熊佳俊，陳鏡樓，宋紅萍（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，武漢 430065；.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430033）

漸尖毛蕨二氫黃酮苷對糖尿病腎病大鼠腎上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響Δ

熊佳俊1＊，陳鏡樓2#，宋紅萍2（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，武漢 430065；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430033）

目的：考察漸尖毛蕨二氫黃酮苷（CAF）對糖尿病腎病（DKD）大鼠腎上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的影響。方法：將大鼠隨機(jī)分為正常組（生理鹽水）、模型組（生理鹽水）、陽性組[羅格列酮，0.4 mg/（kg·d）]和CAF高、低劑量組[12.5、25 mg/（kg·d）]，每組10只。除正常組的其余大鼠均采用ip鏈脲霉素（60 mg/kg）+高脂飲食誘導(dǎo)DKD的發(fā)生，并于實(shí)驗(yàn)第13～16周同時(shí)ig相應(yīng)藥物。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，檢測大鼠空腹血糖值和血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量，觀察腎組織膠原沉積及基底膜增厚情況，免疫組化法檢測腎組織中α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、纖維連接蛋白（fibronectin）和上皮細(xì)胞鈣黏蛋白（E-cadherin）表達(dá)，Western blot法檢測腎組織中糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）和β-鏈蛋白（β-catenin）的表達(dá)。結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量均顯著升高（P＜0.01）；腎組織有明顯膠原沉積、基底膜增厚；腎組織中α-SMA、fibronectin、β-catenin表達(dá)水平和GSK-3β磷酸化程度均顯著升高（P＜0.01），E-cadherin表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；腎組織膠原沉積和基底膜增厚情況顯著改善；腎組織中α-SMA、fibronectin、β-catenin表達(dá)水平和GSK-3β磷酸化程度均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），陽性組和CAF高劑量組大鼠腎組織中E-cadherin表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。結(jié)論：CAF能抑制DKD大鼠的腎EMT，其作用的分子機(jī)制可能與下調(diào)腎組織中β-catenin表達(dá)和抑制GSK-3β磷酸化失活有關(guān)。

漸尖毛蕨；二氫黃酮苷；糖尿病腎?。簧掀?間質(zhì)轉(zhuǎn)化；上皮細(xì)胞鈣黏蛋白；糖原合成酶激酶3β；大鼠

糖尿病是嚴(yán)重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題，而糖尿病腎?。―iabetic kidney disease，DKD）是糖尿病患者的主要致死原因之一[1-2]。DKD已經(jīng)成為西方首位和我國第2位的終末期腎病原因[3]。DKD以基底膜增厚、系膜區(qū)擴(kuò)張、細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）重塑和沉積等為主要病理特征，本質(zhì)上是腎纖維化的過程[4-5]。而上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）是DKD過程中導(dǎo)致腎纖維化的重要機(jī)制[6]。其中上皮標(biāo)記物上皮細(xì)胞鈣黏蛋白（E-cadherin）以及間質(zhì)標(biāo)記物α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和纖維連接蛋白

（fibronectin）的表達(dá)程度是評價(jià)EMT水平的重要指標(biāo)。漸尖毛蕨[Cyslosorus acuminatus（Houtt.）Nakai]是金星蕨科毛蕨屬植物，富含多種新穎的二氫黃酮類化合物。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)漸尖毛蕨總黃酮能調(diào)控3T3-L1

前脂肪細(xì)胞的增殖、分化并抑制胰島素抵抗[7]、降低糖尿病模型小鼠的血糖含量并減輕腎損傷程度[8]，隨后預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示漸尖毛蕨二氫黃酮苷（Cyclosorus acuminatus flavanone glycoside，CAF）很可能為漸尖毛蕨生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。在本研究中筆者擬探討CAF對DKD大鼠腎EMT的影響和可能的作用機(jī)制，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 材料

1.1 儀器

DMi8顯微鏡（德國Leica公司）；JS-1075熒光化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)（上海培清科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

羅格列酮片（成都恒瑞制藥有限公司，批號：150101，規(guī)格：4 mg/片）；血糖（批號：20151016）、血肌酐（Scr，批號：20151016）、尿素氮（BUN，批號：20151014）含量測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）；鏈脲霉素（美國Sigma-Aldrich公司）；兔源糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）多克隆一抗和酶標(biāo)山羊抗兔二抗（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）；兔源β-鏈蛋白（β-catenin）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）多克隆一抗（美國CST公司）；其余試劑均為分析純。

1.3 藥材與CAF

漸尖毛蕨藥材采收于江西省九江市，由九江市林業(yè)科學(xué)研究所高級工程師譚策銘教授鑒定為金星蕨科毛蕨屬漸尖毛蕨[Cyclosorus acuminatus（Houtt）Nakai]，標(biāo)本（No.JX0507）保存于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院；CAF按照前期研究的方法制備和檢測[8]，經(jīng)高效液相色譜法測定其純度＞98%，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 CAF的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig 1 Chemical structure of CAF

1.4 動物

Wistar大鼠50只，♂，6周齡，體質(zhì)量（200±20）g，購于湖北省疾病預(yù)防控制中心，合格證號：SCXK（鄂）2015-0018。大鼠于溫度為（22±3）℃、濕度為（50±10）%、晝夜節(jié)律為12 h光照∶12 h黑暗的環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲食。

2 方法

2.1 造模、分組與給藥

大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后隨機(jī)分為5組，分別為正常組、模型組、陽性組和CAF高、低劑量組。除正常組外的其余大鼠飼予高脂飲食（即普通飼料470 g/kg、蔗糖100 g/kg、蛋黃200 g/kg、豬油200 g/kg、膽固醇20 g/kg和脫氧膽酸鈉10 g/kg），并在第4周末一次性ip 60 mg/kg的鏈脲霉素[9]。注射72 h后檢測空腹血糖值，將血糖值大于16.7 mmol/L者納入實(shí)驗(yàn)[2]，繼續(xù)給予高脂飲食至實(shí)驗(yàn)第13周。從第13周開始，CAF高、低劑量組大鼠在給予高脂飲食的同時(shí)分別ig 25、12.5 mg/（kg·d）的CAF水溶液（該給藥劑量是基于筆者前期研究發(fā)現(xiàn)300 mg/kg的漸尖毛蕨總黃酮具有改善糖尿病小鼠腎損傷的潛力[8]，自總黃酮中分離得到CAF產(chǎn)率為5.36%，計(jì)算出小鼠ig劑量為16.08 mg/kg，同時(shí)根據(jù)體表面積換算得到大鼠ig劑量為12.5 mg/kg），至第16周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束；陽性組大鼠ig 0.4 mg/（kg·d）羅格列酮（參照說明書中人用劑量，根據(jù)體表面積換算得到大鼠的等效劑量），至第16周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束；正常組和模型組大鼠ig等體積的生理鹽水，至第16周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

2.2 空腹血糖值和生化指標(biāo)檢測

16周實(shí)驗(yàn)周期結(jié)束后收集大鼠血樣，用于檢測空腹血糖值和Scr、BUN含量，具體操作按照相應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行。

2.3 腎膠原沉積和基底膜增厚情況檢測

將大鼠處死后分離腎組織。其中一部份進(jìn)行4%多聚甲醛固定、石蠟包埋和組織切片后，用于Masson染色和天狼星紅染色觀察組織膠原沉積情況，以及過碘酸雪夫氏染色（PAS染色）觀察腎基底膜增厚情況。

2.4 腎組織中α-SMA、fibronectin和E-cadherin表達(dá)

采用免疫組化法。脫蠟切片于2%雙氧水中浸泡10 min，然后用5%山羊血清封閉10 min；隨后用相應(yīng)一抗于37℃溫育1 h，以磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗后用酶標(biāo)山羊抗兔二抗于37℃溫育10 min；用二氨基聯(lián)苯胺浸泡3 min后，蘇木精染色，乙醇脫水。通過平行操作但不加一抗孵育切片作為陰性對照，并以此判斷陽性表達(dá)。各切片樣本于400倍光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照，然后通過Image J軟件進(jìn)行半定量分析積分光密度（IOD）值。

2.5 腎組織中p-GSK-3β、GSK-3β和β-catenin表達(dá)

采用Western blot法。取另一部份腎組織，液氮研磨后抽提總蛋白，檢測蛋白濃度；按照待測樣本-上樣緩沖液（4∶1，V/V）混勻后在100℃加熱3 min使蛋白質(zhì)變性；取樣20 μL進(jìn)行10%聚丙烯酰胺凝膠電泳；轉(zhuǎn)膜，置于5%脫脂奶粉溶液中37℃封閉1 h，分別加入p-GSK-3β、GSK-3β和β-catenin一抗（1∶1 000），4℃孵育過夜；清洗后加入酶標(biāo)山羊抗兔二抗，室溫下孵育1 h，化學(xué)發(fā)光并以凝膠成像系統(tǒng)成像。通過Bio-Rad Quantity One軟件測定條帶光密度值，以目的蛋白條帶光密度值與內(nèi)參βactin條帶光密度值的比值計(jì)算目的蛋白的相對表達(dá)量，以p-GSK-3β/GSK-3β比值表示GSK-3β的磷酸化程度。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量測定結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性組和CAF高、低劑量組大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量檢測結(jié)果（±s，n＝8）Tab 1 Detection results of fasting glucose level and BUN，Scr contents of rats in each group（±s，n＝8）

表1 各組大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量檢測結(jié)果（±s，n＝8）Tab 1 Detection results of fasting glucose level and BUN，Scr contents of rats in each group（±s，n＝8）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別正常組模型組陽性組CAF高劑量組CAF低劑量組BUN,mmol/L 5.49±0.97 13.74±2.01＊＊9.32±1.07##9.85±0.80##11.46±1.10#劑量,mg/kg 0.4 25 12.5空腹血糖值,mmol/L 5.28±0.80 22.99±3.19＊＊11.14±0.95##14.13±1.29##17.78±1.21##Scr,μmol/L 26.43±3.44 66.96±5.59＊＊45.45±4.87##49.52±4.26##54.13±4.46##

3.2 大鼠腎膠原沉積和基底膜增厚情況觀察結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠腎膠原明顯沉積、基底膜顯著增厚；給藥后，各給藥組大鼠腎組織膠原沉積和腎小球基底膜增厚狀況明顯改善，結(jié)果見圖2。

3.3 大鼠腎組織中α-SMA、fibronectin和E-cadherin表達(dá)測定結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠腎組織中α-SMA、fibronectin表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01），E-cadherin表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01），提示DKD大鼠腎組織EMT處于活躍狀態(tài)。與模型組比較，除CAF低劑量組大鼠腎組織中E-cadherin表達(dá)水平升高不顯著外，其余各給藥組大鼠上述指標(biāo)均顯著改善（P＜0.01），提示CAF能抑制DKD大鼠腎的EMT。免疫組化結(jié)果見圖3，測定結(jié)果見表2。

3.4 大鼠腎組織中GSK-3β磷酸化程度和β-catenin表達(dá)的測定結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠腎組織中GSK-3β磷酸化程度及β-catenin表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠腎組織中GSK-3β磷酸化程度及β-catenin表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。蛋白質(zhì)印跡電泳圖見圖4，測定結(jié)果見表3。

4 討論

DKD是糖尿病患者最常見的微血管并發(fā)癥之一，可呈進(jìn)行性發(fā)展，最終將誘導(dǎo)腎小球硬化和間質(zhì)纖維化[4-5]。羅格列酮是臨床治療DKD的常見藥物，但是由于存在療效不穩(wěn)定和肝毒性問題，羅格列酮并不能真正逆轉(zhuǎn)DKD[10]。腎纖維化以ECM過度合成、重塑和沉積為特征，其核心環(huán)節(jié)涉及EMT過程，將造成腎上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞和功能的喪失[11]。一方面，現(xiàn)已知高度分化和結(jié)構(gòu)完整的腎小球上皮細(xì)胞是維持腎小球?yàn)V過屏障正常功能的核心關(guān)鍵，也是控制DKD的重要因素[12]。另一方面，大量成纖維細(xì)胞通過EMT過程形成于腎小管，分泌ECM，促發(fā)DKD后期腎臟纖維化的形成[6]。由此可見，干預(yù)EMT過程是調(diào)控DKD腎纖維化的重要手段。

圖2 各組大鼠腎組織切片Masson、天狼星紅和PAS染色圖（×400）Fig 2 Masson，sirius red and PAS staining of kidney tissue sections of rats in each group（×400）

圖3 各組大鼠腎組織中α-SMA、fibronectin和E-cadherin表達(dá)的免疫組化圖（×400）Fig 3 Immunohistochemistry plot for α-SMA，fibronectin and E-cadherin in kidney tissue of rats in each group（× 400）

表2 各組大鼠腎組織中α-SMA、fibronectin和E-cadherin表達(dá)測定結(jié)果（±s，n＝6）Tab 2 Determination results of α-SMA，fibronectin phosphorylation degree and β-catenin expression in kidney tissue of rats in each group（±s，n＝6）

表2 各組大鼠腎組織中α-SMA、fibronectin和E-cadherin表達(dá)測定結(jié)果（±s，n＝6）Tab 2 Determination results of α-SMA，fibronectin phosphorylation degree and β-catenin expression in kidney tissue of rats in each group（±s，n＝6）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，##P＜0.01

組別正常組模型組陽性組CAF高劑量組CAF低劑量組E-cadherin 1.00±0.07 0.79±0.06＊＊0.97±0.08##0.91±0.07##0.86±0.08劑量，mg/kg 0.4 25 12.5 α-SMA 1.00±0.13 1.48±0.12＊＊1.09±0.11##1.12±0.11##1.28±0.13##fibronectin 1.00±0.08 1.33±0.11＊＊1.02±0.10##1.09±0.10##1.15±0.13##

圖4 各組大鼠腎組織中p-GSK-3β、GSK-3β和β-catenin表達(dá)的電泳圖Fig 4 Electrophoresis of p-GSK-3β，GSK-3β and βcatenin protein expression in kidney tissue of rats in each group

EMT程序通常由鋅指結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子、堿性螺旋-環(huán)-螺旋因子和淋巴細(xì)胞增強(qiáng)因子等細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子直接激活，以上皮標(biāo)記物E-cadherin等表達(dá)缺失和間質(zhì)標(biāo)記物α-SMA和fibronectin等過表達(dá)為特征[13]。外界刺激通過多種細(xì)胞信號通路的傳導(dǎo)到達(dá)核內(nèi)并啟動相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子，從而完成外界刺激激活EMT的過程。其中Wnt/β-catenin等信號通路是參與EMT調(diào)控的主流信號通路之一，其在慢性腎疾病中的功能也得到越來越多的關(guān)注[14]。Wnt/β-catenin通路在沒有刺激信號時(shí)，β-catenin蛋白通過與GSK-3β和軸抑制蛋白（Axin）結(jié)合形成復(fù)合物而處于沉默狀態(tài)；當(dāng)Wnt配體與其膜受體Frizzled結(jié)合后激活通路，促進(jìn)復(fù)合物解離失活，使β-catenin蛋白大量游離于細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)而導(dǎo)致位移進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)的β-catenin蛋白大幅增多，從而與EMT轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，促進(jìn)EMT[12，14]。

表3 各組大鼠腎組織中GSK-3β磷酸化程度及β-catenin表達(dá)測定結(jié)果（±s，n＝6）Tab 3 Determination results of GSK-3β phosphorylation degree and β-catenin expression in kidney tissue of rats in each group（±s，n＝6）

表3 各組大鼠腎組織中GSK-3β磷酸化程度及β-catenin表達(dá)測定結(jié)果（±s，n＝6）Tab 3 Determination results of GSK-3β phosphorylation degree and β-catenin expression in kidney tissue of rats in each group（±s，n＝6）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別正常組模型組陽性組CAF高劑量組CAF低劑量組β-catenin/β-actin 1.00±0.19 2.37±0.27＊＊1.77±0.21##1.68±0.15##1.95±0.19#劑量,mg/kg 0.4 25 12.5 p-GSK-3β/GSK-3β 1.00±0.11 2.83±0.33＊＊1.21±0.19##1.36±0.14##2.15±0.22##

二氫黃酮是黃酮類化合物的一員，流行病學(xué)研究證實(shí)其具有改善高血壓、調(diào)節(jié)血脂紊亂、減輕胰島素抵抗、抑制體內(nèi)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等生理功能[15]。蕨類植物作為過渡植物，具有種類豐富的黃酮類次生代謝產(chǎn)物，且含量高、易于分離純化，其中二氫黃酮主要分布于金星蕨科等植物中[16]。漸尖毛蕨是金星蕨科毛蕨屬植物，在江浙等地區(qū)用于治療熱淋、小兒疳積、消化不良、咽喉腫痛和風(fēng)濕痹痛等有悠久歷史[6]。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)漸尖毛蕨總黃酮部位具有減輕胰島素抵抗和改善長期高血糖誘導(dǎo)的小鼠腎損傷的功能，而CAF成分很可能為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)，CAF能有效改善DKD模型大鼠的腎膠原沉積和基底膜增厚，且具有抑制腎EMT過程的作用。其可能的分子機(jī)制與降低腎組織中β-catenin表達(dá)和抑制GSK-3β磷酸化失活有關(guān)。

本研究為傳統(tǒng)民間藥物漸尖毛蕨在DKD中的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)，更深入的藥理作用機(jī)制和完善的CAF劑量-時(shí)間-藥效學(xué)關(guān)系研究將在本課題組下一步的工作中繼續(xù)完善。

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Effect of Cyslosorus acuminatus Flavonone Glycoside on Kidney Epithelial-mesenchymal Transition in Rats with Diabetic Kidney Disease

XIONG Jiajun1，CHEN Jinglou2，SONG Hongping2（1.College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China；2.Dept.of Pharmacy，Pu’ai Hospital Affiliated to Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430033，China）

OBJECTIVE：To investigate the effect of Cyslosorus acuminatus flavonone glycoside（CAF）on kidney epithelial-mesenchymal transition（EMT）in rats with diabetic kidney disease（DKD）.METHODS：Rats were randomly divided into nor-mal group（normal saline），model group（normal saline），positive group[rosiglitazone，0.4 mg/（kg·d）]，CAF high-dose and lowdose groups[12.5，25 mg/（kg·d）]，10 in each group.Except for normal group，other groups were intraperitoneally injected streptozotocin（60 mg/kg）+high fat diet to induce DKD，and intragastrically administrated related medicines in 13-16 weeks.After the experimental period，fasting blood glucose level and serum creatinine（Scr），blood urea nitrogen（BUN）contents of rats were detected，collagen deposition and basement membrane thickening in kidney tissue were observed.Immunohistochemistry was used to detect α-smooth muscle actin（α-SMA），fibronectin，epithelial cadherin（E-cadherin）expressions in kidney tissue，and Western blot was used to determine the glycogen synthase kinase 3β（GSK-3β），phosphorylated GSK-3β（p-GSK-3β），β-catenin expressions in kidney tissue.RESULTS：Compared with normal group，fasting blood glucose level，Scr and BUN contents in model group were significantly increased（P＜0.01）；kidney tissue showed obvious collagen deposition and basement membrane thickening；the α-SMA，fibronectin，β-catenin expression levels and GSK-3β phosphorylation degree in kidney tissue were significantly increased（P＜0.01），while E-cadherin expression levels was significantly decreased（P＜0.01）.Compared with model group，fasting blood glucose level，Scr and BUN contents in each administration group were significantly reduced（P＜0.05 or P＜0.01）；collagen deposition and basement membrane thickening in kidney tissue were significantly improved；the α-SMA，fibronectin，and β-catenin expression levels and GSK-3β phosphorylation degree in kidney tissue were significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01），while E-cadherin expression levels in positive group and CAF high-dose group were significantly increased（P＜0.01）.CONCLUSIONS：CAF can inhibit the kidney EMT of rats with DKD，the molecular mechanism may be associated with downregulating β-catenin expression and inhibiting GSK-3β phosphorylation inactivation.

Cyslosorus acuminatus；Flavonone glycoside；Diabetic kidney disease；Epithelial-mesenchymal transition；Epithelial cadherin；Glycogen synthase kinase 3β；Rats

R285

A

1001-0408（2017）22-3052-05

2017-01-16

2017-04-11）

（編輯：林 靜）

湖北省衛(wèi)生計(jì)生科研基金（No.WJ2017M189）；武漢市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目（No.2015071704011629）

＊碩士研究生。研究方向：藥物新劑型、生物藥劑學(xué)。電話：027-68831991。E-mail：shanghuchuan@126.com

#通信作者：主管藥師，博士。研究方向：泌尿生殖系統(tǒng)藥學(xué)研究。電話：027-68831991。E-mail：jinglouchen@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.22.08