陳 輝，梁 艷，饒 秋，石群立，周曉軍，馬恒輝

簡(jiǎn)易細(xì)胞塊制作法在玻璃體淀粉樣變性診斷中的應(yīng)用

陳 輝，梁 艷，饒 秋，石群立，周曉軍，馬恒輝

眼球；玻璃體；淀粉樣變性；細(xì)胞塊；剛果紅；甲基紫；病理診斷

人眼球玻璃體淀粉樣變性是一種罕見(jiàn)的疾病，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中僅見(jiàn)少數(shù)病例報(bào)道[1]。其主要癥狀是眼前黑影或羽毛狀飄動(dòng)并伴有視力進(jìn)行性緩慢下降直至完全喪失，眼部檢查可見(jiàn)玻璃體混濁，其間雜有灰色顆粒狀物，而附著于晶狀體后囊的“足盤(pán)樣”混濁有助于診斷[2]。目前醫(yī)學(xué)界認(rèn)為其可能是由于分子構(gòu)象異常導(dǎo)致難溶性的淀粉樣物質(zhì)在細(xì)胞外的異常沉積所致，有些玻璃體混濁可能是全身病變的早期改變，而有些很可能是唯一癥狀[1]。對(duì)于散在、絮狀漂浮以及少量不定形的病變玻璃體，如果按照常規(guī)組織處理方法或普通細(xì)胞學(xué)方法均難以獲得滿(mǎn)意的病理制片效果，給病理醫(yī)師的正確診斷帶來(lái)一定的難度。為此，本科室經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單處理，把散在、絮狀漂浮以及少量不定形的病變玻璃體，制作成簡(jiǎn)易細(xì)胞塊，并在此基礎(chǔ)上行甲基紫染色和甲醇剛果紅染色，就能很好的解決上述問(wèn)題，從而為正確的病理診斷打下了良好的基礎(chǔ)[3]。現(xiàn)將玻璃體簡(jiǎn)易細(xì)胞塊制作法介紹如下。

1 材料與方法

1.1 耗材試劑 一次性試管(50 mL)，一次性吸管(10 mL)，擦鏡紙，石蠟(熔點(diǎn)56～58 ℃)。10%中性福爾馬林、二甲苯、無(wú)水乙醇和95%乙醇，均為分析純，500 mL，購(gòu)自南京化學(xué)試劑公司。1%甲基紫水溶液。1%醋酸水溶液。甲醇剛果紅：剛果紅0.5 g，甲醇80 mL，甘油20 mL。堿性乙醇分化液：氫氧化鉀0.2 g，80%乙醇100 mL。

1.2 儀器設(shè)備 低速離心機(jī)，LEICA ASP300S全自動(dòng)脫水機(jī)，SAKURA Tissue-TeK TEC包埋機(jī)，LEICA RM2235切片機(jī)，Dako Coverstainer染色封片機(jī)。

1.3 組織標(biāo)本 眼球玻璃體渾濁液及沖洗液。樣本量最好在50 mL以上。新鮮標(biāo)本應(yīng)立即加入樣本量5～10倍的10%中性福爾馬林中固定。

1.4 方法 將標(biāo)本靜置10～20 min，經(jīng)低速離心機(jī)2 000 r/min離心5 min，棄上清留沉淀物，用藥匙刮取沉淀物到經(jīng)95%乙醇浸泡的顯微鏡擦鏡紙上，用顯微鏡擦鏡紙包好后在上機(jī)脫水之前先用10%中性福爾馬林預(yù)固定2 h后，再放入全自動(dòng)脫水機(jī)中行后續(xù)常規(guī)脫水、透明、浸蠟處理約12 h[3-4]。脫水后浸入石蠟包埋機(jī)包埋成細(xì)胞塊，再將細(xì)胞塊切成3 μm厚的切片，65 ℃烘干1 h，防止組織脫片[5]。HE染色、甲基紫染色和甲醇剛果紅染色具體染色操作步驟均參考《臨床技術(shù)操作規(guī)范-病理學(xué)分冊(cè)》中的方法進(jìn)行[6]。

2 結(jié)果

光鏡下淀粉樣物質(zhì)呈淺紅色，可見(jiàn)片狀嗜伊紅無(wú)定形物質(zhì)沉積，呈結(jié)節(jié)狀或彌散分布于結(jié)締組織內(nèi)或血管周?chē)缦掭^清楚(圖1)。甲基紫染色后淀粉樣物質(zhì)呈淺紅色，其他組織呈紫色(圖2)。甲醇剛果紅染色后淀粉樣物質(zhì)呈磚紅色，背景不著色，亦可略帶黃色或淡紅色，纖維排列整齊，沿一定方向走行(圖3)。在偏光鏡下觀察淀粉樣物質(zhì)呈黃綠色的雙折光(圖4)。

3 討論

玻璃體位于晶狀體與視網(wǎng)膜之間，是由蛋白質(zhì)(可能一部分是膠原)形成的小纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)做支架，內(nèi)中充以玻璃樣酸而形成的凝膠體，其具有一定的稠度和彈性，從而能保持一定的形體和某種程度的伸縮性，若是玻璃狀體因某種原因(如老年變性、視網(wǎng)膜疾病、葡萄膜炎等等)發(fā)生變性，導(dǎo)致玻璃體混濁，往往難以恢復(fù)。其主要癥狀是眼前黑影或羽毛狀飄動(dòng)并伴有視力進(jìn)行性緩慢下降直至完全喪失，眼部檢查可見(jiàn)玻璃體混濁，其間雜有灰色顆粒狀物。由于玻璃體在制作標(biāo)本時(shí)高度收縮，故一般在常規(guī)取材染色后無(wú)法看到，而把它制作成簡(jiǎn)易細(xì)胞塊就能很好的提供給我們所需要的相關(guān)病理檢查。

由于玻璃體病變的組織標(biāo)本是散在、絮狀漂浮的不定形物，在制作細(xì)胞塊前一定要進(jìn)行離心處理。在上機(jī)脫水之前先用10%中性福爾馬林預(yù)固定2 h，再進(jìn)行常規(guī)脫水等后續(xù)處理，細(xì)胞塊浸蠟要徹底，溫度65～70 ℃，切片厚度不超過(guò)3 μm。采用上述方法制作的細(xì)胞塊更加完整貼片不易碎，染色時(shí)無(wú)背景著色，細(xì)胞清晰，使絕大多數(shù)常規(guī)細(xì)胞涂片不能解決的方法均能通過(guò)簡(jiǎn)易細(xì)胞塊切片進(jìn)行輔助診斷，有效地彌補(bǔ)了普通細(xì)胞涂片及常規(guī)制片的不足，為病理診斷提供了有力的保障。

①②③④

圖1 細(xì)胞塊切片：玻璃體淀粉樣變性，HE染色 圖2 細(xì)胞塊切片：玻璃體淀粉樣變性，甲基紫染色 圖3 細(xì)胞塊切片：玻璃體淀粉樣變性，甲醇剛果紅染色 圖4 淀粉樣物質(zhì)呈黃綠色的雙折光，甲醇剛果紅染色(偏光鏡觀察)

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[2] 石一寧,胡 笳, 李 靜, 等. 家族性玻璃體淀粉樣變性患者甲狀腺激素結(jié)合蛋白基因突變研究[J]. 中華眼底病雜志, 2011,27(5):482-484.

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[5] 梁英杰, 凌啟波, 張 威. 臨床病理學(xué)技術(shù)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2011:8-9.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會(huì). 臨床技術(shù)操作規(guī)范-病理學(xué)分冊(cè)[M]. 北京:人民軍醫(yī)出版社, 2012:150-151.

時(shí)間：2017-8-20 15:27 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170820.1527.027.html

解放軍南京總醫(yī)院病理科，南京 210002

陳 輝，男，技師。E-mail: 753068209@qq.com 馬恒輝，男，副主任技師，通訊作者。E-mail: mafanbushao@163.com

R 446; R 776

B

1001-7399(2017)08-0931-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.08.027

接受日期：2017-03-24