趙 康 趙詹東 劉黎明 張建軍

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065)

軟肝消臌湯治療肝硬化模型大鼠的效果及機(jī)制

趙 康 趙詹東1劉黎明 張建軍2

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065)

目的 通過(guò)研究軟肝消臌湯對(duì)肝硬化大鼠肝功能、肝纖維化及外周血象的影響，探討軟肝消臌湯治療肝硬化大鼠的效果及作用機(jī)制。方法 將75只雌性Wistar大鼠按照隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為5組，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、低劑量組(2.5 g·kg-1·d-1)、中劑量組(5 g·kg-1·d-1)及高劑量組(10 g·kg-1·d-1)，每組15只。模型建立后每天灌胃治療，持續(xù)5 w。治療結(jié)束后，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平，采用γ免疫計(jì)數(shù)儀檢測(cè)血清透明質(zhì)酸(HA)、層黏連蛋白(LN)及Ⅲ型前膠原(PC- Ⅲ)水平，采用血球計(jì)數(shù)儀檢測(cè)外周血白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)及血小板(PTL)水平。結(jié)果 (1)與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組大鼠血清ALT、AST水平明顯偏高(P<0.05)；與模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組比較，高劑量組大鼠血清ALT、AST水平明顯偏低(P<0.05)。(2)與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組大鼠血清HA、LN及PC- Ⅲ水平明顯偏高(P<0.05)；與模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組比較，高劑量組大鼠血清HA、LN及PC- Ⅲ水平明顯偏低(P<0.05)。(3)與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組大鼠外周血WBC、RBC、Hb及PTL水平均明顯偏低(P<0.05)；與模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組比較，高劑量組大鼠外周血WBC、RBC、Hb及PTL水平明顯偏高(P<0.05)。結(jié)論 軟肝消臌湯10 g/kg劑量能降低肝硬化大鼠血清ALT、AST、HA、LN及PC- Ⅲ水平，升高外周血WBC、RBC、Hb及PTL水平，對(duì)肝硬化大鼠有治療作用。

軟肝消臌湯；肝硬化

肝硬化是一種臨床多發(fā)的慢性肝臟疾病，是由多種原因引發(fā)的彌散性肝臟結(jié)節(jié)和凹陷，臨床特征主要為肝硬化腹水〔1～3〕。肝硬化的主要病理學(xué)改變?yōu)楦卫w維化，從而引起指標(biāo)肝臟酶學(xué)水平明顯升高，還能夠?qū)е录?xì)胞外基質(zhì)合成與降解的失衡，引起血象的改變〔4〕。因此，研究肝纖維化指標(biāo)、肝臟酶學(xué)水平及血象的變化對(duì)評(píng)價(jià)肝硬化治療及預(yù)后具有重要的臨床意義。軟肝消臌湯是由黨參、黃芪、丹參、茯苓、當(dāng)歸、赤芍、川芎、豬苓、鱉甲和益母草等多種中藥煎制而成的湯劑，具有軟堅(jiān)化結(jié)、活血散瘀、健脾疏肝之功效〔5,6〕。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察軟肝消臌湯對(duì)肝硬化大鼠肝功能、肝纖維化及外周血象的影響，探討軟肝消臌湯治療肝硬化大鼠的效果及作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥物 Wistar大鼠75只，SPF級(jí)，雌性，體重(169.18±14.73)g。飼養(yǎng)條件：溫度23℃、相對(duì)濕度60%～70%、每日光照12 h。軟肝消臌湯：黨參15 g、黃芪30 g、丹參15 g、茯苓15 g、當(dāng)歸15 g、赤芍15 g、川芎15 g、豬苓15 g、鱉甲30 g、益母草15 g。依照中藥傳統(tǒng)方法煎煮，分裝，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要儀器及試劑 TBA- 120型全自動(dòng)生化分析儀，購(gòu)自日本東芝公司；XT1800I型血球計(jì)數(shù)儀，購(gòu)自日本SYSMEX公司；XT1800型γ免疫計(jì)數(shù)儀，購(gòu)自西安凱普機(jī)電有限公司；DL5M型低溫離心機(jī)，購(gòu)自上海民儀電子有限公司。40.0% CCl4溶液，購(gòu)自廣州和為化工有限公司；戊巴比妥鈉，購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司；大鼠天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測(cè)試劑盒和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自寧波普瑞柏生物技術(shù)有限公司；大鼠透明質(zhì)酸(HA)、層黏連蛋白(LN)及Ⅲ型前膠原(PC- Ⅲ)檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自上?？道噬锟萍加邢薰?。

1.3 肝硬化大鼠模型的建立 依照文獻(xiàn)報(bào)道〔7〕，將Wistar大鼠按3 ml/100 g劑量腹腔注射40.0% CCl4溶液，2次/w，普通飼料喂養(yǎng)，持續(xù)6 w。建模結(jié)束后，處死一只大鼠，若觀察到肝臟表面有彌漫性的結(jié)節(jié)和凹陷區(qū)并伴肝腹水，則判定為肝硬化模型建立成功。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及干預(yù)措施 將75只雌性Wistar大鼠按照隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為5組，每組各15只：(1)空白對(duì)照組：正常Wistar大鼠，未采取任何處理；(2)模型對(duì)照組：建立肝硬化模型，建模后每天灌胃給予2 ml生理鹽水；(3)低劑量組：建立肝硬化模型，建模后每天灌胃給予軟肝消臌湯2.5 g/kg；(4)中劑量組：建立肝硬化模型，建模后每天灌胃給予軟肝消臌湯5 g/kg；(5)高劑量組：建立肝硬化模型，建模后每天灌胃給予軟肝消臌湯10 g/kg。以上各組處理方法均持續(xù)5 w。

1.5 檢測(cè)指標(biāo) 治療結(jié)束后，采集大鼠血液5 ml，1 000 r/min離心15 min，分離血清，檢測(cè)血清ALT、AST、HA、LN及PC- Ⅲ水平。采集大鼠外周血10 ml，檢測(cè)外周血中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)及血小板(PTL)水平。血清ALT、AST水平的檢測(cè)應(yīng)用TBA- 120型全自動(dòng)生化分析儀，使用ALT檢測(cè)試劑盒和AST檢測(cè)試劑盒；血清HA、LN及PC- Ⅲ水平的檢測(cè)應(yīng)用XT1800型γ免疫計(jì)數(shù)儀；外周血中WBC、RBC、Hb及PTL水平的檢測(cè)采用XT1800I型血球計(jì)數(shù)儀。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS19.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 血清ALT、AST水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組大鼠血清ALT、AST水平明顯偏高(P<0.05)；與模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組比較，高劑量組大鼠血清ALT、AST水平明顯偏低(P<0.05)，高劑量組與空白對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組血清ALT、AST水平比較

與空白對(duì)照組比較:1)P<0.05；與高劑量組比較:2)P<0.05；下表同

2.2 肝纖維化指標(biāo)比較 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組大鼠血清HA、LN及PC- Ⅲ水平明顯偏高(P<0.05)；與模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組比較，高劑量組大鼠血清HA、LN及PC- Ⅲ水平明顯偏低(P<0.05)；高劑量組與空白對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組肝纖維化指標(biāo)比較

2.3 外周血WBC、RBC、Hb及PLT水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組大鼠外周血WBC、RBC、Hb及PTL水平均明顯偏低(P<0.05)；與模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量組比較，高劑量組大鼠外周血WBC、RBC、Hb及PTL水平明顯偏高(P<0.05)，高劑量組與空白對(duì)照組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組外周血WBC、RBC、Hb及PTL水平比較

3 討 論

肝硬化是一種臨床特征為肝彌漫性纖維化、再生結(jié)節(jié)及假小葉等的慢性進(jìn)行性肝臟疾病，發(fā)展至腹水階段時(shí)患者已處于肝硬化失代償期，嚴(yán)重威脅著患者的身體健康〔8〕。目前，單純的西醫(yī)治療對(duì)肝硬化的治療效果不甚理想。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肝硬化屬“積聚”、“臌脹”、“癥瘕”范疇，是由于濕熱疫毒、酒蠱蟲(chóng)毒侵蝕，復(fù)以飲食不節(jié)、情志失常，以致氣滯血瘀、水液聚集，故治療應(yīng)以軟堅(jiān)化結(jié)、活血散瘀、健脾疏肝為原則〔9,10〕。軟肝消臌湯是由黨參、黃芪、丹參、茯苓、當(dāng)歸、赤芍、川芎、豬苓、鱉甲和益母草等多味中藥煎制而成的湯劑，其中黨參具有活血行氣、祛風(fēng)止痛之功效，黃芪具有益氣健脾之功效，丹參、當(dāng)歸、赤芍、川芎、鱉甲具有軟堅(jiān)化結(jié)、活血散瘀之功效，茯苓具有益氣活血之功效，豬苓、益母草具有益氣養(yǎng)血、利水消腫之功效，諸藥相互協(xié)同，發(fā)揮軟堅(jiān)化結(jié)、活血散瘀、健脾疏肝的作用〔11〕。另外，藥理學(xué)研究表明，黨參具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖、提高機(jī)體免疫力的作用，黃芪具有減輕肝細(xì)胞壞死、促進(jìn)肝細(xì)胞再生的作用，當(dāng)歸具有改善肝微循環(huán)、抑制肝細(xì)胞壞死、促進(jìn)肝細(xì)胞增殖及緩滯肝纖維化的作用〔12,13〕。

本研究結(jié)果顯示，軟肝消臌湯10 g/kg劑量能明顯降低肝硬化大鼠血清ALT、AST水平。肝臟轉(zhuǎn)氨酶是肝臟受損后最敏感的指標(biāo)，血清ALT水平隨肝細(xì)胞膜損傷的加劇而升高，血清AST水平與肝細(xì)胞線粒體受損程度呈正相關(guān)，兩者的血清水平能直觀反映出肝臟組織的受損程度〔14〕。軟肝消臌湯中的多種中藥成分協(xié)同作用，能夠發(fā)揮軟堅(jiān)化結(jié)、活血散瘀、健脾疏肝的作用，對(duì)肝硬化具有較好的療效，有利于受損肝臟組織的恢復(fù)。軟肝消臌湯10 g/kg劑量能明顯降低肝硬化大鼠血清HA、LN及PC- Ⅲ水平。肝硬化的主要病理學(xué)改變是肝纖維化，從而導(dǎo)致血清肝纖維化指標(biāo)HA、LN及PC- Ⅲ水平異常升高。軟肝消臌湯中當(dāng)歸、黃芪等多種中藥成分具有逆轉(zhuǎn)肝纖維化、促進(jìn)肝細(xì)胞再生的作用，從而有利于肝硬化的治療，使血清HA、LN及PC- Ⅲ水平下降〔15〕。軟肝消臌湯10 g/kg劑量能明顯升高外周血WBC、RBC、Hb及PTL水平，這可能是由于軟肝消臌湯中赤芍、茯苓、豬苓等多種成分具有減輕肝損傷的作用，能改善肝組織的病理學(xué)改變，從而改善血常規(guī)〔16〕。

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〔2016- 08- 31修回〕

(編輯 徐 杰)

張建軍(1964- )，男，博士，主任醫(yī)師，教授，主要從事中西醫(yī)結(jié)合肝病方面的研究。

趙 康(1988- )，女，在讀碩士，主要從事中西醫(yī)結(jié)合肝病方面的研究。

R57

A

1005- 9202(2017)15- 3676- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.015

1 襄陽(yáng)市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科

2 湖北省第三人民醫(yī)院肝病科