□ 王佰潔 鄧立育 劉 鵬 高 波 黑龍江出入境檢驗檢疫局

金昱言 吉林省安信食品技術服務有限責任公司 曹美麗 勝利油田華濱化工有限責任公司

評定分光光度法測定醬鹵肉制品中亞硝酸鹽的不確定度

□ 王佰潔 鄧立育 劉 鵬 高 波 黑龍江出入境檢驗檢疫局

金昱言 吉林省安信食品技術服務有限責任公司 曹美麗 勝利油田華濱化工有限責任公司

通過對分光光度法測醬鹵肉制品中亞硝酸鹽含量測定過程的研究，確定測定結果的不確定度，并依照JJF 1059-1999《測定不確定度的評定與表示》建立不確定度的數(shù)學模型，對各不確定度分量進行合成和擴展，最終建立醬鹵肉制品中亞硝酸鹽含量的不確定度評定方法。結果表明：影響測量結果不確定度的主要因素有5項，按影響大小分別為標準曲線擬合、測量重復性、標準工作溶液制備、溶液定容以及試樣稱量。不確定度報告為醬鹵肉制品中亞硝酸鹽含量(3.9±0.30)mg/kg，包含因子k=2。

亞硝酸鹽；不確定度；分光光度法

測量不確定度是表征被測量值的分散性與測量結果相聯(lián)系的參數(shù)，是判定測量結果質(zhì)量的依據(jù)[1-2]。亞硝酸鹽在肉類制品檢測中是一項重要指標，也是衡量肉類制品品質(zhì)的關鍵指標之一。本文依據(jù)GB/T 5009.33-2008《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定方法》[3]中分光光度法，測量醬鹵肉制品中亞硝酸鹽含量，并依據(jù)JJF 1059-1999《測定不確定度的評定與表示》[4]對測定過程中各個不確定度來源分析和評定，正確評價和使用檢測數(shù)據(jù)提供科學依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 材料與試劑

樣品來源于黑龍江省食品藥品監(jiān)督管理局在黑龍江省內(nèi)地區(qū)各超市及集貿(mào)市場隨機采集的肉制品（含熏煮肉、醬鹵肉等）。

10.6 %亞鐵氰化鉀；22%乙酸鋅溶液；4 g/L對氨基苯磺酸溶液；飽和硼砂溶液；2 g/L鹽酸萘乙二胺溶液；亞硝酸鹽標準使用溶液（5.0 μg/ mL），實驗用水為二級水。

1.2 儀器與設備

電子天平（MSA125P-100-DU， d=0.01 mg，德國賽多利斯公司）；電熱恒溫水浴箱（HWS-24，上海一恒科技有限公司）；分光光度計（721-100，上海欣茂儀器有限公司）。

1.3 實驗方法

稱取均勻試樣5.0 g于50 mL燒杯中，加入飽和硼砂溶液12.5 mL并用玻璃棒攪拌均勻，用大約250 mL 70℃的熱水將樣品洗入500 mL容量瓶中，水浴鍋100 ℃加熱15 min，冷卻后邊震蕩邊加入亞鐵氰化鉀5 mL、乙酸鋅溶液5 mL以沉淀蛋白質(zhì)。放置30 min除去上層脂肪后過濾備用。吸取40 mL濾液及0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5 mL亞硝酸鹽標準使用液于50 mL比色管中，分別加入對氨基苯磺酸溶液2 mL，混和均勻靜置3 min，各加入鹽酸萘乙二胺溶液1 mL，混勻后加水定容。靜置15 min，以2 cm比色皿于波長538 nm處測定吸光度。

2 不確定度來源分析

分析和評定測定過程中各個不確定度來源，測量結果不確定度主要來源于由標準工作溶液制備，稱量質(zhì)量、溶液定容、方法重復性以及標準曲線擬合等因素。

3 不確定度分量的評定

3.1 制備標準工作溶液引入的不確定度

3.1.1 亞硝酸鈉純度引入的不確定度

分析純亞硝酸鈉的純度在99.5%～100.5%，按矩形分布處理，k=，相對標準不確定度為：

3.1.2 稱量標準物質(zhì)引入的不確定度

配制亞硝酸鹽標準溶液時，稱取亞硝酸鈉0.100 0 g，天平檢定書中給出的質(zhì)量允許誤差為0.001 g，按正態(tài)分布處理，k=3，其相對標準不確定度為：

因此，在制備標準工作溶液過程中由標準物質(zhì)純度、稱量產(chǎn)生的合成相對標準不確定度為：

3.2 稱量樣品引入的不確定度

樣品稱重約為5 g，天平檢定書中給出的質(zhì)量允許誤差為0.005 g，按矩形分布處理，k=3，相對標準不確定度為：

3.3 溶液定容引入的不確定度

3.3.1 500 mL容量瓶引入的不確定度

根據(jù)計量檢定證書，500 mL容量瓶的允許誤差為±0.25 mL，按三角分布處理，k=，則引入的標準不確定度為：

由于水在20 ℃的膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃，若溫度變化范圍為±4℃，按矩形分布處理，k=，則引入的標準不確定度為：

由于量具校準與溫度效應相互獨立，將兩個分量合成，故500 mL容量瓶產(chǎn)生的合成相對標準不確定度為：

3.3.2 20 mL移液管引入的不確定度

用于測定的樣液體積為40 mL，需要使用20 mL移液管移取兩次，且20 mL移液管（A級）的允許誤差為±0.03 mL，按三角分布處理，k=，則其引入的標準不確定度為：

同理溫度效應，故由40 mL溶液引入的標準不確定度為：

因此由20 mL移液管產(chǎn)生的合成相對標準不確定度為：

3.3.3 50 mL比色管引入的不確定度

50 mL比色管容量允許誤差為±0.5 mL，按三角分布處理，k=，則其引入的標準不確定度為：

同理溫度效應，故由50 mL溶液引入的標準不確定度為：

因此由50 mL比色管引入的合成相對標準不確定度為：

故由定容體積引入的合成相對標準不確定度為：

3.4 檢測方法重復性引入的不確定度

在重復性條件下，獨立測試樣品6次，結果分別為3.9、3.9、3.8、3.8、3.9、3.9 mg/kg，其算術平均值為3.9 mg/kg。以極差法求得其不確定度為：

故由定容體積引入的相對標準不確定度為：

3.5 標準曲線擬合引入的不確定度

本次測試采用9個標準系列，測其在波長為538 nm時的吸光度見表1，并得到其回歸方程為y=0.028 86x。

表1 亞硝酸鈉標準系列及其對應的吸光度

其中：斜率為B=0.028 86，截距為A=0，相關系數(shù)r=0.999 08。

2次測定樣液中亞硝酸鹽含量分別為12.2、12.4 μg/mL，算數(shù)平均值為12.3 μg/mL。測定樣液質(zhì)量濃度C的標準不確定度由下式計算：

其中

式中：N——對試樣的測量次數(shù)，N=2；

n——校準曲線的濃度點數(shù)，n=12；

——校準溶液質(zhì)量濃度的平均值，μg；

Ci——由標準曲線測得的樣品的質(zhì)量濃度值。

Ci=12.3 μg/mL，則：U(C)=0.466 μg/mL，則由標準曲線擬合引入得相對標準不確定度為：

3.6 合成相對標準不確定度

在整個實驗過程中，測定結果的不確定度主要是由標準工作液制備，試樣質(zhì)量、定容體積、方法重復性以及標準曲線擬合共同組成。則合成相對標準不確定度為：

3.7 擴展不確定度

U(x)=3.9 mg/kg×0.039 7=0.15 mg/kg，取置信概率P=95%，包含因子k=2，則擴展不確定度為：U=kU(x)=2×0.15 mg/kg=0.30 mg/kg。

4 結論

通過測定計算，該醬鹵肉制品中亞硝酸鹽含量為3.9 mg/kg，擴展不確定度為0.30 mg/kg，結果表示為（3.9±0.30）mg/kg，置信概率P=95%，包含因子k=2。

[1]中國合格評定國家認可委員會.化學分析中不確定度的評估指南[M].北京：中國計量出版社，2006.

[2]中國合格評定國家認可委員會.測量不確定度評估和報告通用要求[M].北京：中國計量出版社，2007.

[3]國家質(zhì)量技術監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB/T 5009.33—2008 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定方法[S].北京:中國標準出版社,2008.

[4]國家質(zhì)量技術監(jiān)督總局.JJF 1059—1999 測量不確定度評定與表示[S].北京:中國計量出版社,1999.