聶益軍，呂小林，林慧，肖婕，崔琪，萬臘根

(南昌大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，江西南昌330006)

·論著·

江西地區(qū)455例地中海貧血的篩查結果分析

聶益軍，呂小林，林慧，肖婕，崔琪，萬臘根

(南昌大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，江西南昌330006)

目的了解和探討江西地區(qū)α、β地中海貧血基因突變類型的分布情況，為江西地區(qū)的基因診斷、遺傳咨詢提供參考依據(jù)。方法回顧性分析南昌大學第一附屬醫(yī)院2015年6月-2016年5月455例人群（包括191例疑診地中海貧血患者及264例孕婦），進行α、β地中海貧血基因篩查，對α、β地中海貧血基因的分布概況及基因型頻率進行統(tǒng)計分析。結果455例檢測人群中，檢測出α地中海貧血基因缺陷患者50例（10.99%），β-地中海貧血基因缺陷患者68例（14.95%）。50例α-地中海貧血主要是-SEA基因缺失、-α3.7基因缺失及-SEA/-α3．7基因缺失3種類型，其頻率分別為-SEA基因缺失雜合子33例（66.00%），-α3.7基因缺失雜合子7例（14.00%），-SEA/-α3．7基因缺失雜合子4例（8.00%）；68例β-地中海貧血中，包括7種基因突變類型，其中前3位基因型分別為IVS-Ⅱ-654(C→T)（42.64%），CD41-42(-TCTT)（26.47%）、CD17(A→T)（19. 12%）。結論雖然江西省地區(qū)不是地中海貧血的高發(fā)區(qū)，但仍應加強地中海貧血分子流行病學的調(diào)查、產(chǎn)前診斷和遺傳咨詢，這對促進優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)有重要的意義。

江西地區(qū)；地中海貧血；基因類型分析；回顧性研究

地中海貧血（Thalassemia）是一種常見的單基因遺傳性溶血性血液疾病，最早發(fā)現(xiàn)于意大利等地中海區(qū)域，亦稱海洋性貧血[1]。中國常見于東南沿海、西南地區(qū)以及臺灣地區(qū)，其中廣西人群中地中海貧血基因攜帶率為12.22%～23.02%[2-4]?，F(xiàn)有研究表明，江西地區(qū)α地中海貧血也存在一定的檢出率[5]，但目前為止，未見江西地區(qū)α、β檢出率的整體報道，因此，本研究對南昌大學第一附屬醫(yī)院血液科191例疑診地中海貧血患者及婦產(chǎn)科264例孕婦進行α、β地中海貧血基因篩查，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1．1一般資料2015年6月至2016年5月在南昌大學第一附屬醫(yī)院455例人群進行α、β地中海貧血基因篩查，其中191例疑診地中海貧血的血液科患者、264例地中海貧血基因篩查的孕婦；男性89例，女性366例；年齡從出生1d～82歲。

1．2儀器與試劑Sysmex XN2000全自動血細胞分析儀(Sysmex公司)，DYY8B電泳儀(北京六一公司)，ABI2700基因擴增儀(ABI公司)，YN-H16恒溫雜交儀（深圳亞能生物技術公司），α、β地中海貧血基因檢測試劑盒購自深圳亞能生物科技有限公司。

1.3 檢測方法

1.3.1 標本采集及DNA提取擴增采用真空無菌EDTA抗凝管，抽取受檢者外周靜脈血標本3ml。其中血液科患者以平均紅細胞體積(MCV)＜80fL或平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)＜27pg為地貧表型陽性的篩查指標[6，7]；婦產(chǎn)科孕婦以自愿篩查原則參與調(diào)查。外周血基因組DNA的提取采用廠家提供的全血基因組DNA提取試劑盒，并用定量分析儀檢測其濃度和純度合格后進行PCR擴增。

1.3.2 α地中海貧血缺失型基因的檢測基因采用跨越斷點PCR方法(Gap-PCR)對中國人常見的3種缺失型α地中海貧血基因(--SEA、-α3.7、-α4.2)進行檢測，取待檢DNA樣品4.0μl加入總反應體系，按以下條件擴增：96℃預變性5min；然后98℃變性45s，64℃退火90s，72℃延伸3min，35個循環(huán)；72℃延伸5min。擴增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察結果。

1.3.3 α地中海貧血非缺失型及β地中海貧血點突變基因的檢測應用PCR和DNA反向點雜交檢測α-地中海貧血αQS、αCS、αWS三種點突變類型，并檢測中國人常見的17種β地中海貧血基因突變位點，包括9種β0起始密碼子：(ATG→AGG)、CD41-42(-TCTT)、CD31(-C)、CD14-15(+G)、CD17 (A→T)、CD71-72(+A)、IVS-Ⅰ-1(G→T)、CD43(G→T)、CD27-28(+C)；及8種β+：IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、-29(A→G)、-30(T→C)、-32(C→A)、CAP+ 40-43(-AAAC)、IVS-Ⅰ-5(G→C)、βE。

PCR擴增參數(shù)：94℃預變性5min；然后94℃變性60s，55℃退火30s，72℃延伸60s，35個循環(huán)；72℃延伸5min。電泳分析PCR擴增產(chǎn)物，將擴增產(chǎn)物與特異性標記探針的RDB膜條進行反向雜交，經(jīng)洗膜、顯色、漂洗后觀察結果。

1.4 統(tǒng)計學分析用SPSS 15.0統(tǒng)計，計數(shù)資料用百分率(%)表示。

2 結果

2.1 篩查概況455例檢測人群中，檢測出α地中海貧血基因患者50例（10.99%），β-地中海貧血基因患者68例（14.95%）。264例孕婦檢出地中海貧血表型48例（18.18%），其中α地中海貧血基因23例（8.71%），β-地中海貧血基因25例（9.47%）。血液科191例疑診地中海貧血患者中，檢出地中海貧血表型70例（36.65%），其中α地中海貧血基因27例（14.14%），β地中海貧血基因43例（22.51%），具體結果見表1。

2.2 50例α地中海貧血基因檢測結果50例α-地中海貧血中，-SEA/α基因缺失雜合子33例，-α3.7/α基因缺失雜合子7例，-SEA/-α3.7基因缺失雜合子4例，-α4.2/α基因缺失雜合子1例。比例占前三的分別為為-SEA/α（66.00%）、-α3.7/α（14.00%）、-SEA/-α3.7（8.00%）。50例α地中海貧血基因檢測結果見表2。

2.3 68例β-地中海貧血基因檢測結果68例β-地中海貧血中，包括7種基因突變類型，基因型包括CD41-42(-TCTT)18例，CD14-15(+G)1例，CD17 (A→T)13例，CD71-72(+A)3例，IVS-Ⅱ-654(C→T) 29例，-28(A→G)1例，βE/CD41-42 1例。前3位基因型分別為IVS-Ⅱ-654(C→T)（29/68），CD41-42 (-TCTT)（18/68）、CD17(A→T)（13/68），具體結果見表3。

表1 地中海貧血篩查概況

表2 50例α地中海貧血基因檢測結果

3 討論

地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一，是世界上最常見和發(fā)病率最高的遺傳性溶血性貧血性疾病，也是危害最嚴重的血紅蛋白病之一[8，9]。人體內(nèi)的血紅蛋白由四個亞基構成，分別為兩個α亞基和兩個β亞基。按照人α－地貧基因缺失或α－地貧基因點突變而造成α珠蛋白鏈合成障礙而造成的貧血，可將α－地貧分為缺失型α－地貧和非缺失型α－地貧兩大類型；而按照β－珠蛋白基因點突變而造成β－珠蛋白肽鏈合成減少或缺失產(chǎn)生的溶血性貧血均稱為β－地貧。地中海貧血廣泛分布在全世界沿海地區(qū)。中國常見于東南沿海、西南地區(qū)以及臺灣地區(qū)[2-4]。游雪云等[5]曾對江西省地區(qū)孕婦α-地中海貧血基因進行篩查，發(fā)生率為1.59%，且以缺失型α－地中海貧血為主，但未見江西地區(qū)β-地中海貧血基因型的報道。本文首次整體報道了江西地區(qū)α及β-地中海貧血基因的概況及分布頻率。

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)α-地中海貧血的基因突變型至少有81種，其中46種點突變，35種缺失突變[10]。研究發(fā)現(xiàn)中國地區(qū)常見的3種α-地貧主要由--SEA(東南亞缺失)、-α3.7缺失(右缺失)、-α4.2缺失(左缺失)和αCS、αQS、αWS三種突變引起，本次研究發(fā)現(xiàn)，α－地中海貧血基因檢出率為10.99%，是由于其中包括血液科疑診地中海貧血患者，而使檢出率顯著高于篩查人群。同時本次研究也發(fā)現(xiàn)，α－地中海貧血以-SEA/α基因缺失雜合子為主，其次為-α3.7/ α，與成明[11]、鐘田雨[12]等報道相似。另發(fā)現(xiàn)-SEA/α合并-28/β一例，同時檢測出αCS/α、αWS/α各一例。

β-地中海貧血基因突變類型至少有186種，主要為點突變。每個民族或群體有特定的突變類型[13]，本試劑盒針對中國人常見的17種β-地中海貧血基因突變位點進行檢測，調(diào)查發(fā)現(xiàn)的基因型包括CD41-42(-TCTT)18例，CD14-15(+G)1例，CD17(A→T)13例，CD71-72(+A)3例，IVS-Ⅱ-654 (C→T)29例，-28(A→G)1例，βE/CD41-42 1例。前3位基因型分別為IVS-Ⅱ-654(C→T)（42.64%），CD41-42(-TCTT)（26.47%）、CD17(A→T)（19.12%），與羅娟莉等[14]報道的福建閩北地區(qū)β-地中海貧血基因類型前3位一致。而與李敏清等報道的廣西各民族[15]、杜偉等報道的重慶地區(qū)[16]地中海貧血基因型分布不同，說明β-地中海貧血基因點突變在中國各地區(qū)或各民族之間有明顯的遺傳特性。

雖然江西省地區(qū)不是地中海貧血的高發(fā)區(qū)，但本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)孕婦的地中海貧血基因攜帶率占18.18%，因此應加強地中海貧血分子流行病學的調(diào)查、產(chǎn)前診斷和遺傳咨詢，對促進優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)有重要的意義。

表3 68例β-地中海貧血基因檢測結果

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Analysis of the Screening 455 Thalassemia Patients in Jiangxi Region

NIE Yijun，LV Xiaolin，LIN Hui，XIAO Jie，CUI Qi，WAN Lagen.Department of Clinical Laboratory，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang 330006，China.

Objective To investigate the distribution of α，β-thalassemia gene mutation in Jiangxi region provides references for gene diagnosis and genetic counseling.Methods A retrospective analysis had been made in 455 cases，including 191 suspected thalassemia patients and 264 pregnant women，were recruited in the First Affiliated Hospital of Nanchang University from June 2015 to May 2016.The distribution and genotype frequencies of α，β-thalassemia gene mutation were analyzed.Results 50 cases (10.99%)and 68 cases(14.95%)were diagnosed as α-thalassemia and β-thalassemia from the total 455 cases，respectively.The main types of the 50 cases of α-thalassemia were deletion-SEA，-α3.7 genes and-SEA/-α3.7，the distribution frequencies of which were 33 cases(66.00%)，7 cases(14.00%)and 4 cases(8.00%)，respectively；seven kinds of gene mutations were found in 68 cases β-thalassemia patient，the top three number of which were IVS-Ⅱ-654(C→T)(42.64%)，CD41-42(-TCTT)(26.47%)，CD17(A→T)(19.12%).Conclusion Although the incidence of thalassemia is not high in Jiangxi area，molecular epidemiology，genetic counseling and prenatal diagnosis should still enhance application research of thalassemia diagnosis，to promote pre-potency and improve population quality.

∶Jiangxi region；Thalassemia；Gene mutation distribution；Retrospective analysis

R556.6+2，Q523

A

1674-1129(2017)04-0458-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.002

2017-02-21；

2017-04-29)

國家自然科學基金，編號Nos：81660144

聶益軍，男，1973年生，學士，醫(yī)學檢驗，副主任技師，主要從事分子診斷及臨床檢驗診斷等方面研究。

萬臘根，男，1964年生，主要從事血液分子學及實驗室管理，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導師，E-mail：564604485@qq.com。