喬宏興，史洪濤，王永芬，姜亞樂(lè)，邊傳周

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南 鄭州 450046； 2.鄭州市益生菌發(fā)酵中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450046；3.河南省益生菌生物轉(zhuǎn)化工程技術(shù)研究中心，河南 鄭州 450046； 4.河南省洛陽(yáng)市孟津縣畜牧局，河南 洛陽(yáng) 471100)

乳酸菌對(duì)苜蓿草粉發(fā)酵品質(zhì)的影響

喬宏興1,2,3，史洪濤1,2,3，王永芬1，姜亞樂(lè)4，邊傳周1,2,3

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南 鄭州 450046； 2.鄭州市益生菌發(fā)酵中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450046；3.河南省益生菌生物轉(zhuǎn)化工程技術(shù)研究中心，河南 鄭州 450046； 4.河南省洛陽(yáng)市孟津縣畜牧局，河南 洛陽(yáng) 471100)

通過(guò)為期60 d的發(fā)酵，探討添加乳酸菌對(duì)苜蓿(Medicagosativa)草粉發(fā)酵品質(zhì)的影響。試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理，分別為添加無(wú)菌水(對(duì)照)、植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum，LP)、屎腸球菌(Enterococcusfaecium，EF)和植物乳桿菌+屎腸球菌(LP+EF)發(fā)酵苜蓿草粉，設(shè)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)采樣進(jìn)行相關(guān)項(xiàng)目測(cè)定。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，發(fā)酵60 d時(shí)各試驗(yàn)組發(fā)酵苜蓿草粉的評(píng)分提高，總酸含量顯著升高(P<0.05)，pH顯著降低；LP、LP+EF和對(duì)照組的干物質(zhì)含量明顯低于EF組；各試驗(yàn)組酸性洗滌纖維含量明顯低于對(duì)照組；有氧暴露7 d后，各試驗(yàn)組的pH均顯著低于對(duì)照組、總酸含量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且只有對(duì)照組中檢測(cè)到酵母菌(Saccharomycetes)和霉菌(Mycete)。綜上可知，添加乳酸菌對(duì)苜蓿草粉的發(fā)酵品質(zhì)、穩(wěn)定性及營(yíng)養(yǎng)組成具有良好的改善作用。

植物乳桿菌；屎腸球菌；苜蓿；發(fā)酵；發(fā)酵品質(zhì)；有氧穩(wěn)定性；成分分析

紫花苜蓿(Medicagosativa)營(yíng)養(yǎng)豐富、適口性好，對(duì)多種動(dòng)物的生長(zhǎng)、繁殖性能以及腸道微生物菌群的改善具有促進(jìn)作用，是一種優(yōu)質(zhì)的飼料原料[1]，在世界范圍內(nèi)廣泛種植，故有“飼料皇后”和“牧草之王”的美稱(chēng)[2-3]。利用現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)，在苜蓿發(fā)酵過(guò)程中能產(chǎn)生大量的菌體以及酶、有機(jī)酸、維生素和細(xì)菌素等有益代謝產(chǎn)物，使苜蓿的營(yíng)養(yǎng)更全面并具備新的功能，如調(diào)節(jié)腸道菌群平衡、提高飼料利用率和機(jī)體免疫力等，使其在動(dòng)物生產(chǎn)上的推廣應(yīng)用價(jià)值大幅提升[4-5]。目前，關(guān)于苜蓿的研究主要集中在提高青貯品質(zhì)方面，利用乳酸菌發(fā)酵苜蓿干草粉及對(duì)發(fā)酵品質(zhì)影響的研究較少。本研究利用乳酸菌對(duì)苜蓿草粉進(jìn)行生物發(fā)酵，探討發(fā)酵產(chǎn)物中的營(yíng)養(yǎng)成分、乳酸菌及其代謝產(chǎn)物的變化，為提高苜蓿草粉的品質(zhì)以及生物飼料添加劑的研究與開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試劑 MRS肉湯、MRS瓊脂和馬鈴薯培養(yǎng)基均購(gòu)于北京澳博星生物技術(shù)有限公司。

1.1.2 發(fā)酵菌種 發(fā)酵菌種為植物乳桿菌、屎腸球菌(由河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院鄭州市益生菌發(fā)酵中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供)，菌種所含活菌數(shù)均為1×108cfu·mL-1。

1.1.3 發(fā)酵原料 新鮮的苜蓿(取自新密市苜蓿草生產(chǎn)基地)，現(xiàn)蕾期刈割，用鍘草機(jī)鍘成約2 cm的小段，適當(dāng)晾曬后置于60 ℃烘箱中烘24 h。將苜蓿干草(莖葉比約為2∶1)粉碎使其粒徑約為0.613 mm，密封保存?zhèn)溆谩＼俎２莘鄣某煞郑焊晌镔|(zhì)(DM)含量94.32%，酸性洗滌纖維(ADF)含量33.46%，中性洗滌纖維(NDF)含量36.98%，總酸含量12.58 g·kg-1，含水量約8%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)置4個(gè)處理，分別為添加無(wú)菌水(對(duì)照)、植物乳桿菌(LP)、屎腸球菌(EF)和植物乳桿菌+屎腸球菌(LP+EF) (混合比例為1︰1)發(fā)酵苜蓿草粉。準(zhǔn)確稱(chēng)量330 g 苜蓿草粉、發(fā)酵菌種和無(wú)菌水，草粉、菌種、無(wú)菌水的質(zhì)量比為6∶1∶2，各處理混合均勻后，裝進(jìn)發(fā)酵袋密封，每袋500 g，置于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵培養(yǎng)。分別在發(fā)酵3、7、15、30和60 d時(shí)采集樣品，于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，共采集60份樣品。

發(fā)酵完成后(60 d)分別取各處理200 g樣品，各處理組分別裝入3個(gè)已滅菌的500 mL燒瓶中，敞口放置于37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中，分別于暴露的第3天和第7天測(cè)定樣品中微生物和有機(jī)酸的含量，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

1.3 項(xiàng)目測(cè)定

1.3.1 苜蓿發(fā)酵后的感官評(píng)定 發(fā)酵60 d后打開(kāi)發(fā)酵袋，對(duì)各處理樣品進(jìn)行感官評(píng)定，參照德國(guó)農(nóng)業(yè)協(xié)會(huì)(Deutche Landwirtschafts Geseutschaft,DLG)對(duì)青貯品質(zhì)感官評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定，分別從氣味、質(zhì)地和色澤3個(gè)方面進(jìn)行等級(jí)評(píng)定[6]。氣味分5級(jí)，對(duì)應(yīng)為0～14分；質(zhì)地分4級(jí)，對(duì)應(yīng)為0～4分；色澤分3級(jí)，對(duì)應(yīng)為0～2分。然后綜合3項(xiàng)得分給出評(píng)分結(jié)果：Ⅰ,優(yōu)良(16～20分);Ⅱ，尚好(15～15分);Ⅲ，中等(5～9分);Ⅳ，腐敗(0～4分)4個(gè)等級(jí)(表1)。

1.3.2 活菌數(shù)的測(cè)定 乳酸菌檢測(cè)按照GB 4789.35-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)[7]，霉菌和酵母菌檢測(cè)按照GB 4789.15-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)所提供的方法進(jìn)行測(cè)定[8]。

1.3.3 pH的測(cè)定 準(zhǔn)確稱(chēng)取25 g發(fā)酵樣品，加入225 mL生理鹽水，浸泡30 min，用攪拌機(jī)勻質(zhì)30 s，先后用4層紗布和定量濾紙過(guò)濾，用酸度計(jì)測(cè)定濾液pH[9]。

1.3.4 發(fā)酵樣品成分測(cè)定 水分測(cè)定參考GB/T 6435-2014 飼料中水分的測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)[10]；Crude protein(CP)測(cè)定參考GB/T 6432-1994 飼料中粗蛋白測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)[11]；Neutral detergent fiber(NDF)參考GB/T 20806-2006 飼料中中性洗滌纖維的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定[12]；Acid detergent fiber(ADF)按照NY/T 1459-2007 飼料中酸性洗滌纖維的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定[13]；總酸按照GB/T 12456-2008 食品中對(duì)應(yīng)總酸的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定[14]。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以平均值表示，以P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 苜蓿發(fā)酵后的感官評(píng)定

各處理在色澤方面均為黃綠色，2分；質(zhì)地方面也無(wú)明顯差異，未出現(xiàn)霉變、粘手現(xiàn)象，4分；氣味方面，對(duì)照組樣品具有丁酸臭味，酸香氣味較淡，8分，其它處理組酸香氣味較濃評(píng)分為14分。綜合評(píng)分結(jié)果，除對(duì)照組感官評(píng)分為2級(jí)尚好以外，其它處理組苜蓿草粉發(fā)酵后的感官評(píng)分均為1級(jí)優(yōu)良。

2.2 苜蓿草粉發(fā)酵過(guò)程中微生物、pH和總酸含量的動(dòng)態(tài)變化

各處理組發(fā)酵樣品在各取樣時(shí)間點(diǎn)均無(wú)霉菌、酵母菌生長(zhǎng)，而對(duì)照組在3、7、15 d時(shí)均檢測(cè)到酵母菌(表3)。發(fā)酵3 d時(shí)，對(duì)照組乳酸菌數(shù)量(0.20×108cfu·g-1)顯著低于其它各處理組(P<0.05)，植物乳桿菌處理的數(shù)量最多，為15.37×108cfu·g-1；發(fā)酵7 d時(shí)，對(duì)照組乳酸菌數(shù)量為6.13×108cfu·g-1，仍顯著低于同時(shí)間點(diǎn)的其它處理組；發(fā)酵30和60 d時(shí)，對(duì)照和各處理組均未檢測(cè)到乳酸菌。

對(duì)照組和其它處理組的pH均隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯變小(表3)。且各處理時(shí)間點(diǎn)處理組的pH均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。15 d以后各處理組的pH基本穩(wěn)定，各處理組間差異不顯著(P>0.05)。

表1 青貯苜蓿感官評(píng)定綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 The composite sensory assessment scores of Medicago sativa stalk silage samples

表2 苜蓿草粉發(fā)酵60 d后的感官評(píng)定結(jié)果Table 2 Results of sensory evaluation of fermented alfalfa meal samples

注：CK，無(wú)菌水(對(duì)照組)；LP，植物乳桿菌組；EF，屎腸球菌組；LP+EF，植物乳桿菌+屎腸球菌。下同。

Note: CK, sterile water (control group); LP, plant-derivedLactobacillus; EF, excrement-derivedEnterococcus; LP + EF, plant-derivedLactobacillusand excrement-derivedEnterococcus; similarly for the following tables.

表3 發(fā)酵產(chǎn)物中微生物及總酸的含量測(cè)定結(jié)果Table 3 Results of microbe counts and total acid production

注：同列不同小寫(xiě)字母表示同一時(shí)間不同處理間差異顯著(P<0.05)。下同。

Note: Different lowercase letters for the same time within the same column indicate significant differences among the experimental groups at the 0.05 level; similarly for the following tables.

在各處理時(shí)間點(diǎn)，對(duì)照組的總酸含量均顯著低于其它處理組的(P<0.05)，發(fā)酵15 d以后各處理組間的總酸含量基本穩(wěn)定，各處理組間差異不顯著(P>0.05)。表明，接種乳酸菌發(fā)酵苜蓿草，發(fā)酵物的pH能快速降到4.2以下并有較高的有機(jī)酸積累，同時(shí)對(duì)酵母和霉菌有很好的抑制作用，有利于提高苜蓿草粉的發(fā)酵品質(zhì)。

2.3 發(fā)酵苜蓿的成分分析

隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，各組DM含量呈升高趨勢(shì)，NDF和ADF含量呈降低趨勢(shì)，CP含量較為平穩(wěn)(表4)。發(fā)酵7和15 d時(shí)，LP+EF組DM含量顯著高于其它各處理組(P<0.05)；發(fā)酵60 d時(shí)，與原料組相比，對(duì)照組、LP、EF、LP+EF組DM含量分別提高了1.67%、3.51%、4.74%和3.40%(P<0.05)。

7和15 d各時(shí)間點(diǎn)各處理組CP含量差異不顯著(P>0.05)；發(fā)酵60 d時(shí)，原料組CP含量(19.93%)顯著低于各處理組CP含量(P<0.05)，各試驗(yàn)組之間CP含量差異不顯著(P>0.05)。發(fā)酵7和15 d時(shí)，各處組NDF含量差異顯著(P<0.05)；發(fā)酵60 d時(shí)，原料組ADF含量(34.46%)顯著高于其它各處理組(P<0.05)。

2.4 發(fā)酵苜蓿在有氧暴露過(guò)程中微生物、pH和總酸含量的動(dòng)態(tài)變化

將發(fā)酵60 d的苜蓿暴露3和7 d時(shí)，對(duì)照組和處理組中均未檢測(cè)到乳酸菌(表5)，只在對(duì)照組中檢測(cè)到酵母菌和霉菌。發(fā)酵3 d時(shí)，對(duì)照組中酵母菌和霉菌數(shù)量分別為1.56×104和4.32×104cfu·g-1；發(fā)酵7 d時(shí)，對(duì)照組中酵母菌和霉菌數(shù)量分別為2.05×104、10.5×105cfu·g-1。

暴露3和7 d時(shí)，對(duì)照組pH分別為4.93、5.32，均顯著高于其它處理組(P<0.05)；總酸含量方面，暴露3和7 d時(shí)，對(duì)照組總酸含量分別為14.05、11.52 g·kg-1，均明顯低于其它處理組(P<0.05)(表5)。

表5 暴露發(fā)酵苜蓿草粉中微生物及有機(jī)酸的含量測(cè)定結(jié)果Table 5 Results of microbe counts and total acid production in alfalfa meal samples fermented under exposure to air

3 討論

3.1 乳酸菌對(duì)苜蓿發(fā)酵品質(zhì)的影響

乳酸菌是一類(lèi)常用的發(fā)酵添加劑，在牧草青貯、飼料原料和中藥發(fā)酵等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。大量研究表明[15-16]，添加乳酸菌能夠提高青貯飼料中乳酸含量、降低pH，減少干物質(zhì)和蛋白質(zhì)等的損失，同時(shí)乳酸菌在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中能產(chǎn)生多種酶、維生素和乳酸菌素等有益代謝產(chǎn)物，從而獲得優(yōu)質(zhì)的青貯飼料。本研究利用乳酸菌發(fā)酵苜蓿干草粉，各處理組評(píng)分結(jié)果均為1級(jí)，對(duì)照組為2級(jí)，表明添加乳酸菌能提高苜蓿干草粉的發(fā)酵品質(zhì)。原因可能是接種的乳酸菌在短時(shí)間內(nèi)大量生長(zhǎng)繁殖形成優(yōu)勢(shì)菌群，產(chǎn)生的乳酸使底物pH迅速下降，能夠抑制丁酸菌、大腸桿菌和酵母菌等有害菌的生長(zhǎng)，不良發(fā)酵危害減小。對(duì)照組在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，pH尚未達(dá)到常規(guī)青貯品質(zhì)評(píng)定中低于4.2的標(biāo)準(zhǔn)，其它處理組在發(fā)酵7 d時(shí)，pH均在4.2左右；總酸含量在發(fā)酵15 d時(shí)趨于穩(wěn)定，對(duì)照組總酸含量顯著低于其它處理組。

3.2 乳酸菌發(fā)酵對(duì)苜蓿營(yíng)養(yǎng)成分的影響

優(yōu)質(zhì)的發(fā)酵飼料不僅要求其較高的發(fā)酵品質(zhì)，同時(shí)發(fā)酵后也要具備較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，以滿(mǎn)足畜禽的營(yíng)養(yǎng)需求。苜蓿干草因其較高的蛋白含量和消化吸收率，使其成為高產(chǎn)奶牛的優(yōu)質(zhì)飼料，但在青貯或干草發(fā)酵過(guò)程中，其自身蛋白酶能使蛋白分解為游離氨基酸和氨態(tài)氮等非蛋白氮，造成嚴(yán)重的蛋白損失并降低總氮利用率[17]。NDF和ADF含量是反映纖維品質(zhì)好壞的最有效的指標(biāo)，ADF含量與動(dòng)物的消化率呈負(fù)相關(guān)，因此通過(guò)檢測(cè)發(fā)酵前后NDF和ADF的含量，對(duì)發(fā)酵苜蓿草營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的評(píng)定具有重要的參考價(jià)值[18]。本研究通過(guò)接種乳酸菌發(fā)酵苜蓿，發(fā)酵完成后LP、EF、LP+EF組與對(duì)照組相比，CP、NDF含量差異不顯著，ADF明顯低于對(duì)照組，但各處理之間ADF含量差異不顯著。與原料相比，除NDF含量差異不顯著外，各組其它指標(biāo)均明顯優(yōu)于原料。原因可能是發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的有機(jī)酸導(dǎo)致pH降低，蛋白酶的活性及有害微生物的不良發(fā)酵作用受到抑制，使發(fā)酵品質(zhì)得到提高。

3.3 有氧暴露對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物中微生物、pH和總酸含量動(dòng)態(tài)變化的影響

相關(guān)研究表明，有氧暴露時(shí)pH的變化能直觀地反映出青貯飼料的腐敗速度和程度[19]，而未解離的短鏈脂肪酸進(jìn)入微生物細(xì)胞并釋放H+，通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)部的pH抑制酵母和霉菌等真菌的生長(zhǎng)[20]。對(duì)照組暴露7 d后，pH顯著升高至5.32，總酸含量降低了約20%；其它處理組pH在有氧暴露階段上升緩慢且均保持在4.2以下，總酸含量略有下降。在暴露3和7 d時(shí)，對(duì)照組中均檢測(cè)到酵母和霉菌的存在，并且數(shù)量呈上升趨勢(shì)，其它處理組在有氧暴露階段均未檢測(cè)到，這可能是因?yàn)檩^高有機(jī)酸的含量和低pH對(duì)酵母和霉菌的生長(zhǎng)有抑制作用的緣故。本研究表明，在有氧暴露階段，與對(duì)照組相比，乳酸菌的處理組pH較低、總酸含量較高，有利于提高發(fā)酵產(chǎn)物的有氧穩(wěn)定性。

4 結(jié)論

在苜蓿中添加植物乳桿菌、屎腸球菌以及二者的復(fù)合菌液，均能改善苜蓿草粉的品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分組成，增加總酸含量，降低發(fā)酵產(chǎn)物pH，增強(qiáng)其氧穩(wěn)定性。綜上所述，單一和復(fù)合乳酸菌處理均有益于苜蓿草粉的開(kāi)發(fā)和利用。

References:

[1] Sebastian B,Pablo Z,Cecilia C.Addition of inulin,alfalfa and citrus pulp in diets for piglets:Influence on nutritional and faecal parameters,intestinal organs,and colonic fermentation and bacterial populations.Livestock Science,2015，78:243-250.

[2] 李改英,廉紅霞,孫宇,傅彤,高騰云.青貯紫花苜蓿對(duì)奶牛生產(chǎn)性能、尿素氮和血液生化指標(biāo)的影響.草業(yè)科學(xué),2015,32(8):1329-1336. Li G Y,Lian H X,Sun Y,Fu T,Gao T Y.Effect of alfalfa single on production perfermence,urea nitrogen and blood biochemical index in dairy cow.Pratacultural Scicncc,2015,32(8):1329-1336.(in Chinese)

[3] 張曉娜,宋書(shū)紅,陳志飛,張瑩，楊云貴.紫花苜蓿葉、莖產(chǎn)量及品質(zhì)動(dòng)態(tài).草業(yè)科學(xué),2016,33(4):713-721. Zhang X N,Song S H,Chen Z F,Zhang Y,Yang Y G.Effect of growth stage on yield and quality of leaf and stem.Pratacultural Scicncc,2016,33(4):713-721.(in Chinese)

[4] 劉艷娜.苜蓿青干草替代部分精料對(duì)奶牛生產(chǎn)性能及經(jīng)濟(jì)效益的影響.鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文,2015. Liu Y N.Effect of alfalfa hay substituting part of the concentrate on the production of cows and economic profit.Master Thesis.Zhengzhou:Henan Agricultural University,2015.(in Chinese)

[5] 侯建建,白春生,張慶,玉柱.單一和復(fù)合乳酸菌添加水平對(duì)苜蓿青貯營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)及蛋白組分的影響.草業(yè)科學(xué),2016,33(10):2119-2125. Hou J J,Bai C S,Zhang Q,Yu Z.Effects of different additive amount of single and multiple lactic acid bacteria on the silage quality and protein fractions of alfalfa.Pratacultural Science,2016,33(10):2119-2125.(in Chinese)

[6] 張子儀.中國(guó)飼料學(xué).北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000. Zhang Z Y.Chinese Feed.Beijing:Chinese Agricultural Press,2000.(in Chinese)

[7] CN-GB.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn).乳酸菌檢驗(yàn),2010. CN-GB.The National Food Safety Standards in Food Microbe Testing.Lactic acid bacteria inspection,2010.(in Chinese)

[8] CN-GB.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn).霉菌和酵母檢驗(yàn),2010. CN-GB.The National Food Safety Standards in Food Microbe Testing.Mold and yeast inspection,2010.(in Chinese)

[9] Han K J,Collins M,Collins E S.Bale density and moisture effect on alfalfa round bale silage.Crop Science,2004,44(3):914-919.

[10] 孟凡勝,張?zhí)K,粟勝蘭,劉繼明,梁萌,李宏,郭潔,宮玲玲.GB/T 6435-2014飼料中水分的測(cè)定.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

[11] 馬東霞,GB/T 6432-1994飼料中粗蛋白測(cè)定方法.北京:中國(guó)出版社，1994.

[12] 王加啟,于建國(guó),吳克謙,盧德勛,劉建新,侯先志,孫榮鑫,李英,GB/T 20806-2006飼料中中性洗滌纖維的測(cè)定方法.北京：中國(guó)出版社，2006.

[13] 李會(huì)玲，趙彩會(huì)，賈青，李勝，張眉.NY/T 1459-2007飼料中酸性洗滌纖維的測(cè)定.北京:中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，2007.

[14] 龔玲娣，徐清渠。GB/T 12456-2008食品中總酸的測(cè)定方法.北京:國(guó)出版社，2008.

[15] Zhao Q J,Yuan X J,Guo G.Effect of adding an inoculant and molasses on fermentation quality of mixed silage of hull-less barley straw and perennial ryegrass in Tibet.Acta Prataculturae Sinica,2014,23(4):100-106.

[16] Zhang T,Cui Z J,Gao L J,Wen A U,Ba S,Wang Q,Shen Z X,Yu C Q,Shao T.The effect of fermented green juice and silage inoculant bacteria MMD3 on the fermentation of alfalfa silage.Journal of China Agriculture University,2004,9(5):32-37.

[17] Jones B A,Hatfield R D,Muck R E.Characterization of proteolysis in alfalfa and red clover.Crop Science,1995,35(2):537-541.

[18] 葛劍,楊翠軍,劉貴河,楊志敏，白雪梅.混合比例和添加EM菌劑對(duì)紫花苜蓿和裸燕麥混貯品質(zhì)的影響.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,27(12):2093-2099. Ge J,Yang C J,Liu G H,Yang Z M,Bai X M.Effects of mixed ratio and effective microorganism (EM) addition on the mixed silage quality of alfalfa(MedicagosativaL.) and naked oats (Avenanuda).Acta Agriculturae Zhejiangensis,2015,27(12):2093-2099.(in Chinese)

[19] 王力生,齊永玲,陳芳,李大威,陳茂基.不同添加劑對(duì)筍殼青貯品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的影響.草業(yè)學(xué)報(bào),2013,22(5):326-332. Wang L S,Qi Y L,Chen F,Li D W,Chen M J.Effect of different additives on the quality and nutritional value of bamboo shoot shell silage.Acta Prataculturae Sinica,2013,22(5):326-332.(in Chinese)

[20] Wilkinson J M,Davies D R.The aerobic stability of silage:Key finding and recent developments.Grass and Forage Science,2012,68(1):1-19.

(責(zé)任編輯 茍燕妮)

Effects of lactic acid bacteria on fermentation quality of alfalfa meal

Qiao Hong-xing1,2,3, Shi Hong-tao1,2,3, Wang Yong-fen1,Jiang Ya-le4, Bian Chuan-zhou1,2,3

(1.College of Bioengineering, Henan University of Animal Husbandry and Economy, Zhengzhou 450046, China；2.Key Laboratory of Probiotics Fermentation Traditional Chinese Medicine of Zhengzhou City, Zhengzhou 450046, China；3.Probiotics Bioconversion Engineering Technology Research Center of Henan Province, Zhengzhou 450046, China；4.Mengjin Animal Husbandry Bureau of Luoyang City, Luoyang 471100, China)

This study aimed to investigate the effects of lactic acid bacteria on the fermentation quality of alfalfa meal. There were four treatment groups, including a control group treated with sterile water and experimental groups treated with plant-derivedLactobacillusplantarumonly, excrement-derivedEnterococcusfaeciumonly, or both of them together. Alfalfa meal samples were obtained and analysed at several time points. Each group had three replicate samples at each time point. The results showed that, compared with the control group, each treatment group had a good sensory assessment score, and all treatment groups showed an increase in total acid content (P<0.05) and a decrease in the pH of the alfalfa silage after 60 d. The dry matter content was higher in the group treated only withE.faeciumthan in the other groups. There were no significant differences in acid detergent fibre content among the three experimental groups (P>0.05), but all the experimental groups had a lower acid detergent fibre content than the control group. After exposing the samples to air for 7 d, we found that the pH were significantly lower in the experimental groups than in the control group, whereas the opposite pattern was observed for total acid content. Yeast and mould were only observed in the control group. In conclusion, fermentation of alfalfa meal withL.plantarumorE.faeciumhad positive effects on its quality, stability, and chemical composition.

Lactobacillusplantarum;Enterococcusfaecium;Medicagosativa; fermentation; fermentation quality; aerobic stability; component analysis

Bian Chuan-zhou E-mail:chuanzhou-bian@126.com

10.11829/j.issn.1001-0629.2016-0477

2016-09-13 接受日期：2017-03-24

河南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(162300410128)；河南省高等學(xué)校青年骨干教師資助計(jì)劃項(xiàng)目(2014GGJS-124)；河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(HUAHE2005001)

喬宏興(1976-)，河南新鄉(xiāng)人，副教授，碩士，研究方向?yàn)橐嫔l(fā)酵中藥。E-mail:zzmzqhx@163.com

邊傳周(1966-)，河南商丘人，教授，碩士，研究方向?yàn)橐嫔l(fā)酵中藥。E-mail:chuanzhou-bian@126.com

S541+.1;S816.6;Q939.11+7

A

1001-0629(2017)08-1741-07

喬宏興,史洪濤,王永芬,姜亞樂(lè),邊傳周.乳酸菌對(duì)苜蓿草粉發(fā)酵品質(zhì)的影響.草業(yè)科學(xué),2017,34(8)：1741-1747.

Qiao H X,Shi H T,Wang Y F,Jiang Y L,Bian C Z.Effects of lactic acid bacteria on fermentation quality of alfalfa meal.Pratacultural Science，2017,34(8)：1741-1747.

后生物生產(chǎn)層