吳志成，董晶，李進(jìn)，肖建萍，石孝勇

(1、北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518036；2、深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，廣東深圳518057)

BC-6800血細(xì)胞分析儀精密度和正確度性能驗(yàn)證

吳志成1，董晶1，李進(jìn)2，肖建萍2，石孝勇2

(1、北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518036；2、深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，廣東深圳518057)

目的對深圳邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細(xì)胞分析儀精密度和正確度性能進(jìn)行驗(yàn)證。方法參照新發(fā)布WS/T 492-2016《臨床檢驗(yàn)定量測定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，使用3個(gè)水平的BC-6D質(zhì)控品在BC-6800上進(jìn)行5d 5個(gè)分析批的精密度測試，驗(yàn)證廠家聲明的精密度；挑選20例健康體檢患者標(biāo)本分別在BC-6800上測試后再送至邁瑞標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行參考方法的盲測，對BC-6800的正確度進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果BC-6800上三個(gè)水平質(zhì)控品室內(nèi)精密度均低于廠家宣稱值，且均低于CLIA’88指標(biāo)的1/4；BC-6800與參考方法配對t檢驗(yàn)顯示各參數(shù)結(jié)果均無顯著性差異（P>0.05），且室內(nèi)偏倚值均在預(yù)期偏差零值的99%置信區(qū)間內(nèi)。結(jié)論BC-6800全自動血細(xì)胞分析儀的精密度和正確度性能均通過廠家聲明的驗(yàn)證，符合實(shí)驗(yàn)室高效檢驗(yàn)對精密度和正確度的要求，可用于臨床血液標(biāo)本的檢測。

血細(xì)胞分析儀；精密度；正確度

為保證定量檢測項(xiàng)目的有效性和完整性，確保檢測結(jié)果的質(zhì)量水平，由國家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心及多家大型醫(yī)院聯(lián)合起草、由國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會于2016-07-07發(fā)布了衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 492-2016《臨床檢驗(yàn)定量測定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》，并計(jì)劃于2016-12-15正式實(shí)施[1]?，F(xiàn)本實(shí)驗(yàn)室基于此行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，率先對深圳邁瑞公司生產(chǎn)的BC-6800全自動血液細(xì)胞分析儀進(jìn)行精密度和正確度的性能驗(yàn)證，檢驗(yàn)其是否符合廠家的性能宣稱以及實(shí)驗(yàn)室高效檢驗(yàn)[2]的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑深圳邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細(xì)胞分析儀、其配套試劑及質(zhì)控品及校準(zhǔn)品。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)樣本精密度性能驗(yàn)證使用高中低三個(gè)水平BC-6D質(zhì)控品；正確度性能驗(yàn)證所用20例標(biāo)本來源于本院健康體檢者，其中男女各10例，年齡21～45歲。采集靜脈血2ml，置于含乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）的BD真空采血管中。所有樣本在采血后2h內(nèi)用BC-6800全自動血細(xì)胞分析儀完成血常規(guī)檢測，6h內(nèi)完成WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)參考方法的檢測。

1.2 方法根據(jù)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 492-2016《臨床檢驗(yàn)定量測定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》進(jìn)行操作。評價(jià)參數(shù)包括：白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、紅細(xì)胞平均體積（MCV）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）。

1.2.1 精密度評價(jià)連續(xù)測定5d質(zhì)控品，每天一個(gè)分析批，每批三個(gè)濃度水平，每一個(gè)濃度水平質(zhì)控從冰箱取出后放置15～20min使其恢復(fù)至室溫，然后在BC-6800上重復(fù)測定3次；如果因?yàn)橘|(zhì)量控制程序或操作問題判斷一批為失控，應(yīng)剔除數(shù)據(jù)，并增加執(zhí)行一個(gè)分析批。

1.2.2 正確度評價(jià)挑選20例健康體檢者的EDTA-K2抗凝靜脈全血標(biāo)本，在4d時(shí)間內(nèi)，每天檢測5份樣品，分別使用以下方法進(jìn)行檢測，試驗(yàn)設(shè)計(jì)遵從盲法原則。

1.2.2.1 邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細(xì)胞分析儀檢測取標(biāo)本混勻后，嚴(yán)格按照分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作手冊和實(shí)驗(yàn)室SOP文件在儀器上進(jìn)行分析，所有標(biāo)本均采用手動模式進(jìn)行測試；測試完畢后將樣品送至深圳邁瑞公司溯源實(shí)驗(yàn)室，使用參考方法對樣品進(jìn)行盲測。

1.2.2.2 邁瑞標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室參考方法檢測WBC/ RBC計(jì)數(shù)參考方法：參照ICSH 1994推薦的參考方法[3]，使用單通道、阻抗原理的半自動電子計(jì)數(shù)儀（Coulter Z2粒子計(jì)數(shù)儀）分別對WBC/RBC進(jìn)行計(jì)數(shù)，通過重疊校準(zhǔn)對結(jié)果進(jìn)行了校正；PLT計(jì)數(shù)參考方法：參照ICSH2001推薦的參考方法[4]，使用CD41-FITC和CD61-FITC標(biāo)記血小板，使用Bricyte E6流式細(xì)胞儀檢測PLT/RBC比值，再乘以RBC數(shù)值得到PLT計(jì)數(shù)值；HGB檢測參考方法：參照CLSI H15-A3標(biāo)準(zhǔn)[5]，使用氫化高鐵血紅蛋白法對血紅蛋白進(jìn)行測量；HCT檢測參考方法：參照CLSI H7-A3標(biāo)準(zhǔn)[6]，使用微量壓積離心法測量PCV，沒有修正殘留血漿。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)參照行標(biāo)的要求，使用Excel 2013進(jìn)行精密度和正確度數(shù)據(jù)整理和計(jì)算；使用analyse-it(v4.20)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行正確度評價(jià)中配對t-檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)分析，并繪制Bland-Altman偏差散點(diǎn)圖。計(jì)量數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度結(jié)果通過三個(gè)水平質(zhì)控均值，計(jì)算其不同濃度水平處的標(biāo)準(zhǔn)差Sclaim值用于驗(yàn)證值V的計(jì)算。精密度檢測結(jié)果顯示各參數(shù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不精密度結(jié)果（Sl）小于其計(jì)算的驗(yàn)證值（V），說明實(shí)驗(yàn)室內(nèi)BC-6800儀器通過廠家精密度聲明的驗(yàn)證。見表1。

2.2 正確度結(jié)果將20例新鮮血樣品分別使用BC-6800及參考方法各檢測2次，計(jì)算檢測結(jié)果的平均偏差，并使用analyse-it（v4.20）統(tǒng)計(jì)軟件對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行配對t檢驗(yàn)分析，計(jì)算檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量t以及P值，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明BC-6800與參考方法在檢測外周血WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)時(shí)均表現(xiàn)為P＞0.05，故差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。廠家預(yù)期BC-6800與參考方法之間無明顯偏差，即按零值計(jì)算各參數(shù)廠家聲明驗(yàn)證限（CI99%），結(jié)果表明各參數(shù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)偏倚值均在廠家聲明的驗(yàn)證限之內(nèi)，說明BC-6800檢測結(jié)果與參考方法結(jié)果一致。具體結(jié)果詳見表2。各參數(shù)Bland-Altman偏差散點(diǎn)圖如圖1所示。

圖1 正確度性能驗(yàn)證Bland-Altman偏差散點(diǎn)圖

表1 精密度檢測結(jié)果

表2 正確度檢測結(jié)果

3 討論

邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血液細(xì)胞分析儀是深圳邁瑞公司2011年推出的一款中高端五分類血液細(xì)胞分析儀，可單機(jī)使用也可以連接到軌道上形成流水線，極大地提升檢驗(yàn)效率。該分析儀以含二次鞘流的半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞術(shù)、鞘流電阻抗檢測法和核酸熒光染色等先進(jìn)技術(shù)并完美融合了SF-Cube三維算法分析技術(shù)[7]，可對血液中的多種組分進(jìn)行定量分析，而且同系列儀器還可對體液進(jìn)行定量檢測[8]，可滿足客戶的多種需求。作為新的血細(xì)胞分析儀，在投入臨床使用前對其進(jìn)行性能驗(yàn)證十分必要，我們也注意到有部分醫(yī)院對BC-6800有做過較為全面的驗(yàn)證或研究[9-11]，但較少有比較深入的對精密度及正確度進(jìn)行驗(yàn)證。

臨床檢驗(yàn)定量測定項(xiàng)目有兩項(xiàng)重要的性能特征，一項(xiàng)是精密度，以標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)表示；另一項(xiàng)是正確度，代表的是系統(tǒng)誤差，以偏倚表示。衛(wèi)計(jì)委新發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是制定重復(fù)性試驗(yàn)和方法比對試驗(yàn)或測量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的試驗(yàn)方案，為臨床實(shí)驗(yàn)室的精密度和正確度性能驗(yàn)證提供了參考依據(jù)。新的檢測系統(tǒng)在正式用來檢測病人樣品、發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告前，實(shí)驗(yàn)室要對系統(tǒng)的操作分析性能作實(shí)驗(yàn)予以證實(shí)，因此當(dāng)已確認(rèn)的系統(tǒng)進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)室時(shí)，臨床實(shí)驗(yàn)室首次要做的最基礎(chǔ)的工作就是進(jìn)行精密度和正確度的性能驗(yàn)證。通過重復(fù)性試驗(yàn)方案來評價(jià)隨機(jī)誤差是否滿足廠商聲明的精密度要求；通過方法比對或測量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)試驗(yàn)方案來評價(jià)檢測系統(tǒng)的系統(tǒng)誤差，即正確度驗(yàn)證[12]。

國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）和美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）近年來發(fā)布了很多標(biāo)準(zhǔn)或指南用于定量程序的驗(yàn)證和確認(rèn)[13]。關(guān)于精密度和正確度的驗(yàn)證方法，分別在ICSH1994、ICSH2014中有詳細(xì)的介紹，在CLSI H26、CLSI EP15、EP05、EP09等標(biāo)準(zhǔn)/指南中也提供了可供參照的方法。本次發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)CLSI EP15-A2中精密度和正確度的評價(jià)方法[14]進(jìn)行制定[15]，用于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室用戶對選定測量程序的驗(yàn)證和認(rèn)定。

該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)提供了一種精密度驗(yàn)證方案，基于5d 2個(gè)以上水平樣品5個(gè)分析批的定量檢測數(shù)據(jù)，計(jì)算實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度結(jié)果（標(biāo)準(zhǔn)差SD和/或變異系數(shù)CV%），并將其與廠家聲明的精密度進(jìn)行對比驗(yàn)證。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明BC-6800全自動血細(xì)胞分析儀上不同水平的質(zhì)控品各檢測參數(shù)的室內(nèi)不精密度均小于各參數(shù)廠家精密度聲明及其計(jì)算的驗(yàn)證值，并且三個(gè)水平質(zhì)控品的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)的室內(nèi)不精密度CV%均低于美國臨床實(shí)驗(yàn)室管理法規(guī)（CLIA’88）指標(biāo)的1/4，說明本實(shí)驗(yàn)室的BC-6800具備良好的精密度性能。

該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)提供了兩種正確度驗(yàn)證方案，第一種方法為分析具有指定值的參考物質(zhì)，推薦的參考物質(zhì)包括：⑴具有互換性的有證參考物質(zhì)；⑵具有溯源性及互換性的正確度驗(yàn)證物質(zhì)，并且推薦至少選擇2個(gè)濃度水平參考物質(zhì)，在3~5d時(shí)間內(nèi)每批進(jìn)行2次重復(fù)測定，然后計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。由于本實(shí)驗(yàn)室缺乏定值的血細(xì)胞分析參考物質(zhì)，因此參考了第二種使用患者樣品的正確度驗(yàn)證方案進(jìn)行正確度的性能驗(yàn)證。行標(biāo)中提到“使用患者樣品的正確度驗(yàn)證方案中比較方法首選是參考方法”，因此本實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室，該實(shí)驗(yàn)室于2009年6月獲得中國合格評定國家認(rèn)可委員會CNAS認(rèn)可（CNAS L4090），符合ISO/IEC 17025：2005檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力通用要求（CNAS-CL01《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的認(rèn)可準(zhǔn)則》）的要求，具備承擔(dān)認(rèn)可證書所列的校準(zhǔn)服務(wù)能力。由其對選定的新鮮血樣品中的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)進(jìn)行參考方法定值。WBC/ RBC分別由Z2粒子計(jì)數(shù)儀法進(jìn)行定值；HGB由氰化高鐵血紅蛋白法進(jìn)行定值；HCT由微量壓積離心法進(jìn)行定值；PLT則由流式細(xì)胞儀法進(jìn)行定值[10]。此方法得到的是真正的“偏倚”，代表了深圳邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細(xì)胞分析儀真正的系統(tǒng)誤差，本試驗(yàn)數(shù)據(jù)說明BC-6800與參考方法之間具有良好的一致性。

綜上所述，BC-6800全自動血細(xì)胞分析儀精密度和正確度均通過廠家聲明的驗(yàn)證，可以用來檢測臨床血液標(biāo)本并發(fā)報(bào)告。此外，行標(biāo)中要求在進(jìn)行患者樣品的正確度驗(yàn)證時(shí)，其濃度水平應(yīng)覆蓋檢測方法的可報(bào)告范圍，但是考慮到實(shí)際操作的可行性以及參考方法檢測的限制，如高值WBC或高值PLT會干擾HGB檢測等問題，本次試驗(yàn)主要以健康體檢患者標(biāo)本進(jìn)行正確度性能驗(yàn)證，而對于異常計(jì)數(shù)值樣本的檢測還有待進(jìn)一步的探討。

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