程光卉(平頂山市第一人民醫(yī)院 河南 平頂山 467000)

SPAG9蛋白在不同類型子宮肌肉瘤中免疫組化檢測結(jié)果分析

程光卉
(平頂山市第一人民醫(yī)院 河南 平頂山 467000)

目的 探討分析SPAG9蛋白在不同類型子宮肌肉瘤中免疫組化檢測結(jié)果。方法 選取平頂山市第一人民醫(yī)院2014年2月至2015年10月收治的24例子宮平滑肌肉瘤患者、25例富于細(xì)胞性子宮平滑肌瘤患者、26例子宮平滑肌瘤患者分別作為A、B、C組，3組患者均采用免疫組織化學(xué)技術(shù)進(jìn)行SPAG9蛋白檢測，分析對比檢測結(jié)果。結(jié)果 A、B組SPAG9蛋白表達(dá)陽性率均高于C組，A組SPAG9蛋白表達(dá)水平高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 SPAG9蛋白參與了子宮肌肉瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，因此可作為子宮平滑肌肉瘤、富于細(xì)胞性子宮平滑肌瘤的鑒別指標(biāo)，值得臨床推廣。

SPAG9蛋白；子宮肌肉瘤；免疫組化

子宮平滑肌肉瘤是子宮肉瘤的一種，發(fā)生率約占子宮肉瘤的45%，主要是指來源于子宮肌壁、肌壁間血管壁平滑組織的惡性腫瘤，或者是良性平滑肌瘤的惡性病變，但是少數(shù)患者平滑肌瘤難以區(qū)別良、惡性，臨床鑒別難度大[1-2]。手術(shù)是子宮平滑肌肉瘤治療的常用手段，但是為了降低并發(fā)癥需要明確確定手術(shù)范圍，探尋一種能夠鑒別子宮平滑肌肉瘤的分子標(biāo)記物，本研究主要探討SPAG9蛋白在不同類型子宮肌肉瘤中的表達(dá)水平，旨在為臨床針對性治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取平頂山市第一人民醫(yī)院2014年2月至2015年10月收治的24例子宮平滑肌肉瘤患者、25例富于細(xì)胞性子宮平滑肌瘤患者、26例子宮平滑肌瘤患者分別作為A、B、C組，A組年齡42～65歲，平均(53.2±6.1)歲；B組年齡43～65歲，平均(53.6±5.5)歲；C組年齡41～65歲，平均(52.9±6.0)歲。3組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 測定方法 試劑：由美國Abcam公司生產(chǎn)提供的山羊抗兔二抗試劑盒、兔抗人SPAG9一抗試劑盒、DAB。將標(biāo)本采用甲醛固定并進(jìn)行石蠟包埋，制成蠟塊后進(jìn)行連續(xù)切片，厚度約為5 μm，將其置于預(yù)先進(jìn)行脫水處理的載玻片上并保持平整，分批進(jìn)行染色。染色具體步驟：所有切片首先進(jìn)行松節(jié)油脫蠟，利用蒸餾水進(jìn)行3次水洗并將溫度調(diào)高至98℃，采用枸櫞酸緩沖液(PBS)進(jìn)行抗原熱修復(fù)15 min，然后待室溫冷卻后采用PBS沖洗3次，在標(biāo)本中添加血清于37℃中進(jìn)行孵育30 min，去除血清后滴入一抗，將其稀釋為1∶550，放置于4℃冰箱中儲存過夜，早晨取出于37℃中孵育30 min，再次采用PBS沖洗3次。然后添加二抗于37℃中孵育30 min，DAB顯色30 s后再采用蘇木素復(fù)染2 min，采用鹽酸酒精進(jìn)行標(biāo)本分化，用正常的自來水進(jìn)行沖洗返藍(lán)，脫水后進(jìn)行自然晾干并采用中性樹膠封片。陽性對照：以SPAG9蛋白陽性表達(dá)的正常睪丸組織；陰性對照：以非免疫山羊血清代替一抗。SPAG9蛋白陽性細(xì)胞判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞漿中出現(xiàn)淡黃色至棕褐色顆粒的細(xì)胞。

1.3 觀察指標(biāo) 比較3組不同類型子宮肌肉瘤患者SPAG9蛋白表達(dá)水平以及陽性率。陽性率以及Formwitz(半定量積分法)積分方法：①0分：平均陽性細(xì)胞數(shù)<5%；1分：平均陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%；2分：平均陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%；3分：平均陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%；4分：平均陽性細(xì)胞數(shù)>75%。②根據(jù)無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計(jì)分0～3分。③將上述兩者得分相乘，根據(jù)總分進(jìn)行陽性判定：0、1～4、5～8、9～12分各自對應(yīng)陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性。陽性率=弱陽性率+陽性率+強(qiáng)陽性率。

2 結(jié)果

2.1 3組患者SPAG9蛋白表達(dá)水平以及陽性率 A、B組SPAG9蛋白表達(dá)陽性率均高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組患者SPAG9蛋白表達(dá)水平以及陽性率(n，%)

2.2 A、B組SPAG9蛋白表達(dá)水平 A組患者SPAG9蛋白表達(dá)的Formwitz分值為(9.1±1.8)分，B組SPAG9蛋白表達(dá)的Formwitz分值為(4.8±2.1)分，A組SPAG9蛋白表達(dá)水平高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.681，P<0.05)。

3 討論

子宮肌肉瘤較為罕見，是一組起源于子宮平滑肌組織、子宮間質(zhì)、子宮內(nèi)組織的惡性腫瘤，包括原發(fā)性和繼發(fā)性兩種，約占子宮惡性腫瘤的2%～4%，嚴(yán)重威脅患者的生命健康[3]。該疾病臨床表現(xiàn)特異性不強(qiáng)，與子宮平滑肌瘤、其他惡性腫瘤較為相似，因此術(shù)前診斷難度較大，多行病理學(xué)檢查確診。

據(jù)報(bào)道，形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)(有絲分裂活動、凝固性壞死)是區(qū)分良性、惡性子宮平滑肌瘤的重要、唯一指標(biāo)，但是當(dāng)前越來越多研究表明其并非是絕對指標(biāo)[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，SPAG9蛋白能夠定位人體染色體的17q21.33，是多種腫瘤染色體突變的熱點(diǎn)區(qū)域，與腫瘤的相關(guān)基因擴(kuò)增以及表達(dá)存在相關(guān)性[5]。SPAG9蛋白屬于單拷貝基因，屬于C-Jun氨基端激酶家族成員，與JNK作用蛋白JIP3具有結(jié)構(gòu)同源性，參與細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化等多種活動，與精卵結(jié)合、促分裂原活化激酶信號通路中的分子作用明顯相關(guān)，其在不同組織學(xué)類型腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，可作為腫瘤侵襲性、預(yù)后評估的分子標(biāo)記物。

綜上所述，SPAG9蛋白參與了子宮肌肉瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，因此可作為子宮平滑肌肉瘤、富于細(xì)胞性子宮平滑肌瘤的鑒別指標(biāo)，值得臨床推廣。

[1] 曹敏敏.SPAG9在宮頸腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2014.

[2] 王敏.SPAG9在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[J].西南軍醫(yī),2014,11(5):497.

[3] 劉景城.P16、Bcl-2、P53、Ki-67、ER、PR抗體在子宮平滑肌瘤及平滑肌肉瘤中的表達(dá)研究[D].福州:福建中醫(yī)藥大學(xué),2013.

[4] 魏莉.精子相關(guān)抗原9在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2012,21(5):357.

[5] 潘皆慰.SPAG9在宮頸腺癌中的表達(dá)及其臨床價(jià)值研究[J].中國婦幼保健,2016,31(10):2042.

R 446.8

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.16.068

2016-12-26)