周紅偉, 張惠實(shí)， 朱宏飛， 黃喬春 ， 陳建新 ， 王 勇

1江漢大學(xué)教育學(xué)院心理學(xué)系，武漢 430056 2武漢市精神衛(wèi)生中心，武漢 430022 3武漢大學(xué)口腔醫(yī)院麻醉與危重癥醫(yī)學(xué)科，武漢 430079 4武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院神經(jīng)外科，武漢 430022 5湖北大學(xué)教育學(xué)院心理學(xué)系，武漢 430062 6武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，武漢 430071

β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型小鼠背側(cè)紋狀體中乙酰膽堿能受體介導(dǎo)多巴胺傳輸?shù)挠绊?

周紅偉1, 張惠實(shí)2△， 朱宏飛3△， 黃喬春4， 陳建新5， 王 勇6

1江漢大學(xué)教育學(xué)院心理學(xué)系，武漢 4300562武漢市精神衛(wèi)生中心，武漢 4300223武漢大學(xué)口腔醫(yī)院麻醉與危重癥醫(yī)學(xué)科，武漢 4300794武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院神經(jīng)外科，武漢 4300225湖北大學(xué)教育學(xué)院心理學(xué)系，武漢 4300626武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，武漢 430071

目的 探討β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型小鼠背側(cè)紋狀體乙酰膽堿能受體介導(dǎo)多巴胺傳輸?shù)挠绊?。方?將32只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為正常組(CON組)、正常小鼠+β-細(xì)辛醚組(CON-BAS組)、抑郁癥組(DEP組)、抑郁癥+β-細(xì)辛醚組(DEP-BAS組)4組(n=8)。以慢性束縛應(yīng)激建立小鼠抑郁癥模型，用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)及糖水消耗試驗(yàn)測(cè)定小鼠絕望與興趣缺失行為，高效液相-電化學(xué)方法檢測(cè)其伏隔核多巴胺(dopamine，DA)的含量，并用蛋白質(zhì)免疫印跡反應(yīng)檢測(cè)乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)的表達(dá)水平；應(yīng)用快速掃描循環(huán)伏安法(fast-scanning cyclic voltammetry，F(xiàn)SCV)檢測(cè)β-細(xì)辛醚與煙堿型乙酰膽堿能受體(nicotinic acetylcholine receptor，nAChR)拮抗劑DHβE對(duì)小鼠背側(cè)紋狀體多巴胺活性水平的影響。結(jié)果 與CON組相比，DEP-BAS組和DEP組小鼠水中不動(dòng)時(shí)間明顯增加，糖水消耗量和伏隔核中DA含量明顯降低；與DEP組比較，DEP-BAS組小鼠水中不動(dòng)時(shí)間減少，糖水消耗量和伏隔核中DA含量明顯增加，同時(shí)β-細(xì)辛醚預(yù)處理使小鼠腦組織中AChE含量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，F(xiàn)SCV檢測(cè)結(jié)果顯示β-細(xì)辛醚可增加背側(cè)紋狀體多巴胺活性但被DHβE拮抗。結(jié)論 β-細(xì)辛醚可改善小鼠抑郁癥絕望與興趣缺失的行為變化，可能與抑制AChE的活性和激活nAChRs介導(dǎo)的多巴胺傳輸與表達(dá)有關(guān)。

抑郁癥； β-細(xì)辛醚； 多巴胺； 乙酰膽堿酯酶； 煙堿型乙酰膽堿能受體

石菖蒲是多種抗抑郁中藥方劑的重要成份，在治療抑郁癥的研究中發(fā)現(xiàn)其具有保護(hù)神經(jīng)元，增加神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)和減少細(xì)胞凋亡等作用[1-2]，但藥理機(jī)制與有效成份仍不完全明確。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的分泌水平是抑郁癥發(fā)生和治療效果的重要參考指標(biāo)，三環(huán)類抗抑郁藥的主要藥理作用就是鎮(zhèn)靜和提高單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的濃度。在石菖蒲抗抑郁作用[3]的相關(guān)研究中，發(fā)現(xiàn)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如多巴胺(dopamine，DA)和5-羥色胺(5-hydroxytrypta-mine，5-HT)濃度上升。石菖蒲揮發(fā)油的主要成份是α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚，前者是臨床用于平喘的藥物[4]，而β-細(xì)辛醚在鎮(zhèn)靜與抗抑郁癥的相關(guān)機(jī)制研究方面仍很少，如何提高腦內(nèi)多巴胺濃度及其傳輸機(jī)制仍未有相關(guān)研究證據(jù)。本研究擬建立小鼠抑郁癥模型，觀察β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁癥模型小鼠腦內(nèi)多巴胺神經(jīng)元活動(dòng)的影響，為臨床上細(xì)化應(yīng)用中藥石菖蒲提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組

野生型C57BL/6J小鼠40只，鼠齡2～6個(gè)月，體重20～30 g，由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組(CON組)、正常小鼠+β-細(xì)辛醚組(CON-BAS組)、抑郁癥組(DEP組)、抑郁癥+β-細(xì)辛醚組(DEP-BAS組)共4組，每組8只。正常小鼠腦切片行快速掃描循環(huán)伏安法(fast-scanning cyclic voltammetry，F(xiàn)SCV)檢測(cè)多巴胺活性水平，分為正常腦培養(yǎng)基組(CSF組)、煙堿型乙酰膽堿能受體(nicotinic acetylcholine receptor，nAChR)拮抗培養(yǎng)基組(ANT組)、β-細(xì)辛醚培養(yǎng)基組(BAS組)3組，每組8片，另備1片正常腦培養(yǎng)基腦切片做時(shí)序?qū)嶒?yàn)，即于刺激10 min加入β-細(xì)辛醚和30 min加入DHβE。

1.2 試劑與設(shè)備

β-細(xì)辛醚購自天津一方科技有限公司(批號(hào)：00011017-T9k)；nAChR拮抗劑Dihydro-β-erythroidine hydrobromide(DHβE)購自英國Tocris公司。多巴胺(DA)為Fluka公司產(chǎn)品，其余試劑為國產(chǎn)分析純或色譜純；山羊抗乙酰膽堿酯酶抗體購自美國Abcam公司。Goldsystem高效液相色譜儀(美國Beckman公司)、LC-4B電化學(xué)檢測(cè)儀(美國BAS公司)、ODS反相色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特公司)；神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)系統(tǒng)FAST16 mkⅢ(美國Quanteon公司)；碳纖維微電極SF1A WITH NAFION-BOX OF5(中國靈康賽諾科生物科技有限公司)；Mini-PROTEIN?TetraCell系統(tǒng)、Tans-Blot?Turbo全能型蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)和ChemiDoc MP系統(tǒng)(美國Bio-Rad?生物技術(shù)有限公司)；HC-160R高速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新公司)、超聲粉碎儀(日本Sanyo公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)小鼠抑郁癥模型建立與標(biāo)本制備

將小鼠置于進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)房間適應(yīng)環(huán)境，12 h晝夜循環(huán)，自由飲食1周后行體重、糖水偏好及曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)初篩40只小鼠行動(dòng)物分組(見上述1.1)，正常組正常飲食，不予任何刺激；抑郁癥組小鼠置于束縛管中(50 mL離心管，管身制備氣孔，蓋子中心一小鼠尾巴大小穿行孔)，連續(xù)束縛21 d，每天4 h，束縛期間禁飲禁食。各組小鼠在刺激第2天開始灌胃給藥，給藥量分別為：β-細(xì)辛醚處理組口服25 mg/(kg·d)β-細(xì)辛醚混懸液(10 g/L)[5]，CON組和DEP組予等量生理鹽水行對(duì)照處理，持續(xù)給藥至第22天。糖水消耗實(shí)驗(yàn)后，冰盤上剝離大腦并分離伏隔核。分離的標(biāo)本置凍存管中液氮速凍，-86℃低溫保存待測(cè)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 實(shí)驗(yàn)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)及糖水消耗測(cè)試 第1、21天進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)?zāi)M抑郁癥患者的行為絕望[6]，即在高30 cm、直徑20 cm的燒杯中裝入溫度約25℃的水，水平面為距燒杯底部15 cm，小鼠置入6 min后應(yīng)用EthoVision XT跟蹤系統(tǒng)記錄4 min內(nèi)的小鼠不游動(dòng)時(shí)間(自身不下沉、四肢偶爾劃動(dòng)保持漂浮不動(dòng))。第22天進(jìn)行糖水消耗測(cè)試模擬抑郁癥患者的興趣缺失，采用50 mL離心管制備測(cè)試水用瓶，每瓶給予l%蔗糖水25 mL或純水，計(jì)算24 h飲用量，糖水消耗百分比=糖水消耗(g)/(糖水消耗+純水消耗×100%。

1.4.2 高效液相色譜儀檢測(cè)伏隔核單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA含量 取出待測(cè)標(biāo)本，加入0℃ 1 mL的0.1 mol/L HClO4混合液[含0.1 μg/mL 3,4-二羥基芐胺(DHBA)、0.1 mmol/L EDTANa2和0.5 mmol/L Na2SO3]，冰浴勻漿l min，4℃、12 000 r/min離心20 min，取上清50 μL進(jìn)樣。色譜條件:流動(dòng)相為無水乙酸鈉(100 mmol/L)-檸檬酸(85 mmol/L)緩沖液，含0.4 mmol/L正二丁胺，1.0 mmol/L辛烷磺酸鈉，0.2 mmol/L EDTANa2和15%甲醇，pH=3.6，流速1.0 mL/min，柱溫=30℃；單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA的含量采用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算。

1.4.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)AChE表達(dá) 采用RIPA組織裂解液與蛋白酶抑制劑(含1 mg/mL的抑肽酶和亮肽素各100 μL/100 mL，200 mmol/L PMSF、Na3VO4和NaF各500 μL/100 mL)提取腦組織總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度后，加入蛋白上樣緩沖液，100℃蛋白變性5 min。經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳后，轉(zhuǎn)膜和封閉，4℃孵育多克隆AChE(No.ab31276，Abcam，USA)和多克隆β-actin抗體(一抗)(No.ab8229，Abcam，USA)過夜，室溫孵育HRP標(biāo)記的驢抗山羊IgG(二抗)(No.A0181，碧云天生物技術(shù)有限公司)1 h。洗膜后電化學(xué)發(fā)光試劑盒顯影，采用ChemiDocTMMP成像系統(tǒng)成像并檢測(cè)條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參的灰度值比值表示各目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.4.4 制備小鼠大腦切片 正常小鼠處死后斷頭快速取出整個(gè)腦組織，放入225 mmol/L 蔗糖，13.9 mmol/L NaCl，26.2 mmol/L NaHCO3，1 mmol/L NaH2PO4，1.25 mmol/L葡萄糖，2.5 mmol/L KCl，0.1 mmol/L CaCl2，4.9 mmol/L MgCl2和3 mmol/L犬尿喹啉酸溶液的冰浴中應(yīng)用組織共振切片機(jī)(Leica，德國)制備大腦切片。腦切片于人造腦脊液(artificial cerebrospinal，ACSF)(含124 NaCl，1 NaH2PO4，2.5 KCl，1.3 MgCl2，2.5 CaCl2，20葡萄糖，26.2 NaHCO3和0.4抗壞血酸，單位mmol/L)中溫育20 min(30℃)后避光室溫保存?zhèn)錂z。

1.4.5 腦切片處理及分組 腦切片[使用32℃ ACSF灌流富氧化處理(2 mL/min)]分成3組，分別為CSF組、BAS組與ANT組(同1.1)，其中BAS組加入β-細(xì)辛醚1 g，ANT組ACSF加入nAChR拮抗劑DHβE 1 μmol，CSF組ACSF不作處理。

1.4.6 FSCV實(shí)時(shí)檢測(cè)多巴胺活動(dòng)水平 將刺激微電極緊貼背側(cè)紋狀體表面，工作電極充滿ACSF后路刺激電極100～200 μmol/L，插入腦切片約75 μmol/L。使用FSCV系統(tǒng)向工作電極連續(xù)輸入循環(huán)波動(dòng)(100 ms)在-0.4 V到+1.2 V的三角形可變電壓，變化速率為400 V/s，刺激信號(hào)為矩形脈沖100～250 μA，0.2 ms。多巴胺可在工作電極的碳纖維上發(fā)生氧化還原反應(yīng)，其電流變化反映多巴胺釋放和再攝取過程。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0、GraphPad Prism 5和OriginPro 7統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析與作圖。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行Shapiro-Wilk檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析和SNK檢驗(yàn)方法或非參數(shù)檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠的強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果見表1。與CON組比較，第21天DEP-BAS組和DEP組小鼠水中不動(dòng)時(shí)間均明顯增加(均P<0.05)；CON-BAS組小鼠水中不動(dòng)時(shí)間較CON組提高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與DEP組比較，DEP-BAS組小鼠水中不動(dòng)時(shí)間減少(P<0.05)。組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)，第21天DEP組和DEP-BAS組小鼠水中不動(dòng)時(shí)間均比第1天明顯增加(均P<0.05)。

表1 各組小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，s)Table 1 The result of forced swimming test in each group(±s，s)

表1 各組小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，s)Table 1 The result of forced swimming test in each group(±s，s)

組別例數(shù)第1天第21天CON組868.20±4.0767.84±5.74CON-BAS組870.69±2.2069.63±4.41DEP組865.23±5.03124.59±12.04*#DEP-BAS組869.77±5.9292.43±4.34*△#

與CON組比較*P<0.05；與DEP組比較△P<0.05;與第一天比較#P<0.05

2.2 各組小鼠糖水消耗百分比變化

結(jié)果見圖1。與CON組小鼠糖水消耗(79.16±2.55)%比較，DEP組(64.76±1.39)%與DEP-BAS組(72.09±3.25)%明顯降低(均P<0.01)；與DEP組相比，DEP-BAS組小鼠糖水消耗百分比顯著增加(P<0.01)；CON-BAS組為(79.30±1.95)%。

① CON組；② CON-BAS組；③ DEP組；④ DEP-BAS組；*P<0.01圖1 小鼠糖水消耗百分比Fig.1 The score of sucrose consumption test in each group

2.3 各組小鼠伏隔核中DA的含量

結(jié)果見圖2。與CON組小鼠伏隔核中DA的含量(8.69±0.95)ng/g比較，DEP組(5.06±0.74)ng/g與DEP-BAS組(6.91±0.48)ng/g均明顯降低(均P<0.05)，CON-BAS組DA含量(10.87±0.82)ng/g明顯增高(均P<0.05)；與DEP組比較，DEP-BAS組伏隔核的DA含量顯著提高(P<0.05)。

① CON組；② CON-BAS組；③ DEP組；④ DEP-BAS組;*P<0.05圖2 各組小鼠伏隔核中DA含量Fig.2 DA level in NAc in each group

2.4 各組小鼠腦組織AChE表達(dá)

結(jié)果見圖3。與CON組比較，DEP組的AChE表達(dá)上調(diào)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與DEP組和CON組比較，DEP-BAS組和CON-BAS組腦組織AChE表達(dá)均明顯下調(diào)(均P<0.05)；CON-BAS組與DEP-BAS組小鼠腦組織中AChE表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。

① CON組；② CON-BAS組；③ DEP組；④ DEP-BAS組;*P<0.05圖3 各組小鼠腦組織AChE表達(dá)Fig.3 Expression of AChE in brain of each group

2.5 FSCV檢測(cè)各組小鼠體外背側(cè)紋狀體多巴胺活性水平變化

與CSF組相比，BAS組多巴胺活動(dòng)水平明顯提高，ANT組多巴胺活性明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；nAChRs拮抗劑DHβE能使多巴胺的電刺激活動(dòng)減弱；β-細(xì)辛醚能使多巴胺的電刺激活動(dòng)增強(qiáng)，但其受nAChRs拮抗劑DHβE的抑制，圖4。

① CSF組；② BAS組；③ ANT組;*P<0.05
圖4 各組小鼠腦切片背側(cè)紋狀體多巴胺活性水平和多巴胺干預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)序變化
Fig.4 DA activity level in dorsal striatum and at different time points in each group

3 討論

β-細(xì)辛醚，為天南星科植物石菖蒲揮發(fā)油中的主要成份，后者具有較好的抗抑郁作用[3]。中藥復(fù)雜的組分常常干擾對(duì)其療效與不良反應(yīng)的分析，在研究提純自石菖蒲的β-細(xì)辛醚對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大腦神經(jīng)系統(tǒng)影響的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)其減輕大腦的缺血再灌注損傷和減少細(xì)胞凋亡的作用，對(duì)神經(jīng)元具有保護(hù)作用[7-8]。本研究發(fā)現(xiàn)，β-細(xì)辛醚能明顯改善抑郁癥小鼠模型的絕望行為和興趣缺失改變，并提高腦內(nèi)多巴胺的轉(zhuǎn)運(yùn)和表達(dá)水平。

臨床上應(yīng)用三環(huán)類抗抑郁藥(Tricyclic antidepressants，TCA)如咪帕明(Imipramine)、阿米替林(Amitriptyline)、多塞平(Doxepin)和去甲丙米嗪(Desipramine，地昔帕明)、去甲替林(Nortriptyline)及馬普替林(Maprotiline)等治療抑郁癥，其主要機(jī)制為抑制神經(jīng)元突觸前膜對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如DA、5-HT和NA的再攝取，使上述因子濃度升高，促進(jìn)突觸傳遞功能而發(fā)揮抗抑郁作用。但由于其抗膽堿能及心臟方面的副作用，影響了不少患者的生存質(zhì)量。中藥石菖蒲及其復(fù)方制劑在治療抑郁癥[3]時(shí)，有著中藥治療抑郁癥不良反應(yīng)輕等優(yōu)點(diǎn)，但其復(fù)雜的組分中，是否存在有悖于治療作用或副作用大的成分仍需我們進(jìn)行針對(duì)性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討。石菖蒲揮發(fā)油主要成分為α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚，前者已在臨床應(yīng)用于平喘治療，而β-細(xì)辛醚對(duì)小鼠的絕望行為有顯著的治療效果[3]。我們建立小鼠抑郁癥模型，應(yīng)用β-細(xì)辛醚干預(yù)抑郁癥模型小鼠，發(fā)現(xiàn)其明顯減輕小鼠抑郁癥的絕望表現(xiàn)及相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)水平的改變，表現(xiàn)出小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中水下不動(dòng)時(shí)間減少及糖水消耗量和多巴胺表達(dá)水平的增加。

TCA使抑郁癥癥狀好轉(zhuǎn)，是因其可使腦內(nèi)多巴胺濃度增加。左旋多巴治療抑郁癥的療效局限于其透過血腦屏障的程度。β-細(xì)辛醚極易透過血腦屏障進(jìn)入大腦，在腦內(nèi)的半衰期比其他器官長，這一特點(diǎn)應(yīng)用于聯(lián)合左旋多巴等藥物治療動(dòng)物精神疾病模型表現(xiàn)出良好的藥效改善作用[9-11]。大腦管理獎(jiǎng)勵(lì)行為和控制運(yùn)動(dòng)時(shí)會(huì)增加伏隔核中DA的濃度[12]，而DA的釋放主要從中腦的多巴胺神經(jīng)元軸突投射至伏隔核和背側(cè)紋狀體[13]。通過激活多巴胺神經(jīng)元可以增加DA的釋放，但多巴胺神經(jīng)元激活的同時(shí)，紋狀體內(nèi)的乙酰膽堿能神經(jīng)元也能同步激活觸發(fā)DA的釋放，其中煙堿乙酰膽堿受體(nicotinic acetylcholine receptors，nAChRs)能增強(qiáng)DA的轉(zhuǎn)運(yùn)，使伏隔核和背側(cè)紋狀體中的多巴胺濃度提高[14]。乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)是一種能特異性地作用于各類膽堿受體并迅速被乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)破壞的神經(jīng)遞質(zhì)。在我們動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中β-細(xì)辛醚的應(yīng)用，使小鼠腦內(nèi)多巴胺表達(dá)水平提高，是何種機(jī)制讓?duì)?細(xì)辛醚使伏隔核中多巴胺發(fā)生這種變化？我們提取小鼠大腦切片，應(yīng)用FSCV觀察背側(cè)紋狀體中多巴胺的活動(dòng)情況并應(yīng)用β-細(xì)辛醚和nAChRs拮抗劑DHβE探討相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示電刺激后多巴胺的表達(dá)水平明顯升高，β-細(xì)辛醚能增強(qiáng)此種變化，并受DHβE的抑制。我們?cè)趧?dòng)物實(shí)驗(yàn)中使用Western blot檢測(cè)AChE的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)β-細(xì)辛醚使AChE的含量減少。這與我們體外實(shí)驗(yàn)、Deng等[15]和Mukherjee等[16]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。在大腦切片多巴胺活動(dòng)水平的電刺激干預(yù)時(shí)序?qū)嶒?yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)β-細(xì)辛醚能明顯提高大腦切片中多巴胺的活動(dòng)水平，結(jié)合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中小鼠應(yīng)用β-細(xì)辛醚后大腦AChE的含量減少，可改善小鼠抑郁癥的絕望與興趣缺失行為變化，其分子機(jī)制可能因?yàn)棣?細(xì)辛醚可透過小鼠血腦屏障使腦內(nèi)ACh因AChE水解作用而減少，增強(qiáng)了膽堿能神經(jīng)元的激活，增加了DA的釋放[17]；而且應(yīng)用膽堿能受體拮抗劑DHβE后，膽堿能神經(jīng)元的活動(dòng)減弱最終使β-細(xì)辛醚的效應(yīng)減弱的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也逆向證實(shí)了我們的實(shí)驗(yàn)推測(cè)。

膽堿能受體分為毒蕈樣膽堿能受體(muscarinic acetylcholine receptors，mAChRs)和nAChR，而mAChRs在調(diào)節(jié)紋狀體DA傳輸中的作用仍有爭(zhēng)議[18]。α-細(xì)辛醚可以激活mAChR[19]，而關(guān)于β-細(xì)辛醚與mAChRs相關(guān)研究仍缺乏。石菖蒲揮發(fā)油中含有α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚和γ-細(xì)辛醚，其直接用于治療抑郁癥是否存在一個(gè)膽堿能受體介導(dǎo)DA傳輸與表達(dá)平衡的機(jī)制呢？這仍需進(jìn)一步的研究探討。

綜上所述，β-細(xì)辛醚可改善小鼠抑郁癥的絕望與興趣缺失行為變化，可能與抑制AChE的活性和激活nAChRs介導(dǎo)的多巴胺傳輸與表達(dá)有關(guān)。

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(2017-02-28 收稿)

Effect of β-Asarone on Acetylcholine Receptors Mediated Dopamine Transmission in Chronic Depression Mouse Model

Zhou Hongwei1，Zhang Huishi2△，Zhu Hongfei3△etal

1Department of Psychology，School of Education，Jianghan University，Wuhan 430056，China2Department of Psychology，Wuhan Mental Health Center，Wuhan 430022，China3Department of Anesthesiology and Critical Care Medicine，Hospital of Stomatology，Wuhan University，Wuhan 430079，China

Objective To explore the effect of β-asarone on acetylcholine receptors mediated dopamine transmission in depression mouse model.Methods Thirty-two C57BL/6J mice were randomly divided into four groups：①control group(CON)；②saline +β-asarone group(CON-BAS)；③depression group(DEP)；④depression+β-asarone group(DEP-BAS)；(n=8 each group).Mouse depression model was established by chronic restraint stress.The ethology changes were evaluated by forced swimming test and sucrose consumption test.The level of dopamine(DA)in nucleus accumbens(NAc)was assessed by high performance liquid chromatography electrochemical method.The protein expression of acetylcholinesterase(AChE)was assessed by Western blotting.The effects of β-asarone and nicotinic acetylcholine receptors(nAChRs)antagonist dihydro-β-erythroidine hydrobromide(DHβE)on the activity level of DA in dorsal striatum was measured with fast-scan cyclic voltammetry(FSCV).Results Compared with CON group，the score of sucrose consumption test and level of DA of DEP and DEP-BAS group were significantly decreased and the score of forced swimming test was increased in the depression model.As compared with DEP group，the score of forced swimming test was decreased，the score of sucrose consumption test and level of DA significantly increased.β-asarone could attenuate these changes and decrease the level of AChE(P<0.05).The results of FSCV showed β-asarone treatment could activate the DA transmission，but the effect was blocked by DHβE.Conclusion β-asarone could effectively treat depression.It may inhibit AChE and activate the nAChRs to upregulate the expression of DA.

depression； β-asarone； dopamine； acetylcholinesterase； nicotinic acetylcholine receptor

*武漢市衛(wèi)生計(jì)生委科研基金資助項(xiàng)目(No.WX16Z11)；湖北省科技廳科技條件資源開發(fā)項(xiàng)目[湖北省急危重癥醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型共享實(shí)驗(yàn)平臺(tái)](No.2015BCE099)

R749.4

10.3870/j.issn.1672-0741.2017.04.010

周紅偉，女，1970年生，講師，E-mail：598815461@qq.com

△共同通訊作者，Co-corresponding author，張惠實(shí)E-mail：1196941094@qq.com；朱宏飛E-mail：wb000326@whu.edu.cn