郭玲+李蓮娣+尹國(guó)華

[摘要] 目的 探究趨化因子受體4的表達(dá)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與卵巢癌發(fā)生的相關(guān)性。方法 研究應(yīng)用免疫組化法SABC法對(duì)卵巢癌中的CXCR4和VEGF表達(dá)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，分析兩者在卵巢癌轉(zhuǎn)移、侵襲的關(guān)系，為早期診斷、治療卵巢癌提供具有重要參考價(jià)值的生物學(xué)指標(biāo)。結(jié)果 CXCR4、VEGF在卵巢癌組織中表達(dá)水平顯著高于良性、正常組織水平（P<0.05）；CXCR4、VEGF表達(dá)水平可能和腹膜轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)正相關(guān)；CXCR4、VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 CXCR4和VEGF在卵巢癌組織中的陽(yáng)性率較高，且兩者呈正相關(guān)，提示CXCR4、VEGF在卵巢癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。

[關(guān)鍵詞] 趨化因子受體4；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；卵巢癌；陽(yáng)性表達(dá)率；相關(guān)性

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）13-157-04

[Abstract] Objective To explore the correlation of chemokine receptor 4 expression， vascular endothelial growth factor and ovarian carcinogenesis. Methods Immunohistochemical method and SABC method were used to detect the expression of CXCR4 and VEGF in ovarian cancer to analyze the relationship between metastasis and invasion of ovarian cancer. It provided an important biological indicator for early diagnosis and treatment of ovarian cancer. Results The expression levels of CXCR4 and VEGF in ovarian cancer tissues were significantly higher than those in benign and normal tissues（P<0.05）. The expression levels of CXCR4 and VEGF might be positively related to peritoneal metastasis and lymph node metastasis. The expression levels of CXCR4 and VEGF were positively correlated（P<0.05）. Conclusion The positive rates of CXCR4 and VEGF in ovarian cancer tissues are higher， and both of them are positively correlated. These findings suggest that CXCR4 and VEGF play an important role in the development and metastasis of ovarian cancer.

[Key words] Chemokine receptor 4； Vascular endothelial growth factor； Ovarian cancer； Positive expression rate； Correlation

腫瘤的發(fā)生是多基因、多階段和多因素的結(jié)果，受細(xì)胞內(nèi)由多種因素所控制[1]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2]：趨化因子受體CXCR4是近年備受關(guān)注的受體，其與配體SDF-1相互作用在腫瘤的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著一定的作用。除此之外，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）也是一種和腫瘤血管生長(zhǎng)相關(guān)的因素，其參與了腫瘤血管的生長(zhǎng)過(guò)程，同時(shí)其可以促進(jìn)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞趨化因子[3-4]。本研究應(yīng)用免疫組化法SABC法對(duì)卵巢癌中的CXCR4和VEGF表達(dá)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，分析兩者在卵巢癌轉(zhuǎn)移、侵襲的關(guān)系，為早期診斷、治療卵巢癌提供具有重要參考價(jià)值的生物學(xué)指標(biāo)。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

入組對(duì)象選擇2014年2月～2015年4月之間，在我院收治的32例卵巢上皮癌患者，病理確診確診為卵巢漿液性或者黏液性囊腺癌，臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期共15例，Ⅲ～Ⅳ期共17例；有腹膜轉(zhuǎn)移共7例，無(wú)腹膜轉(zhuǎn)移共25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共15例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共17例。其中研究另選取同期在我院收治的卵巢上皮性良性腫瘤的患者27例，同時(shí)選擇術(shù)后病理為正常的卵巢組織患者35例。

1.2 患者入組標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

入組標(biāo)準(zhǔn)[5]：入組患者術(shù)前均未經(jīng)過(guò)化療及放療等治療；患者均經(jīng)病理確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者伴有嚴(yán)重的精神障礙，不能配合治療。

1.3 方法

1.3.1 試劑 SP免疫組化試劑盒、兔抗人CXCR4多克隆抗體（上海常斤生物科技有限公司），VEGF兔抗人單克隆抗體（上海煊翎生物科技有限公司）。

1.3.2 研究方法 研究選用公司配置的陽(yáng)性切片作為對(duì)照，應(yīng)用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。染色過(guò)程嚴(yán)格按著試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。石蠟切片脫水后應(yīng)用3%的H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶活性，然后采用高溫高壓修復(fù)法抗原修理，接著向其中加入5%的BSA封閉液，降低背景染色，加入CXCR4兔抗人多克隆抗體（濃度為1∶100）和VEGF兔抗人單克隆抗體（濃度為1∶100），儲(chǔ)存在4℃的冰箱中，加入生物標(biāo)記素的二抗，再次加入SABC后，滴加DAB溶液顯色，最后行復(fù)染，脫水，二甲苯透明和封固等步驟。

1.4 觀察指標(biāo)和結(jié)果判定

觀察標(biāo)準(zhǔn)[6]：（1）觀察卵巢組織中的VEGF、CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)率；（2）觀察VEGF、CXCR4 蛋白表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性；（3）觀察VEGF、CXCR4之間的關(guān)系[7]。

結(jié)果判定[7]：CXCR4陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，VEGF陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒。按著染色強(qiáng)度評(píng)分：若顯示無(wú)色，評(píng)價(jià)為0分，呈現(xiàn)淡黃色，評(píng)價(jià)1分，呈現(xiàn)棕黃色，評(píng)價(jià)2分，呈現(xiàn)棕褐色，評(píng)價(jià)為3分；按著陽(yáng)性細(xì)胞的比例劃分：陽(yáng)性細(xì)胞率<5%，評(píng)價(jià)1分，6%<陽(yáng)性細(xì)胞率<50%，評(píng)價(jià)為2分，51%<陽(yáng)性細(xì)胞率<75%，評(píng)價(jià)為3分，陽(yáng)性細(xì)胞率在75%以上，評(píng)價(jià)為4分。以上兩項(xiàng)結(jié)果相乘，得分0～2為陰性（-），得分3～4為弱陽(yáng)性（+），得分5～8為陽(yáng)性（++），得分9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將結(jié)果數(shù)據(jù)錄入SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，VEGF、CXCR4的蛋白在卵巢組織中的表達(dá)情況計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法檢測(cè)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，VEGF、CXCR4之間的關(guān)系采用Spearman進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析。

2 結(jié)果

2.1 卵巢組織中的VEGF、CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)率

VEGF在卵巢良性組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為51.85%，在惡性組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為100.00%，組間差別顯著（χ2=16.596，P=0.000），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；CXCR4在卵巢良性組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為44.44%，在惡性組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為100%，組間差別顯著（χ2=19.859，P=0.000），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 VEGF、CXCR4 蛋白表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性

CXCR4的蛋白表達(dá)與組織類(lèi)型、臨床分期無(wú)相關(guān)性（P>0.05），而和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有正相關(guān)（r=0.795，P<0.05），同時(shí)和腹膜轉(zhuǎn)移也具有正相關(guān)（r=0.746，P<0.05）；VEGF的蛋白表達(dá)與組織類(lèi)型無(wú)相關(guān)性（P>0.05），但是和臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹膜轉(zhuǎn)移均呈現(xiàn)正相關(guān)（r=0.653、0.689、0.729，P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 VEGF、CXCR4之間的相關(guān)性

應(yīng)用Spearman關(guān)聯(lián)性分析，結(jié)果顯示VEGF、CXCR4蛋白表達(dá)水平之間的相關(guān)系數(shù)為4.526，提示了VEGF、CXCR4蛋白表達(dá)水平之間呈正相關(guān)（P=0.022）。

3 討論

相關(guān)資料顯示[8]，腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程是多因素參與的，腫瘤的浸潤(rùn)和侵襲則是先決條件，血管的形成是給予腫瘤細(xì)胞提供物質(zhì)代謝的窗口，進(jìn)而促進(jìn)轉(zhuǎn)移形成。VEGF屬于胚胎期在血管形成中發(fā)揮重要作用的因子，由于腫瘤所需的營(yíng)養(yǎng)均來(lái)自血流的供應(yīng)，而VEGF可以刺激血管內(nèi)皮生產(chǎn)、分裂，并且提高了血管的通透性，使血漿蛋白外流，降解了細(xì)胞外基質(zhì)，給予腫瘤細(xì)胞提供了豐富的血供[9]。CXCR4是一種G蛋白偶聯(lián)受體，其具有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，參與了諸多正常和病理過(guò)程，CXCR4和SDF-1的特異性表達(dá)在其中發(fā)揮著重要作用[10]。相關(guān)研究報(bào)道[11]：在乳腺癌、非小細(xì)胞癌以及胃癌中均出現(xiàn)CXCR4和SDF-1的特異性蛋白表達(dá)，其參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程。卵巢癌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)均受CXCR4、SDF-1蛋白表達(dá)的影響，其可以誘發(fā)細(xì)胞和肌蛋白的假偽足形成、定向遷移等[12]。

謝頌平等[13]報(bào)道：VEGF和CXCR4在卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于卵巢良性組織（P<0.05）。其結(jié)果和本研究結(jié)果相似，結(jié)果表1顯示兩種因子在卵巢癌的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于卵巢良性腫瘤、正常卵巢組織（P<0.05），其可以說(shuō)明了CXCR4、VEGF可能促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程，促進(jìn)了腫瘤組織的新血管生成相關(guān)。，同時(shí)提示了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展和SDF-1/CXCR4的異常表達(dá)有著密切的關(guān)系，發(fā)揮著不可缺少的生理作用，因此在臨床診斷中具有一定的意義價(jià)值。單慶蓮等[14]表示VEGF可以促進(jìn)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增生，促進(jìn)其向特定的器官發(fā)生轉(zhuǎn)移。表2可以看出CXCR4、VEGF表達(dá)水平可能和腹膜轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示了VEGF可以誘導(dǎo)趨化因子CXCR4促進(jìn)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增生，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)移路徑，在臨床診斷時(shí)可根據(jù)患者有無(wú)腹膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移來(lái)判斷CXCR4、VEGF表達(dá)水平，同時(shí)兩種因子可以作為判斷卵巢癌惡性程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)重要指標(biāo)。其結(jié)果和石結(jié)武等[15]研究結(jié)果相似。研究中顯示了VEGF、CXCR4蛋白表達(dá)水平之間呈正相關(guān)，說(shuō)明了二者之間構(gòu)成一條循環(huán)通路，對(duì)各自的生物學(xué)功能起到了促進(jìn)作用，兩者在腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中有著一定的協(xié)同作用，并且二者也相互影響，對(duì)各自的深生物學(xué)有著一定的加強(qiáng)作用。

綜上所述，CXCR4和VEGF在卵巢癌組織中的陽(yáng)性率較高，且兩者呈正相關(guān)，提示CXCR4、VEGF在卵巢癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。

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（收稿日期：2017-05-11）