□ 謝 甜 陳 亞 重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所

不同取樣量對(duì)金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)準(zhǔn)確率的影響

□ 謝 甜 陳 亞 重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所

通過(guò)調(diào)整稱樣量這一變量，探討其對(duì)金黃色葡萄球菌（以下簡(jiǎn)稱“金葡菌”）定量測(cè)定的影響。采用GB 4789．10-2016的方法，以金葡菌質(zhì)控樣加標(biāo)到樣品，稱量不同質(zhì)量的樣品，測(cè)得數(shù)據(jù)并計(jì)算不同質(zhì)量樣品的檢出率，通過(guò)檢測(cè)結(jié)果比較進(jìn)行方法評(píng)價(jià)。金葡菌質(zhì)控樣品測(cè)出結(jié)果為滿意，A組（1 g）準(zhǔn)確率為0；B組（5 g）準(zhǔn)確率為6．3%；C組（10 g）準(zhǔn)確率為29．2%；D組（25 g）準(zhǔn)確率為33．3%；E組（50 g）準(zhǔn)確率為39．6%。最后可得出稱樣量越大，準(zhǔn)確率會(huì)逐漸提高，但應(yīng)根據(jù)實(shí)際操作情況來(lái)確定稱樣量[1-2]。

金黃色葡萄球菌；定量檢測(cè)；生理鹽水

1 實(shí)驗(yàn)材料

90 mL生理鹽水兩瓶、無(wú)菌生理鹽水2 000 mL、空錐形瓶2個(gè)、空試管10支、生理鹽水稀釋管9 mL/支（10支）、均質(zhì)袋若干、拍打氏均質(zhì)器、金黃色葡萄球菌質(zhì)控樣1支（中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心QCFD-009 參考值：3 700 CFU/mL；參考值區(qū)間：990-14 000 CFU/mL）、BP平板50皿（北京陸橋技術(shù)股份有限公司 生產(chǎn)批號(hào)：170618）和重量稀釋儀（interscience diluflow）。

2 實(shí)驗(yàn)具體步驟

（1）選樣品燒烤味香菇豆干約300 g（廠家：重慶市鐘無(wú)極食品有限公司 批號(hào)：2017/5/7）。

（2）取樣品25 g，加225 mL生理鹽水均質(zhì)為供試品10-1g/mL，測(cè)定樣品中金葡菌為X cfu/g，見(jiàn)表1。

（3）取金葡菌質(zhì)控樣1支，40 mL水無(wú)菌生理鹽水水化，取25 mL至225 mL生理鹽水中，搖勻得到10-1g/ mL，取1 mL至9 mL生理鹽水稀釋管中得到10-2g/mL，以此類推得到10-3g/mL，見(jiàn)表2。

（4）另取250 g樣品，加入水化的菌液2 mL，以3 000 CFU/mL計(jì)算，則加入了6 000 CFU，均質(zhì)2 min（最好用兩層袋子，防破），樣品中菌落理論濃度為Z=6 000/250=24 CFU/g。

（5）按表3取樣進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取1 mL（制備好的不同組別的樣液）以0.3、0.3、0.4 mL的接種量分別加入3塊BP平板，涂布，36 ℃，48 h；統(tǒng)計(jì)結(jié)果，以該公式（M-X）/Z×100%計(jì)算準(zhǔn)確率。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

（1）稱樣量越大，準(zhǔn)確率會(huì)逐漸提高，但是不會(huì)隨稱樣量增大而呈一定的比例[3]。微生物檢測(cè)不同于理化檢測(cè)，微生物的檢出具有一定的隨機(jī)性，因?yàn)槲⑸镌跇悠分斜旧砭哂幸欢ǖ牟痪鶆蛐浴１热?，?中稱樣量為1 g的A組，檢出金葡菌個(gè)數(shù)為0；說(shuō)明取樣量太小，取到有菌落的樣品的概率太低。

（2）本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了取樣量越大對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確率是越大的，有時(shí)送樣樣品較少，檢驗(yàn)員擅自減少取樣量，這會(huì)影響結(jié)果。從上面的數(shù)據(jù)就可以得知，理論的金葡菌菌落數(shù)約為24 CFU/g，但是不同取樣量測(cè)出的結(jié)果差別還是比較大的。

（3）從整體數(shù)據(jù)上來(lái)看，準(zhǔn)確率是比較低的，稱樣量最大的檢出率為39.6%，主要有以下幾點(diǎn)原因：①微生物是活的，BP平板是選擇性培養(yǎng)基，對(duì)微生物生長(zhǎng)有一定的抑制作用，生命力不強(qiáng)的菌落在競(jìng)爭(zhēng)生長(zhǎng)中死亡；②微生物分布本身具有一定的不均勻性，即使均質(zhì)很久，也不能完全保證其分布均勻。

（4）雖然稱樣量越大檢測(cè)的準(zhǔn)確率越大，但是稱樣量過(guò)大會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的實(shí)際操作。比如，稱樣量為50 g，稀釋成10-1g/mL，則需要稀釋到約500 g，均質(zhì)袋裝到接近2/3，不利于均質(zhì)，也不利于放置。

表1 樣品中金葡菌計(jì)數(shù)表

表2 金葡菌質(zhì)控菌株計(jì)數(shù)表

表3 不同接種量的準(zhǔn)確率表

4 結(jié)語(yǔ)

整個(gè)實(shí)驗(yàn)實(shí)際操作中有很多變量可以去研究，通過(guò)不斷研究，可以更好地理解實(shí)驗(yàn)本身，掌握好試驗(yàn)中的關(guān)鍵點(diǎn)，對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)成敗至關(guān)重要。

[1]吉彥莉，郭勇峰，王敬輝，等．食品微生物學(xué)檢測(cè)能力驗(yàn)證分析[J]．公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015(3)：110-112．

[2]肖波，周陽(yáng)，孫松松．食品中副溶血性弧菌檢測(cè)能力驗(yàn)證分析[J]．預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2017(5)：447-449．

[3]唐愛(ài)明，王輝，夏延斌，等．食品微生物CNAS檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果與分析[J]．食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2012 (3)：222-225．