治穩(wěn)定的重要因素之一，提升食品中磺胺類等藥物的殘留檢測能力，保障食品安全已刻不容緩。養(yǎng)殖戶在動物疾病治療過程中，不按照規(guī)定范圍、劑量、配伍等使用獸藥，或者過多過濫使用獸藥，不僅不利于治療動物的疾病，還導(dǎo)致了動物對藥物產(chǎn)生了耐藥性；在飼料中添加獸藥，不嚴(yán)格執(zhí)行休藥期的相關(guān)規(guī)定，這些都是導(dǎo)致藥物殘留的原因。農(nóng)業(yè)部已經(jīng)發(fā)布了一系列關(guān)于獸藥使用的規(guī)定，但是仍有個別商家盲目追求利潤，私自違規(guī)添加藥物，嚴(yán)重威脅了人們的身體健康。因此，加強(qiáng)對磺胺類等獸藥殘留的檢測，實現(xiàn)快速、高效、靈敏的檢測方法，具有重大意義。

1 磺胺類藥物概述

磺胺類藥物（sulfanilamides，SAs），結(jié)構(gòu)上和對氨基苯甲酸（PABA）類似，可以與PABA競爭，作用于細(xì)菌的二氫葉酸合成酶，阻止以PABA為原料合成所需的四氫葉酸，從而抑制了細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，最終達(dá)到抗菌的效果。該類藥物具有抗菌譜廣[2]、抗菌效果明顯、性質(zhì)穩(wěn)定、價格便宜等優(yōu)點[3]，目前大量用于防治畜禽細(xì)菌性感染疾病。由于磺胺類藥物存在較為嚴(yán)重的副作用，能夠產(chǎn)生排尿和造血紊亂、導(dǎo)致過敏等，且在動物體內(nèi)無法代謝完全，其殘留量通過食物鏈[4]進(jìn)入人體，對人體的健康構(gòu)成威脅[5-6]。動物源性食品的安全問題一直受到各方的重視，對食品中藥物殘留的檢測及監(jiān)控也越來越嚴(yán)格。中國對食品中藥物殘留最高限量作出了嚴(yán)格的規(guī)定，如動物源性食品中磺胺類物質(zhì)最大殘留限量（MRL）為100 μg/kg。由于動物源性食品基質(zhì)比較復(fù)雜，含有大量的脂肪、蛋白質(zhì)等生物基質(zhì)，需要比較合適的樣品前處理方法和分析檢測方法。目前，普遍的磺胺類藥物檢測技術(shù)主要通過線方式手工進(jìn)行樣品前處理，然后用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析檢測。但這些方法都有一個共性問題：技術(shù)人員工作量大、樣品檢測周期長、手工預(yù)處理的雜質(zhì)干擾大、重現(xiàn)性難以保證，以及多種獸藥同時分析時很難滿足所有待測藥物均取得很好的定性定量效果，這些問題是目前磺胺類等藥物殘留檢測中面臨的最大問題。對于日益繁重的檢測任務(wù)來說，開發(fā)快速、準(zhǔn)確、高效的檢測技術(shù)勢在必行。本文論述了國內(nèi)最新的食品中磺胺類藥物的檢測方法，為食品中磺胺類藥物的殘留檢測提供參考。

2 我國食品中磺胺類藥物殘留的提取方式

常用于食品中藥物殘留提取凈化的方法有固相萃取法、液液分配法、分子印跡聚合物法、免疫親和柱層析法等[7]。因為痕量物質(zhì)待測組分含量低和食品基質(zhì)的復(fù)雜性，使得前處理成為整個分析過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一[8]。本文主要介紹以下幾種近年來比較新型的前處理提取方式。

王庚南[9]等利用離子液體單滴微萃取法對肉制品中的磺胺類藥物進(jìn)行提取，對實驗中離子液體等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，獲得了70.6%～95.1%的回收率。該方法只需數(shù)微升的提取溶劑，就可以實現(xiàn)提取、凈化和濃縮一步完成，同時還可以對待測物產(chǎn)生較高的富集倍數(shù)，獲得較好的靈敏度。

王露[10]等制備了高交聯(lián)聚苯乙烯-納米Fe3O4微球作為固相微萃取材料，對牛奶基質(zhì)進(jìn)行凈化，得到94%～105%的回收率。秦?zé)頪11]用磁性石墨烯固相萃取技術(shù)，以磁性石墨烯（G-Fe3O4）納米材料作為磁性固相萃取吸附劑。

王靜[12]等利用快速溶劑萃取儀對水產(chǎn)品中8種磺胺類藥物殘留進(jìn)行提取凈化，減少人工干擾，簡化提取步驟，具有處理時間短、使用溶劑少、萃取效率高等優(yōu)點。

QuEChERS的意思是快速、簡單、經(jīng)濟(jì)、高效、抗干擾、安全[14]。劉洪斌[13]等采用QuEChERS方法對雞蛋樣品進(jìn)行凈化，QuEChERS前處理的方法簡單高效，檢測靈敏準(zhǔn)確，可以滿足大批量的雞蛋樣品磺胺類藥物殘留檢測的要求。郭海霞[15]等人利用QuEChERS液質(zhì)聯(lián)用法，同時檢測豬肉中的121種獸藥，該方法可對性質(zhì)差別大的多類別獸藥同時進(jìn)行分析，在保證檢測周期和節(jié)約成本方面顯示了突出的優(yōu)勢。

王萍[16]等利用超聲萃取技術(shù)以及SAX/PSA雙層柱與HLB固相萃取柱復(fù)合柱對魚肉中的磺胺類藥物進(jìn)行凈化和富集，回收率為80%～117%。

這些新型的提取方式均有靈敏度高、操作簡便等優(yōu)點，適用于食品中痕量藥物殘留的檢測，在今后的應(yīng)用中必定得到推廣。

3 我國食品中磺胺類藥物殘留的檢測技術(shù)

3.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是實驗室較為普遍的檢測方法[17-21]，一般是采用紫外檢測器，文獻(xiàn)報道了蜂蜜、肉制品、牛奶等各類食品基質(zhì)中磺胺類藥物殘留的檢測。例如，馬麗娜[22]等使用了常規(guī)的高效液相色譜紫外檢測對雞蛋中的5種常用磺胺類藥物進(jìn)行檢測，為蛋制品的監(jiān)控提供依據(jù)。也有部分文獻(xiàn)[23-24]報道將磺胺類藥物與其他藥物一起檢測，如沙星類藥物、有機(jī)酸等，優(yōu)化色譜條件后能有較好的分離。目前，使用最多的是采用固相萃取柱凈化后進(jìn)行液相分析，如張筱艷[25]用MCX柱凈化后對牛肉中磺胺類藥物進(jìn)行液相色譜的檢測。

除了紫外檢測器，許旭[26-27]等采用了熒光檢測器，使用在線柱后衍生的方法對磺胺類藥物進(jìn)行衍生，方法中結(jié)合了改良的QuEChERS方法，對不同的衍生劑進(jìn)行考察，建立了一種同時檢測牛肉、雞肉中16種磺胺類藥物的高靈敏度的快速檢測方法。許旭[28]采用同樣的方法建立豬肉中18種磺胺類藥物的殘留量，該方法前處理簡便快速、有機(jī)溶劑用量少，準(zhǔn)確性和靈敏度高。

3.2 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)與高效液相色譜法相比，具有更高的靈敏度和專屬性，文獻(xiàn)[29-37]諸多文獻(xiàn)表明了液質(zhì)聯(lián)用法逐漸成為了實驗室常規(guī)的儀器分析方法，而且由于高的選擇性，與其他藥物如擴(kuò)諾酮、氯霉素、甾體激素類藥物、四環(huán)素等藥物同時檢測，節(jié)省時間成本、人力成本。李曉雯[38]還采用了液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜對磺胺類藥物進(jìn)行檢測。

劉洪斌[39]等采用了UPLC-MS/MS技術(shù)建立了雞蛋中16種磺胺類藥物殘留的檢測方法，該方法使用了磷酸鹽進(jìn)行提取、正己烷去脂，進(jìn)而用MCX柱凈化后，滿足磺胺類藥物殘留檢測的要求。李曉晶[40]等建立了使用超聲輔助分散液液微萃取技術(shù)對磺胺類藥物提取后進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用檢測，獲得了更高的提取回收率。不同化合物結(jié)構(gòu)和不同的提取方式，最終產(chǎn)生了不同的提取回收率。

3.3 免疫分析法

曹喜春[41]等采用了膜免疫芯片檢測牛奶以及豬肝中磺胺類藥物殘留總量的方法，該方法是用PVDF膜作固相基質(zhì)，通過包被抗原濃度以及抗體工作濃度的優(yōu)化，建立了一種簡便、直觀、快速、無需特殊檢測儀器的方法。與IC-ELISA和HPLC方法進(jìn)行比對，三者結(jié)果一致，表明該種新型技術(shù)的結(jié)果可靠。

何進(jìn)[42]等采用了化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法建立了一種成本低、檢測快、檢測批量大的一種適用于肉制品中磺胺類藥物殘留的檢測方法，與儀器法測定結(jié)果一致。

林品言[43]等使用酶聯(lián)免疫法對水產(chǎn)品中的磺胺類藥物進(jìn)行快速檢測，具有儀器簡便、靈敏度高、檢測快、費用低、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點，多用于現(xiàn)場檢驗。

免疫分析法綜合具有高度專一性、特異性，但是操作相對繁瑣，結(jié)果經(jīng)比較，文獻(xiàn)報道均可靠。

3.4 電化學(xué)方法

陳文博[5，44]等比較了修飾玻碳電極、自制鉑微電極和嵌入式粉末鉑微電極，較為全面詳細(xì)的比較優(yōu)化了各類條件，基于玻碳電極，利用藥物在一定的電位下可發(fā)生電聚合氧化反應(yīng)的原理，建立一種快速的電化學(xué)檢測方法。電化學(xué)分析法儀器設(shè)備較為簡單，但是在選擇性方面可能低于其他檢測技術(shù)。

3.5 試劑盒

黨娟[45]等開發(fā)了直接競爭CLIA檢測試劑盒，與免疫法和液質(zhì)聯(lián)用發(fā)的檢測結(jié)果一致，該方法是一種穩(wěn)定、可靠、實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測的一種方法。

張勛[46]使用一種金納米棒快速測試紙進(jìn)行磺胺類藥物殘留的檢測，將膠體金標(biāo)記抗體復(fù)合物直接在微孔中凍干，使得檢測過程中待測樣與金標(biāo)抗體反應(yīng)充分，對傳統(tǒng)的膠體金免疫層析紙進(jìn)行改良優(yōu)化，提高了檢測的靈敏度。

試劑盒的使用具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、方便、快速等優(yōu)點。

3.6 毛細(xì)管電泳法

代婷婷[47]等利用磺胺類藥物在堿性介質(zhì)中抑制Ag配合物與魯米諾化學(xué)發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度，建立了毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光法檢測法，其重現(xiàn)性、穩(wěn)定性需要加強(qiáng)。

3.7 化學(xué)顯色法

周秀錦[48]等采用化學(xué)顯色快速檢測法對磺胺類藥物進(jìn)行檢測，使用試劑簡單，成本低，對實驗室條件要求也低，靈敏度最低可達(dá)50 μg/kg。

3.8 其他新技術(shù)

張[8]汪夏燕[49]等利用整體柱型管內(nèi)固相微萃取具有高萃取容量和低的傳質(zhì)阻力，實現(xiàn)了高通量樣品的萃取分析，成功建立了管內(nèi)固相微萃取-毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測聯(lián)用系統(tǒng)，具有綠色環(huán)保、操作簡單、萃取效率高等優(yōu)點，在食品安全領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

鐘文英[50]等利用了可視化蛋白芯片分析技術(shù)，采用間接競爭法反應(yīng)原理，實現(xiàn)牛乳樣本中磺胺類藥物殘留的快速初篩，對于安全開發(fā)能同時檢測藥物殘留的快速靈敏的方法具有實際意義。

4 結(jié)語

目前，對食品中的磺胺類藥物殘留的理化分析方法主要有高壓液相色譜法、高壓液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、免疫分析法等。液相方法的專屬性較差，已經(jīng)不能滿足復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分更加靈敏準(zhǔn)確地的檢測。液質(zhì)聯(lián)用法具有較高的專屬性和靈敏度，越來越多的實驗室采用該方法進(jìn)行藥物的多殘留分析，但目前文獻(xiàn)的前處理過程較為復(fù)雜，分析周期較長，有些化合物受到基質(zhì)干擾嚴(yán)重。此外，樣品的前處理方法的開發(fā)也極其重要，前處理不僅是整個分析過程的限速步驟，同時處理的過程也直接影響分析結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。隨著人們對食品樣品復(fù)雜體系的分離分析要求不斷提高，開發(fā)能提高檢測效率、降低檢測成本，同時兼具準(zhǔn)確可靠、靈敏度高等優(yōu)點的磺胺類藥物殘留分析方法具有重要意義。

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浙江省科學(xué)技術(shù)廳重大科技專項重大農(nóng)業(yè)項目“肉雞全產(chǎn)業(yè)鏈質(zhì)量安全控制與溯源技術(shù)體系研究與應(yīng)用示范”（編號：2014C02001）；浙江省食品藥品監(jiān)督系統(tǒng)科技計劃項目“在線凈化液質(zhì)連用法在動物源性食品中多獸殘檢測的應(yīng)用”（編號：SP201608）。

羅金文。