龍 謙， 羅 猛， 劉 迪， 劉 波， 胡 劍， 許 川

貴州省人民醫(yī)院胸外科，貴陽 550002

肺癌組織皮層肌動蛋白的表達及對肺癌細胞侵襲、遷移的影響*

龍 謙， 羅 猛， 劉 迪， 劉 波， 胡 劍， 許 川△

貴州省人民醫(yī)院胸外科，貴陽 550002

目的 探討皮層肌動蛋白(Cortactin)在肺癌組織的表達與患者生存預(yù)后的關(guān)系及對肺癌細胞侵襲、遷移的影響。方法 收集貴州省人民醫(yī)院50例行肺葉切除術(shù)的非小細胞肺癌(NSCLC)患者癌組織及癌旁組織，免疫組化染色檢測肺癌組織Cortactin表達，分析Cortactin表達與肺癌患者臨床資料的關(guān)系。對肺癌患者進行隨訪，記錄患者5年生存率；以5年生存率作為評價指標，采用單變量和多變量Cox比例風(fēng)險模型評價患者預(yù)后的影響因素。采用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)抑制肺癌A549細胞Cortactin的表達，劃痕實驗檢測細胞遷移能力，Transwell實驗檢測細胞侵襲能力。結(jié)果 肺癌組織Cortactin高表達率為72.0%(36/50)，癌旁組織高表達率為24.0%(12/50)，肺癌組織Cortactin高表達率明顯高于癌旁組織，兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。腫瘤最大徑≥3 cm組Cortactin高表達率明顯高于腫瘤最大徑<3 cm組，中高分化組Cortactin高表達率明顯高于低分化組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Cortactin高表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(均P<0.05)；Cortactin表達與性別、年齡、TNM分期、組織學(xué)類型無關(guān)(均P>0.05)。Cortactin低表達組5年總生存率為42.1%，高表達組5年總生存率為13.7%，高表達組5年總生存率明顯低于低表達組(P=0.018)。Cox多因素分析顯示腫瘤直徑大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高Cortactin表達是影響患者總生存期的獨立危險因素(均P<0.05)。劃痕實驗顯示Cortactin-siRNA組細胞遷移率明顯小于Cortactin-NC組、Cortactin-BC組；Transwell實驗顯示Cortactin-siRNA組穿膜細胞數(shù)明顯少于Cortactin-NC組、Cortactin-BC組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論 Cortactin表達與肺癌患者生存預(yù)后有關(guān)，抑制Cortactin表達能夠降低肺癌細胞的侵襲、遷移能力，Cortactin有望成為肺癌治療的新靶點。

皮層肌動蛋白； 肺癌； 生存率； 侵襲； 遷移

肺癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)調(diào)查顯示[1]，肺癌發(fā)生率約占全部腫瘤的30%。我國是肺癌高發(fā)國家，由于環(huán)境因素、不良生活習(xí)慣等，肺癌發(fā)病率呈明顯上升趨勢[2]。肺癌的預(yù)后較差，復(fù)發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡率居高不下的主要原因。據(jù)相關(guān)文獻報道[3-4]，約有37%的肺癌患者確診時存在局部浸潤，38%的患者就診時存在遠處轉(zhuǎn)移。近20年來肺癌的診療技術(shù)得到了極大的提高[5]。因此早期發(fā)現(xiàn)肺癌的轉(zhuǎn)移，對提高肺癌的療效、延長患者生存期具有重要意義。皮層肌動蛋白(Cortactin)是位于染色體11q13的多結(jié)構(gòu)域蛋白，能夠與肌動蛋白相關(guān)蛋白Arp2/3復(fù)合物結(jié)合，通過調(diào)節(jié)肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)分支的形成，誘導(dǎo)細胞形成片狀偽足，使細胞獲得侵襲、遷移等能力[6]。目前研究證實Cortactin在肝癌和食管癌等實體腫瘤中呈高表達，并與腫瘤細胞的增殖、侵襲等生物學(xué)行為有關(guān)[7-8]。但是目前尚不清楚Cortactin與肺癌預(yù)后及肺癌細胞侵襲、遷移的關(guān)系。鑒于此，本研究首先檢測Cortactin蛋白在肺癌組織和癌旁組織的表達情況，并進一步采用小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)技術(shù)抑制肺癌A549細胞Cortactin的表達，檢測細胞遷移、侵襲能力的變化，旨在為肺癌的治療提供有效的作用靶點。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

選擇2009年7月至2011年6月貴州省人民醫(yī)院行肺葉切除術(shù)的50例非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)作為研究對象，將術(shù)中切除肺癌組織及配對的癌旁組織(距癌組織邊緣>5 cm)用手術(shù)剪剪成0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的小塊狀，立即置于液氮中保存。病理組織經(jīng)術(shù)后病理檢查證實。所有患者術(shù)前未接受放療、化療或其他抗腫瘤治療，排除合并其他惡性腫瘤、全身嚴重感染及凝血功能異常者。對患者臨床資料進行收集，包括姓名、性別、年齡、腫瘤體積、分化程度、組織學(xué)類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，其中TNM分期參考美國癌癥國際聯(lián)盟抗癌分期手冊(American Joint Committee on Cancer-International Union Against Cancer staging manual)TNM分類系統(tǒng)[9]。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準，患者術(shù)前均被告知研究方案，并自愿簽署知情同意書。術(shù)后對患者進行定期隨訪，術(shù)后第1年每3個月隨訪1次，此后每半年隨訪1次。本研究隨訪截止時間為2016年12月7日。

1.2 細胞來源及培養(yǎng)

肺癌細胞系A(chǔ)549購自美國菌種保藏中心(American type culture collection，ATCC)，A549細胞接種于DMEM培養(yǎng)液(Gibco公司)，含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 mg/mL鏈霉素，在培養(yǎng)箱中于37℃、5%CO2中培養(yǎng)。每隔2～3 d更換1次培養(yǎng)液，每隔3 d傳代1次，選擇傳3代以上細胞用于后續(xù)實驗。

1.3 實驗試劑

RIPA裂解液、胰蛋白酶、二甲基亞砜(DMSO)、胎牛血清、BCA蛋白濃度測定試劑盒購自廣州碧云天生物技術(shù)研究所，Trizol試劑盒、RT-PCR反應(yīng)試劑盒、脂質(zhì)體Lipofectamine 2000TM購自美國Invitrogen公司，Cortactin干擾RNA序列委托上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司合成設(shè)計，Cortactin-siRNA序列：5′-CAAGACCGAAUGGAUAAGU-TT-3′，陰性對照(Cortactin-NC)序列：5′-CGUA-UGCGCGUACUCUAAUTT-3′。RNA提取試劑、SYBR Premix ExTaqⅡ試劑盒購自寶生物工程(大連)有限公司，Transwell小室、Matrigel人工基底膜購自美國BD公司，兔抗人Cortactin多克隆抗體、FITC標記的山羊抗兔熒光二抗購自Santa Cruz公司，聚丙烯酰胺、PVDF膜、十二烷基硫酸鈉購自美國Sigma公司。

1.4 免疫組化染色檢測肺癌組織Cortactin表達

樣本組織用中性甲醛固定，石蠟包埋。將組織標本制成厚度為4 μm的切片，常規(guī)對石蠟包埋切片進行免疫組織化學(xué)染色。切片脫蠟后，將標本在10 nmol/L檸檬酸鈉緩沖液中加熱至97℃持續(xù)20 min，修復(fù)抗原；再加入過氧化氫孵育5 min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。加入1∶200稀釋的Cortactin抗體，4℃孵育過夜。PBS沖洗3次，滴加1～2滴二抗，37℃孵育15 min，DAB顯色液顯色10 min，顯微鏡下觀察圖像。染色強度判定參考以下標準：0分為無染色，1分為弱陽性，2分為陽性，3分為強陽性；陽性細胞比例判定參考以下標準：1分(0%～)，2分(25%～)，3分(50%～)，4分(75%～)。每張切片隨機選擇5個400倍視野，由2位病理科醫(yī)師采用雙盲法進行評價，若判定結(jié)果不一致，則由第3位醫(yī)師做出最后判定。免疫染色評分(IRS)以染色強度和陽性細胞比例綜合評定，兩者相乘，IRS評分0～12分，其中0～3分代表陰性或低表達，>3分為高表達。

1.5 siRNA轉(zhuǎn)染A549細胞

取3代以上生長狀態(tài)良好的A549細胞，以1×105個/孔接種于6孔板中，37℃、5%CO2孵育24 h后進行轉(zhuǎn)染。按照轉(zhuǎn)染種類的不同分為3組：RNA干擾組(Cortactin-siRNA)、陰性對照組(Cortactin-NC)和空白對照組(Cortactin-BC)。Cortactin-siRNA組向每孔中加入5 μL Lipofectamine 2000、5 μL RNA干擾序列和500 μL不含血清的培養(yǎng)液，Cortactin-NC每孔中加入5 μL Lipofectamine 2000、5 μL RNA陰性對照序列和500 μL不含血清的培養(yǎng)液，Cortactin-BC組僅加入5 μL Lipofectamine 2000和500 μL不含血清的培養(yǎng)液。3組細胞均于37℃、5%CO2條件下孵育，待轉(zhuǎn)染48 h后采用RT-PCR檢測各組細胞Cortactin mRNA表達，從Cortactin-siRNA組、Cortactin-NC組、Cortactin-BC組中篩選出轉(zhuǎn)染效率最高的細胞株，擴大培養(yǎng)，用于后續(xù)實驗。

1.6 實時熒光定量PCR檢測細胞Cortactin mRNA表達

收集生長狀態(tài)良好的細胞，加入1 mL Trizol裂解液，冰浴上靜置10 min。紫外分光光度計測定260 nm和280 nm處吸光度值，A260/A280>2.0表示RNA純度合格。取2 μL總RNA進行逆轉(zhuǎn)錄：2 μL總RNA中加入8 μL無核酸酶水和2 μL RT Primer，85℃反應(yīng)5 min后置于冰浴3 min。再向上述12 μL混合物中加入RT緩沖液3 μL、dNTP 0.5 μL、RNase 1 μL、ddH2O 8 μL，反應(yīng)條件：37℃ 60 min，85℃ 5 min。取5 μL逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為模板，利用SYBR Premix ExTaqⅡ試劑盒進行RT-PCR，GAPDH作為內(nèi)參，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 s，95℃變性10 s，60℃延伸40 s，35個循環(huán)后74℃延伸5 min。引物委托上海博尚生物技術(shù)有限公司設(shè)計合成，Cortactin，上游引物：5′-TGGGGAGGGGAATATACACA-3′，下游引物：5′-CTCTAGAGGAAGCCCCTCGT-3′；GAPDH，上游引物：5′-ATGTCGTGGAGTCTACTGGC-3′，下游引物：5′-TG-ACCTTGCCCACAGCCTTG-3′。目的基因表達量用2-ΔΔCt表示，每個樣本均檢測3次。

1.7 免疫印跡法(Western blotting)檢測細胞Cortactin蛋白表達

取對數(shù)生長期細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS沖洗，加入離心管中，再加入1 mL RIPA裂解液置于冰浴上裂解30 min，4℃條件下離心15 min，BCA蛋白濃度試劑盒檢測蛋白純度。將20 μg蛋白提取液置于10%SDS-PAGE電泳分離，常規(guī)濕法轉(zhuǎn)膜，加入5%脫脂牛奶孵育封閉2 h。加入1∶200 Cortactin抗體，4℃孵育24 h。再滴加二抗37℃孵育2 h。PBS沖洗3次，按照ECL化學(xué)發(fā)光顯影試劑盒顯影，以GAPDH作為內(nèi)參照，分析目的條帶相對表達量。

1.8 劃痕實驗檢測細胞遷移能力

將細胞接種于6孔板，待細胞融合度≥70%時進行劃痕實驗。用Marker筆在培養(yǎng)板后均勻劃間距為0.5 cm的橫線(確保每孔至少有4條線穿過)，每孔中鋪1×105個細胞，細胞融合度≥80%時用無菌移液槍槍頭在單層細胞沿底部劃出“一”字劃痕，PBS沖洗3次后，分別于培養(yǎng)0、12、24、36 h在顯微鏡下測量劃痕的寬度，并計算細胞遷移率。細胞遷移率=(初始劃痕寬度-不同時間點劃痕寬度)/初始劃痕寬度×100%。實驗重復(fù)3次，取平均值。

1.9 Transwell實驗檢測細胞侵襲能力

用不含血清的DMEM培養(yǎng)液將轉(zhuǎn)染后細胞濃度調(diào)整為1.0×105個/mL，Transwell上室每孔接種150 μL細胞，下室加入600 μL含有20%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液作為趨化劑，37℃培養(yǎng)48 h，輕輕拭去表面非侵襲性細胞，4%多聚甲醛固定，蘇木精染色10 min，200倍顯微鏡下統(tǒng)計穿透濾膜的細胞數(shù)。

1.10 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織和癌旁組織Cortactin表達

Cortactin蛋白在肺癌細胞胞質(zhì)呈藍色，強陽性表達，在癌旁組織細胞質(zhì)呈淡藍色，弱陽性表達(圖1A)。50例肺癌組織Cortactin高表達率為72.0%(36/50)，癌旁組織高表達率為24.0%(12/50)，肺癌組織Cortactin高表達率明顯高于癌旁組織，兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=23.077，P<0.01)。

2.2 Cortactin表達與肺癌患者臨床資料的關(guān)系

Cortactin表達與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，腫瘤最大徑≥3 cm組Cortactin高表達率明顯高于腫瘤最大徑<3 cm組，中高分化組Cortactin高表達率明顯高于低分化組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Cortactin高表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，各組間比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；Cortactin表達與性別、年齡、TNM分期、組織學(xué)類型無關(guān)(均P>0.05)，見表1。

表1 Cortactin表達與肺癌患者臨床資料的關(guān)系Table 1 Relationship between cortactin expression and clinicopathological data

2.3 Cortactin表達與肺癌患者生存預(yù)后的關(guān)系

50例肺癌患者共有44例獲得完整隨訪資料，其中低表達組隨訪12例，高表達組隨訪32例，低表達組5年總生存率為42.1%，高表達組5年總生存率為13.7%，高表達組5年總生存率明顯低于低表達組(P=0.018)，見圖1B。

A：免疫組化染色檢測肺癌組織和癌旁組織Cortactin表達情況;B：不同Cortactin表達水平肺癌患者生存曲線圖1 Cortactin表達與肺癌患者生存預(yù)后的關(guān)系Fig.1 Correlation of cortactin expression with prognosis of patients with lung cancer

2.4 肺癌預(yù)后的影響因素

單因素和多因素分析顯示，腫瘤直徑大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高Cortactin表達是影響患者總生存率的獨立危險因素(均P<0.05)，見表2。

表2 單因素和多因素分析影響肺癌預(yù)后的影響因素Table 2 Univariate and multivariate analysis of risk factors for prognosis of lung cancer patients

2.5 細胞轉(zhuǎn)染效率評價

RT-PCR及Western blotting結(jié)果顯示，Cortactin-siRNA組Cortactin表達水平明顯低于Cortactin-NC組、Cortactin-BC組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，Cortactin-NC組與Cortactin-BC組Cortactin表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，證實siRNA抑制Cortactin表達的A549細胞模型構(gòu)建成功，見圖2。

2.6 抑制Cortactin表達對A549細胞遷移、侵襲的影響

劃痕實驗顯示Cortactin-siRNA組細胞遷移率明顯小于Cortactin-NC組、Cortactin-BC組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，Cortactin-NC組與Cortactin-BC組細胞遷移率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖3A。Transwell實驗顯示Cortactin-siRNA組穿膜細胞數(shù)明顯少于Cortactin-NC組、Cortactin-BC組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，Cortactin-NC組與Cortactin-BC組穿膜細胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖3B。

A：RT-PCR檢測細胞Cortactin mRNA表達；B～C：Western blotting檢測細胞Cortactin蛋白表達；①Cortactin-BC組；②Cortactin-NC組；③Cortactin-siRNA組；與Cortactin-siRNA組比較，*P<0.05圖2 各組細胞Cortactin表達水平Fig.2 The expression of cortactin in cell lines

A：劃痕實驗檢測細胞遷移能力；B：Transwell實驗檢測細胞侵襲能力；與Cortactin-siRNA組比較，*P<0.05圖3 各組細胞遷移、侵襲能力比較(蘇木精-伊紅染色,×100)Fig.3 The migration and invasion capabilities in cell lines(HE staining,×100)

3 討論

腫瘤細胞轉(zhuǎn)移是一個多階段、多步驟和多基因參與的復(fù)雜生物學(xué)過程[10-11]，包括黏附分子缺失、細胞遷移和侵襲能力增強、腫瘤細胞進入血液循環(huán)轉(zhuǎn)移至其他組織并克隆生長新的腫瘤等。近20年來，盡管肺癌的早期診斷、放化療及其他抗腫瘤治療技術(shù)得到了顯著發(fā)展，但轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)仍是導(dǎo)致肺癌高死亡率的主要原因[12-13]。腫瘤的侵襲、遷移功能與細胞外基質(zhì)降解有關(guān)，并藉此穿透組織的屏障而轉(zhuǎn)移至其他組織或器官。從亞細胞水平看，腫瘤細胞遷移運動的主要動力來源：侵襲性偽足的產(chǎn)生和細胞外基質(zhì)的降解活性[14]。Cortactin是侵襲性偽足的主要功能蛋白，Cortactin通過分泌金屬蛋白激酶參與降解局部基質(zhì)蛋白[15]。Hirooka等[16]報道稱肺癌的侵襲可能與細胞前端片狀偽足的形成有關(guān)。然而Cortactin的表達是否參與侵襲、遷移過程以及Cortactin在此過程中發(fā)揮的作用尚不清楚。

本研究顯示，肺癌組織Cortactin高表達率明顯高于癌旁組織，提示Cortactin可能與肺癌的發(fā)生和進展有關(guān)。進一步分析顯示Cortactin表達與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，說明Cortactin在肺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中被誘導(dǎo)表達。王壘壘等[17]報道稱Cortactin在膠質(zhì)瘤細胞中表達上調(diào)，且與患者不良預(yù)后密切相關(guān)。Zhao等[18]在研究中發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌組織Cortactin表達增加，Cortactin高表達是原發(fā)性肝癌獲得侵襲力的主要因素之一。本研究對肺癌患者進行隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Cortactin高表達組5年總生存率明顯低于低表達組，Cortactin高表達是影響患者總生存率的獨立危險因素，說明Cortactin亦可以作為肺癌早期診斷和預(yù)后評估有價值的指標。陳翔等[19]報道稱Cortactin表達與結(jié)腸癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，Cortactin高表達結(jié)腸癌患者5年生存率為22.1%，低表達組為47.3%，Cortactin表達可能是促進結(jié)腸癌進展的因素之一。Hsu等[20]采用Cox多因素分析食管鱗癌的危險因素，結(jié)果顯示浸潤深度、TNM分期、淋巴管浸潤、Cortactin均是影響食管鱗癌預(yù)后的獨立影響因素。以上研究印證了Cortactin在肺癌中可能起到類似致癌因子的作用，并在肺癌細胞遷移、侵襲的過程中發(fā)揮重要作用。

肺癌細胞多呈侵襲性生長，以微衛(wèi)星灶浸潤肺組織，這亦是肺癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的主要原因。Spillane等[21]研究證實Cortactin通過調(diào)節(jié)N-WASP、Arp2/3核復(fù)合體，誘導(dǎo)形成細胞膜指狀突起結(jié)構(gòu)，并水解局部蛋白，從而促進細胞向遠處轉(zhuǎn)移和侵襲。Ilatovskaia等[22]報道指出Cortactin能夠調(diào)節(jié)Arp2/3發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，使細胞形成更加穩(wěn)定的侵襲性偽足并促進細胞遷移、侵襲運動。在腫瘤細胞的遷移運動中，Cortactin通過誘導(dǎo)偽足形成大量分枝狀肌動蛋白絲，這亦被認為是細胞運動的主要器官[23]。為了在細胞水平驗證Cortactin對肺癌的遷移、侵襲作用，本研究采用siRNA技術(shù)抑制肺癌A549細胞Cortactin表達，并與陰性對照組和空白對照組進行比較，結(jié)果顯示Cortactin-siRNA組細胞遷移率和穿膜細胞數(shù)明顯少于Cortactin-NC組、Cortactin-BC組，說明抑制Cortactin表達能夠降低肺癌細胞的侵襲、遷移能力。本研究由于實驗室條件的限制，尚無法對Cortactin誘導(dǎo)侵襲性偽足的形態(tài)學(xué)變化進行觀察，接下來我們也將聯(lián)系有條件的單位共同研究Cortactin對偽足形態(tài)的變化及定位。此外，本研究的樣本量偏少，僅為50例(尚有6例失訪)，這也可能導(dǎo)致研究的結(jié)果存在偏差，接下來我們將繼續(xù)收集肺癌樣本量，以大樣本量驗證本研究的結(jié)果。

綜上所述，肺癌組織Cortactin呈高表達，Cortactin表達與肺癌患者生存預(yù)后有關(guān)，抑制Cortactin表達能夠降低肺癌細胞的侵襲、遷移能力，Cortactin有望成為肺癌治療的新靶點。

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(2016-12-28 收稿)

Expression of Cortactin in Lung Cancer Tissue and Its Effects on Invasion and Migration

Long Qian，Luo Meng，Liu Dietal

Department of Thoracic Surgery，The People’s Hospital of Guizhou Province，Guizhou 550002，China

Objective To explore the expression of cortactin in lung cancer tissues and its effects on invasion and migration.Methods Non-small cell lung cancer tissue samples were colleted from 50 patients in the People’s Hospital of Guizhou Province.The expression of cortactin in tissues was mearsured by immunohistochemical staining.The relationship between cortactin expression and clinicopathological data was analysed.The patients with lung cancer were followed up postoperatively，and 5-year survival was recorded.For 5-year survival as evaluation index，the prognostic factors were evaluated by univariate and multivariate Cox proportional hazards model.The expression of cortactin in lung cancer cell line A549 was inhibited by siRNA，the cell migration capability was mearsured by wound-healing assay，and the cell invasion capality was mearsured by transwelll assay.Results The expression rate of cortactin in cancer tissue was 72%(36/50)，and 24%(12/50)in paracancerous tissue，the expression rate of cortactin in cancer tissues was significantly higher than that in paracancerous tissues(P<0.01).The expression rate of cortactin in tumor was significantly higher in diameter ≥3 cm than that in tumor with diameter <3 cm，significantly higher in middle and high differentiated group than in poor differentiated group，significantly higher in lymph node metastasis group than in metastasis-free group(allP<0.05).Cortactin expression was not correlated with sex，age，TNM stage and histological type(P>0.05).The 5-year survival rate was 42.1% in low expression group，and 13.7% in high expression group；the 5-year survival rate of high expression group was significantly lower than that of low expression group(P=0.018).Cox multivariate analysis showed that tumor size，lymph node metastasis and high cortactin expression were independent risk factors for overall survival(allP<0.05).The result of wound-healing assay showed that migration cell number of cortactin-siRNA group was significantly less than that of cortactin-NC group and cortactin-BC group.Transwell assay showed that the number of transmembrane cells in cortactin-siRNA group was significantly less than that in cortactin-NC group and cortactin-BC group(allP<0.05).Conclusion The expression of cortactin is related to the prognosis of patients with lung cancer，inhibition of the expression of cortactin can reduce the invasion and migration capability of lung cancer cells，and cortactin is expected to be a new target for the treatment of lung cancer.

cortactin； lung cancer； survival rate； invasion； migration

*貴州省2016年科技聯(lián)合基金項目[No.黔科合作LH(2016)7182]

R734.2

10.3870/j.issn.1672-0741.2017.04.009

龍 謙，女，1987年生，副主任醫(yī)師，E-mail：27314628@qq.com

△通訊作者，Corresponding author，E-mail：xuchuan627@sina.com