林介軍 周建偉 朱方超 宋麗 鮑洛文 黃智銘

脂肪細(xì)胞因子與肝纖維化乙型肝炎患者肝功能、纖維化及炎癥活動(dòng)程度的相關(guān)性研究

林介軍 周建偉 朱方超 宋麗 鮑洛文 黃智銘

目的 探討肝纖維化乙型肝炎患者脂肪細(xì)胞因子與肝功能、纖維化及炎癥活動(dòng)程度的相關(guān)性。方法 選擇肝纖維化乙型肝炎患者56例為觀察組，健康體檢者20例為對照組。比較兩組網(wǎng)膜素、瘦素、脂聯(lián)素和內(nèi)臟脂肪素水平，分析觀察組各脂肪細(xì)胞因子水平與肝功能指標(biāo)、HBV-DNA的相關(guān)性。觀察組行肝組織活檢并評(píng)價(jià)肝組織炎癥活動(dòng)度（HA）和肝組織纖維化分期（HF），比較不同HA分度和不同HF分期患者的脂肪細(xì)胞因子水平。結(jié)果 兩組脂聯(lián)素、瘦素、內(nèi)臟脂肪素比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），觀察組網(wǎng)膜素水平顯著高于對照組（P＜0.05）。觀察組網(wǎng)膜素、內(nèi)臟脂肪素、瘦素和脂聯(lián)素與ALT、AST、HBV-DNA均無相關(guān)性（均P＞0.05），HA分度0～1者（23例）與HA分度2～3者（33例）各脂肪細(xì)胞因子比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），HFS1～S2期者（21例）與HFS3～S4期者（35例）脂聯(lián)素、瘦素和內(nèi)臟脂肪素比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），而網(wǎng)膜素水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 肝纖維化乙型肝炎患者的網(wǎng)膜素水平升高，且與肝纖維化嚴(yán)重程度相關(guān)，進(jìn)一步探討網(wǎng)膜素與肝纖維化的關(guān)系對于預(yù)防乙型肝炎后肝硬化可能具有一定的意義。

肝纖維化 乙型肝炎 脂肪細(xì)胞因子

越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，脂肪細(xì)胞因子在肝臟脂肪變性、炎癥壞死及肝硬化方面起重要作用[1-3]。肥胖和胰島素抵抗可加快慢性肝病患者肝纖維化進(jìn)程，這一進(jìn)程也是多種脂肪細(xì)胞因子參與的結(jié)果[4]。國外研究提示，丙型肝炎病毒感染與胰島素抵抗密切相關(guān)[5-6]，甚至認(rèn)為丙型肝炎是胰島素抵抗的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[7]。國內(nèi)也有研究認(rèn)為，慢性丙型肝炎伴脂肪肝者某些脂肪細(xì)胞因子如網(wǎng)膜素水平低于未合并脂肪肝的丙肝患者[8]，提示丙型肝炎患者的疾病進(jìn)展與脂肪細(xì)胞因子有關(guān)。乙型肝炎是國內(nèi)最為常見的肝炎性疾病，也是國內(nèi)肝硬化的主要原因。本研究旨在探討肝纖維化的乙型肝炎患者血清脂肪細(xì)胞因子特點(diǎn)，分析脂肪細(xì)胞因子與肝功能、纖維化及炎癥活動(dòng)程度的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2014年4月至2016年3月在溫州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科診治的肝纖維化患者56例為觀察組，其中男32例，女24例；年齡33～63（46.8±11.2）歲；BMI（24.8±2.1）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：乙型肝炎患者；根據(jù)慢性乙型肝炎防治指南（2015更新版）標(biāo)準(zhǔn)[9]，經(jīng)肝臟病理證實(shí)為肝纖維化；患者未開始進(jìn)行抗病毒治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：失代償期肝硬化患者；其他肝臟疾病如脂肪性肝炎、酒精性肝病、其他病毒性肝炎、藥物性肝炎、膽汁性肝硬化、自身免疫性肝炎等患者；合并其他嚴(yán)重疾病如腫瘤、腎病、冠心病、肺纖維化、免疫風(fēng)濕性疾??；不同意參與研究者。選擇同期在本院進(jìn)行體檢的20例健康體檢者為對照組，其中男13例，女7例；年齡32～64（45.7±10.8）歲；BMI（24.7±2.3）kg/m2。兩組性別、年齡、BMI比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對象或其家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 檢測指標(biāo) 觀察組抽取空腹靜脈血5ml，應(yīng)用美國貝克曼庫爾特公司的AU5800全自動(dòng)生化分析儀檢測肝功能，包括ALT、AST，應(yīng)用美國應(yīng)用生物公司的ABI 7300型熒光定量PCR擴(kuò)增儀（美國應(yīng)用生物公司）檢測血清HBV-DNA水平。兩組均應(yīng)用美國Bio-Tek公司酶標(biāo)儀采用ELISA法檢測血清網(wǎng)膜素、瘦素、脂聯(lián)素和內(nèi)臟脂肪素。網(wǎng)膜素試劑盒購自瑞士Apotech公司，批內(nèi)CV 5.1%，批間CV 10.2%。脂聯(lián)素、內(nèi)臟脂肪素試劑盒購自美國Phoenix Pharmaceuticals公司，脂聯(lián)素批內(nèi)CV 8.3%，批間CV 10.1%；內(nèi)臟脂肪素批內(nèi)CV 5.6%，批間CV 7.0%。瘦素試劑盒購自美國Diagnosis Systems Laboratories公司，批內(nèi)CV 5.1%，批間CV 6.5%。

1.2.2 組織病理學(xué)檢查 對所有觀察組患者進(jìn)行肝組織活檢。肝組織活檢采用左側(cè)臥位，局部麻醉后在B超引導(dǎo)下快速穿刺活檢，避開肝臟大的血管和膽管，取病理標(biāo)本后常規(guī)制片，行HE、膠原纖維及網(wǎng)織纖維染色。根據(jù)慢性乙型肝炎防治指南（2015更新版）[9]評(píng)價(jià)肝組織炎癥活動(dòng)度（histologic activity,HA）和肝組織纖維化（histologic fibrosis,HF）分期，HA分為4度：0（無）、1（輕度）、2（中度）和3（重度），HF分為S1～S4 4期，其中S1、S2期為輕度肝纖維化，S3、S4期為重度肝纖維化（S4期為早期肝硬化）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。各脂肪細(xì)胞因子水平與肝功能、HBV-DNA之間的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組對象各脂肪細(xì)胞因子水平比較 見表1。

表1 兩組對象各脂肪細(xì)胞因子水平比較

由表1可見，兩組脂聯(lián)素、瘦素和內(nèi)臟脂肪素比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），觀察組網(wǎng)膜素水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 觀察組各脂肪細(xì)胞因子水平與肝功能指標(biāo)、HBVDNA的相關(guān)性分析 見表2。

表2 觀察組各脂肪細(xì)胞因子水平與ALT、AST、H B V-D N A的相關(guān)性分析

由表2可見，分別以各脂肪細(xì)胞因子的數(shù)據(jù)為因變量，以肝功能指標(biāo)中的ALT、AST及HBV-DNA水平作為自變量，結(jié)果顯示網(wǎng)膜素、內(nèi)臟脂肪素、瘦素和脂聯(lián)素與ALT、AST、HBV-DNA均無相關(guān)性（均P＞0.05）。

2.3 不同HA分度患者脂肪細(xì)胞因子水平比較 將HA分度0～1者作為HA低度組，HA分度2～3者作為HA高度組，兩組脂聯(lián)素、瘦素、內(nèi)臟脂肪素和網(wǎng)膜素比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表3。

表3 不同H A分度患者脂肪細(xì)胞因子水平比較

2.4 不同HF分期患者各脂肪細(xì)胞因子水平比較 將HFS1～S2期者作為低HF分期組，HFS3～S4期者作為高HF分期組，兩組脂聯(lián)素、瘦素和內(nèi)臟脂肪素比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），高HF分期組網(wǎng)膜素水平高于低HF分期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表4。

表4 不同H F分期患者各脂肪細(xì)胞因子水平比較

3 討論

網(wǎng)膜素是2003年發(fā)現(xiàn)的特異性表達(dá)于網(wǎng)膜脂肪組織的細(xì)胞因子，它與脂肪組織分泌的其他細(xì)胞因子如瘦素、脂聯(lián)素和內(nèi)脂素等共同參與了糖代謝及血管內(nèi)皮功能調(diào)節(jié)。本研究顯示4種脂肪細(xì)胞因子中，僅有網(wǎng)膜素在兩組之間存在差異，表現(xiàn)為肝纖維化者網(wǎng)膜素水平顯著高于對照組。國內(nèi)有研究發(fā)現(xiàn)，合并脂肪肝的糖尿病患者的網(wǎng)膜素水平低于未合并脂肪肝的糖尿病患者[10-12]。而國外一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，非酒精性脂肪肝患者網(wǎng)膜素水平升高，甚至可以預(yù)測肝細(xì)胞氣球樣變，提示高網(wǎng)膜素與肝細(xì)胞壞死之間存在關(guān)聯(lián)[13]。在本研究中，觀察組患者網(wǎng)膜素水平升高，與國外Yilmaz等[13]的研究結(jié)果相似。最近Eisinger等[14]探討了失代償期肝硬化患者血清網(wǎng)膜素水平，發(fā)現(xiàn)其網(wǎng)膜素水平顯著高于健康對照組，也與本研究的結(jié)果相似。不同的研究之間存在較大差異，考慮與所研究的人群和肝臟疾病不同有關(guān)，提示網(wǎng)膜素在不同病因?qū)W肝病中的改變是不一樣的，發(fā)揮的作用也存在差異。

本研究相關(guān)分析表明，血清各脂肪細(xì)胞因子水平與ALT、AST、HBV-DNA均無相關(guān)性。Eisinger等[14]以肝硬化患者為研究對象，也未發(fā)現(xiàn)網(wǎng)膜素水平與肝功能存在相關(guān)性；凌偉等[8]以丙型肝炎患者為研究對象，未發(fā)現(xiàn)網(wǎng)膜素與肝功能和HCV病毒載量及基因型存在相關(guān)性，也與本研究結(jié)果相似。本研究這一結(jié)果提示，一方面，血清脂肪細(xì)胞因子水平與肝細(xì)胞損傷和病毒復(fù)制關(guān)系并不密切，另一方面，也不能完全排除研究對象的因素。本研究入選的觀察組均為代償期肝硬化患者，肝功能損傷較輕，肝功能對網(wǎng)膜素水平的影響可能難以顯現(xiàn)出來，需要進(jìn)一步的研究驗(yàn)證。

本研究未發(fā)現(xiàn)不同肝組織炎癥活動(dòng)度之間的脂肪細(xì)胞因子水平存在差異，進(jìn)一步提示血清脂肪細(xì)胞因子水平與肝細(xì)胞損傷和病毒復(fù)制無明顯相關(guān)性。纖維化分期高的慢性乙肝患者的網(wǎng)膜素水平顯著高于纖維化水平低的患者，提示網(wǎng)膜素與乙肝纖維化有關(guān)，可能參與了慢性乙型肝炎向肝硬化的進(jìn)展。李莉等[4]的研究發(fā)現(xiàn)，隨著肝纖維化程度的加重，p53的含量不斷增多，提示p53可能參與了慢性乙型肝炎纖維化的發(fā)生，且該纖維化過程與乙?；揎椨嘘P(guān)。而Zhang等[15]的研究發(fā)現(xiàn)，網(wǎng)膜素可以通過去乙?；黾觩53的穩(wěn)定性，抑制肝細(xì)胞的增生。因此，我們推測p53可能是網(wǎng)膜素影響肝纖維化的機(jī)制之一。但是較高的網(wǎng)膜素水平和較高的肝纖維化分期之間的因果關(guān)系尚難以判定，需要前瞻性的研究來證實(shí)。其他脂肪細(xì)胞因子如脂聯(lián)素、瘦素等在肝纖維化中的作用仍存在爭議[16]，在本研究中未發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素、瘦素與慢性乙肝患者的炎癥和纖維化存在明顯相關(guān)性。

本研究的缺陷在于，首先，這是一個(gè)橫斷面研究，難以解釋各指標(biāo)之間的因果關(guān)系，尤其是涉及到網(wǎng)膜素此類新型脂肪細(xì)胞因子，其生理作用和病理生理作用尚未完全清楚；其次，本研究的主要研究對象是乙肝患者，雖然減少了研究對象的異質(zhì)性，但是縮小了適用范圍，研究結(jié)果的推廣應(yīng)慎重。

綜上所述，肝纖維化乙型肝炎患者的網(wǎng)膜素水平升高，且與肝纖維化嚴(yán)重程度相關(guān)，進(jìn)一步探討網(wǎng)膜素與肝纖維化的關(guān)系對于預(yù)防乙型肝炎后肝硬化可能具有一定的意義。

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Association of serum adipocytokine levels w ith liver function,fibrosis and inflammatory activity in patients w ith hepatitis B

LIN Jiejun,ZHOU Jianw ei,ZHU Fangchao,et al.Department of Gastroenterology,Wenzhou Central Hospital,Wenzhou 325000, China

Liver fib rosis Hepatitis B Fatty cytokine

2017-01-12）（本文編輯：馬雯娜）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.16.2017-99

325000 溫州醫(yī)科大學(xué)定理臨床學(xué)院/溫州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科（林介軍、周建偉、朱方超、宋麗、鮑洛文）；溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科（黃智銘）

黃智銘，E-mail：zg w z005005@163.com

【 Abstract】 Objective To investigate the association of serum adipocytokine levels w ith liver function,severity of fib rosis and inflammatory activity in patients w ith hepatitis B. Methods Fifty six hepatitis B patients w ith hepatic fibrosis(study g roup) and 20 healthy sub jects (control group)were enrolled in the study.The serum levels of lep tin,ad iponectin and visfatin were measured and com pared between two g roups.Liver biopsy was performed in study group and the inflammatory activity of liver tissue (HA)and hepatic fib rosis staging (HF)were evaluated.The correlation of various serum cytokine levels w ith liver function,HBV-DNA load,inflammatory activity and fib rosis stages was analyzed by Pearson correlation analysis in study group. Results Serum omentin level in study group was significantly higher than that in control g roup(P＜0.05),while there were no significant differences in serum adiponectin,lep tin and visfatin levels between two g roups(all P＞0.05).Pearson correlation analysis showed that there was no correlation between retinal pigment,visceral fat hormone,lep tin,ad iponectin and ALT,AST, HBV-DNA in study g roup(P＞0.05).There were no significantd ifferences in serum adiponec tin,lep tin,visfatin and omentilevels between HA 0-1 (low HA index,n=23)and HA 2-3(high HA index,n=33)patients(all P＞0.05),and there were also no differences in ad iponectin,lep tin and visfatin levels between low HF stage(HFS1-S2,n=21)and high HF stage(HFS3-S4,n=35) patients(all P＞0.05),however,the omentin level in high HF stage patients was significantly higher than that in low stage patients (P＜0.05).Conclusion Serum omentin levelis elevated in hepatitis B patients with liver fibrosis and is associated w ith liver fib rosis severity.