劉玲玲 余 萍 云亞歌 王 青

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院眼科，青海 西寧 810001)

眼瞼基底細(xì)胞癌中窖蛋白- 1和血管生成的關(guān)系

劉玲玲 余 萍 云亞歌 王 青

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院眼科，青海 西寧 810001)

目的 檢測(cè)眼瞼基底細(xì)胞癌中窖蛋白(Caveolin)- 1、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和白細(xì)胞分化抗原(CD)31的表達(dá)，關(guān)注Caveolin- 1與血管生成的關(guān)系。方法 58例確診為眼瞼基底細(xì)胞癌并行手術(shù)的患者作為觀察組，常規(guī)留取術(shù)后的石蠟包埋組織，選擇皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤術(shù)后石蠟包埋組織17例作為對(duì)照組，應(yīng)用免疫組化二步法檢測(cè)兩組中Caveolin- 1、VEGF和CD31的表達(dá)。結(jié)果 Caveolin- 1、VEGF的陽性率、CD31標(biāo)記的微血管密度(MVD)在兩組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。觀察組中Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值與腫瘤最大徑密切相關(guān)，Caveolin- 1與Ki67指數(shù)密切相關(guān)，Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值均與性別、年齡無相關(guān)性。線性相關(guān)分析顯示觀察組中Caveolin- 1和VEGF、Caveolin- 1和MVD呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 眼瞼基底細(xì)胞癌中Caveolin- 1低表達(dá)是促進(jìn)腫瘤形成的重要因素，Caveolin- 1與腫瘤間質(zhì)的血管生成有明顯相關(guān)性。

眼瞼；基底細(xì)胞癌；窖蛋白(Caveolin)- 1；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)；血管密度

基底細(xì)胞癌在老年人多見，易好發(fā)于曝光部位，其生物學(xué)行為較為特殊，主要表現(xiàn)為生長緩慢及較低的轉(zhuǎn)移率。眼瞼是最常見的好發(fā)部位，病變形成和進(jìn)展中可以出現(xiàn)侵襲性生長，進(jìn)而破壞局部組織和器官〔1，2〕。本病也是富于血管的腫瘤，腫瘤生長過程中伴有明顯的血管生成〔3〕。窖蛋白(Caveolin)- 1是胞膜窖在細(xì)胞膜表面特異性內(nèi)陷微區(qū)的標(biāo)記性蛋白，對(duì)腫瘤形成和血管生成可能有重要作用〔4〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是被大家公認(rèn)的血管生成促進(jìn)因子，可以調(diào)節(jié)腫瘤間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的新生和血管的形成，其高表達(dá)時(shí)可以為腫瘤提供必要的營養(yǎng)和氧〔5〕。本文針對(duì)眼瞼基底細(xì)胞癌患者術(shù)后組織中Caveolin- 1、VEGF和白細(xì)胞分化抗原(CD)31蛋白的表達(dá)進(jìn)行研究，分析其臨床意義及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2014年1月至2016年7月青海大學(xué)附屬醫(yī)院診斷為眼瞼基底細(xì)胞癌并行手術(shù)治療的患者作為觀察組，共58例，其中男31例，女27例，年齡46～88歲，平均68.6歲。術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)進(jìn)行診斷，符合世界衛(wèi)生組織(WHO)中的標(biāo)準(zhǔn)?；颊呋蚣覍俸炇鹬橥鈺?。皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤術(shù)后石蠟包埋組織17例作為對(duì)照組，其中男9例，女8例，年齡48～79歲，平均62.3歲，兩組一般資料無明顯差異。

1.2 Caveolin- 1、VEGF和CD31的檢測(cè)方法 兩組術(shù)后組織均常規(guī)送病理科，取材、常規(guī)脫水，包埋，切取4 μm切片于膠片上進(jìn)行Caveolin- 1、VEGF和CD31蛋白表達(dá)的檢測(cè)，均應(yīng)用免疫組化二步法，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，嚴(yán)格按說明書上要求的步驟操作，做好質(zhì)量控制，減少人為誤差。

1.3 Caveolin- 1、VEGF和CD31的判定 結(jié)果均應(yīng)用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察，由病理醫(yī)師判讀。Caveolin- 1的陽性部位是細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)，VEGF的陽性部位是細(xì)胞質(zhì)，均以染成棕黃色定為陽性細(xì)胞，選擇上皮細(xì)胞中染色較為明顯的區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)，共選擇5個(gè)高倍視野(400倍)，取平均值，以<10%定為陰性，以≥10%定為陽性。CD31以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜染成棕黃色為陽性細(xì)胞，以連續(xù)的細(xì)胞簇、細(xì)胞叢或分支狀連續(xù)的內(nèi)皮細(xì)胞判定為微血管，共選擇5個(gè)腫瘤間質(zhì)的區(qū)域進(jìn)行微血管密度(MVD)的計(jì)數(shù)(400倍)，取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值比較 兩組Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值差異顯著(P<0.01)。見表1。

表1 兩組Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值比較〔n(%)〕

2.2 觀察組中Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值在不同臨床特征中的比較 觀察組中Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值與腫瘤最大徑密切相關(guān)，Caveolin- 1與Ki67指數(shù)密切相關(guān)，Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值均與性別、年齡無明顯相關(guān)性。見表2。

2.3 觀察組中Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值相關(guān)性 觀察組中Caveolin- 1和VEGF(r=-0.46，P=0.043)、Caveolin- 1和MVD(r=-0.44，P=0.046)呈負(fù)相關(guān)。

表2 觀察組中Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值在不同臨床特征中的比較〔n(%)〕

3 討 論

Caveolin- 1基因定位于染色體7q31.1上，也是FRA7G脆性位點(diǎn)，這個(gè)位點(diǎn)常在機(jī)體惡性病變時(shí)缺失，因此該區(qū)域被認(rèn)為是腫瘤抑制基因的遺傳標(biāo)志〔6，7〕。Caveolin- 1也被認(rèn)為是一個(gè)候選抑癌基因，其表達(dá)的蛋白為21～24 kD的膜整合蛋白，其胞膜窖這一細(xì)胞膜表面富含膽固醇和鞘脂的特異性內(nèi)陷區(qū)域，在膜內(nèi)易形成二聚體，也可以與Caveolin- 2形成異寡聚體〔8〕。Caveolin- 1對(duì)血管新生有雙向調(diào)控作用〔9〕。研究認(rèn)為VEGF及其下游作用分子一氧化氮(NO)是血管生成的強(qiáng)效促進(jìn)物質(zhì)，而內(nèi)皮型NO合酶及VEGF受體存在于內(nèi)皮細(xì)胞的小凹陷中，這個(gè)區(qū)域具有活化Caveolin- 1的作用，如果Caveolin- 1表達(dá)過高和過低，NO合酶和NO的產(chǎn)生均受到明顯的影響〔10〕。也有學(xué)者對(duì)Caveolin- 1的結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)，Caveolin- 1對(duì)腫瘤形成有負(fù)調(diào)控作用，其機(jī)制是通過支架作用域CSD區(qū)實(shí)現(xiàn)的，此區(qū)域較容易與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子相互作用，并形成其生物學(xué)功能〔11〕。腫瘤在生長過程中能分泌多種促血管生成因子，其中VEGF的分泌是促進(jìn)腫瘤血管形成的重要物質(zhì)，VEGF在作用過程中通過與位于血管內(nèi)皮細(xì)胞或某些腫瘤細(xì)胞表面高親和力的受體特異性結(jié)合而發(fā)揮作用〔12，13〕。其分泌的機(jī)制主要是自分泌〔14〕。CD31被認(rèn)為是血管新生的重要標(biāo)志物，尤其是腫瘤間質(zhì)的血管生成，其效果明顯優(yōu)于CD34和Fli- 1等血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物〔15〕。

本實(shí)驗(yàn)提示Caveolin- 1低表達(dá)、VEGF高表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)腫瘤的生成，因此在眼瞼基底細(xì)胞癌中Caveolin- 1發(fā)揮的是抑癌基因的作用，VEGF發(fā)揮的是癌基因的作用。提示Caveolin- 1和VEGF異常表達(dá)是促進(jìn)腫瘤生長的促進(jìn)蛋白因子，此時(shí)腫瘤生長加快，腫瘤體積增大。提示Caveolin- 1低表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，因此Caveolin- 1高表達(dá)時(shí)可以在一定程度上抑制腫瘤細(xì)胞的增殖過程，當(dāng)其失活后腫瘤失控性增生明顯，細(xì)胞異型性增大，細(xì)胞生長活躍。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果未發(fā)現(xiàn)VEGF與Ki67標(biāo)記的增殖指數(shù)的關(guān)系，但有學(xué)者發(fā)現(xiàn)VEGF與細(xì)胞增殖有關(guān)〔3〕，這種差異可能與基底細(xì)胞癌的低增殖特征有關(guān)，也可能與本組病例較少有關(guān)，后續(xù)研究可以擴(kuò)大樣本關(guān)注VEGF對(duì)基底細(xì)胞癌增殖的相關(guān)問題。本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)Caveolin- 1、 VEGF陽性率和MVD值與性別、年齡的相關(guān)性，因此一般臨床特征的差異不是影響蛋白表達(dá)的特異性因素。本文相關(guān)分析說明基底細(xì)胞癌中Caveolin- 1是抑制腫瘤血管生成的因子。正常上皮和良性腫瘤中Caveolin- 1高表達(dá)，不僅對(duì)腫瘤生成具有一定的抑制作用，也對(duì)間質(zhì)的血管生成有較好的控制作用，此時(shí)腫瘤增生、轉(zhuǎn)移的開關(guān)未被激活，細(xì)胞呈現(xiàn)正常的狀態(tài)，其表達(dá)丟失后引發(fā)腫瘤生長的相關(guān)蛋白的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤生長〔16〕。但是關(guān)于Caveolin- 1在腫瘤中表達(dá)下調(diào)或丟失后啟動(dòng)的對(duì)腫瘤生長的促進(jìn)作用，可能還涉及細(xì)胞凋亡、周期調(diào)控及應(yīng)激反應(yīng)等生物學(xué)機(jī)制〔17〕。

1 孫紅兵，樊秀婷，龔莉華.眼瞼基底細(xì)胞癌患者術(shù)后組織SOX18、整合素αvβ3表達(dá)與血管生成的關(guān)系〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2014；34(14)：3885- 7.

2 云亞歌.老年眼瞼基底細(xì)胞癌患者癌組織中空泡膜蛋白1、磷酸酶及張力蛋白同源蛋白和抗轉(zhuǎn)移蛋白23的表達(dá)及意義〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2014；34(14)：3865- 7.

3 樊秀婷.弗林蛋白酶、轉(zhuǎn)移抑制基因23和血管內(nèi)皮生長因子在老年眼瞼基底細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2014；34(10)：2665- 7.

4 Routray S.Caveolin- 1 in oral squamous cell carcinoma microenvironment：an overview〔J〕.Tumour Biol，2014；35(10)：9487- 95.

5 Liu XL，Liu LD，Zhang SG，etal.Correlation between expression and significance of δ- catenin，CD31，and VEGF of non- small cell lung cancer.〔J〕.Genet Mol Res，2015；14(4)：13496- 503.

6 魏曙光，竇中嶺，孫國賢，等.Caveolin- 1和HDAC1蛋白在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義〔J〕.現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志，2013；5(1)：32- 6.

8 Popovska SL，Ivanov IN，Ooi A.Caveolin- 1 in tumour cells is predominately expressed in the basal subtype of triple- negative breast carcinoma〔J〕.J Biomed Clin Res，2015；7(1)：1213- 20.

9 Jung AC，Ray AM，Ramolu L，etal.Caveolin- 1- negative head and neck squamous cell carcinoma primary tumors display increased epithelial to mesenchymal transition and prometastatic properties〔J〕.Oncotarget，2015；6(39)：41884- 901.

10 Savage K，Lambros MB，Robertson D，etal.Caveolin 1 is overexpressed and amplified in a subset of basal- like and metaplastic breast carcinomas：a morphologic，ultrastructural，immunohistochemical，and in situ hybridization analysis〔J〕.Clin Cancer Res，2007；13(1)：90- 101.

11 Yong G，Yun Z，Pan J，etal.Treadmill exercise promotes angiogenesis in the ischemic penumbra of rat brains through caveolin- 1/VEGF signaling pathways〔J〕.Brain Res，2014；158(5)：83- 90.

12 Aoki M，Pawankar R，Niimi Y，etal.Mast cells in basal cell carcinoma express VEGF，IL- 8 and RANTES〔J〕.Int Arch Allergy Immunol，2003；130(3)：216- 23.

13 Liang J，Zhang Z，Liang L，etal.HIF- 1α regulated tongue squamous cell carcinoma cell growth via regulating VEGF expression in a xenograft model〔J〕.Ann Transl Med，2014；2(9)：92- 4.

14 Arihiro K，Kaneko M，F(xiàn)ujii S，etal.Loss of CD9 with expression of CD31 and VEGF in breast carcinoma，as predictive factors of lymph node metastasis〔J〕.Breast Cancer，1998；5(2)：131- 8.

15 Rajesh L，Joshi K，Bhalla V，etal.Correlation between VEGF expression and angiogenesis in breast carcinoma〔J〕.Analy Quantit Cytol Histol，2004；26(2)：105- 8.

16 馮小敏，劉美霞，項(xiàng)炳武，等.Caveolin- 1對(duì)OGD/R人臍帶血內(nèi)皮祖細(xì)胞中VEGF表達(dá)的影響〔J〕.中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2015；12(6)：859- 64.

17 Labrecque L，Royal I,David SS，etal.Regulation of vascular endothelial growth factor receptor- 2 activity by caveolin- 1 and plasma membrane cholesterol〔J〕.Molec Biol Cell，2003；14(1)：334- 47.

〔2017- 05- 22修回〕

(編輯 苑云杰)

王 青(1958- )，女，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要從事眼科研究。

劉玲玲(1980- )，女，主管護(hù)師，主要從事眼科臨床疾病研究。

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A

1005- 9202(2017)15- 3843- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.091